DAPI (pronunciado 'DAPPY', / ˈdæpiː /), o 4 ′, 6-diamidino-2-fenilindol , es una tinción fluorescente que se une fuertemente a regiones ricas en adenina - timina en el ADN . Se utiliza ampliamente en microscopía de fluorescencia . Como DAPI puede atravesar una membrana celular intacta , se puede utilizar para teñir células tanto vivas como fijas , aunque pasa a través de la membrana de manera menos eficiente en células vivas y, por lo tanto, proporciona un marcador de la viabilidad de la membrana.
Nombres | |
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Nombre IUPAC 2- (4-amidinofenil) -1 H -indol-6-carboxamidina | |
Otros nombres 4 ', 6-diamidino-2-fenilindol | |
Identificadores | |
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Modelo 3D ( JSmol ) | |
CHEBI | |
CHEMBL | |
ChemSpider | |
PubChem CID | |
Tablero CompTox ( EPA ) | |
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Propiedades | |
C 16 H 15 N 5 | |
Masa molar | 277,331 g · mol −1 |
Salvo que se indique lo contrario, los datos se proporcionan para materiales en su estado estándar (a 25 ° C [77 ° F], 100 kPa). | |
verificar ( ¿qué es ?) | |
Referencias de Infobox | |
Historia
DAPI se sintetizó por primera vez en 1971 en el laboratorio de Otto Dann como parte de una búsqueda de fármacos para tratar la tripanosomiasis . Aunque no tuvo éxito como fármaco, una investigación adicional indicó que se unió fuertemente al ADN y se volvió más fluorescente cuando se unió. Esto llevó a su uso para identificar ADN mitocondrial en ultracentrifugación en 1975, el primer uso registrado de DAPI como tinción de ADN fluorescente. [1]
La fuerte fluorescencia cuando se une al ADN llevó a la rápida adopción de DAPI para la tinción fluorescente de ADN para microscopía de fluorescencia . Su uso para detectar ADN en células de plantas , metazoos y bacterias y partículas de virus se demostró a fines de la década de 1970, y la tinción cuantitativa del ADN dentro de las células se demostró en 1977. El uso de DAPI como tinción de ADN para citometría de flujo también se demostró en esta época. . [1]
Propiedades de fluorescencia
Cuando se une a ADN de doble hebra, DAPI tiene un máximo de absorción a una longitud de onda de 358 nm ( ultravioleta ) y su máximo de emisión es de 461 nm (azul). Por lo tanto, para microscopía de fluorescencia, DAPI se excita con luz ultravioleta y se detecta a través de un filtro azul / cian. El pico de emisión es bastante amplio. [2] DAPI también se unirá al ARN , aunque no es tan fuertemente fluorescente. Su emisión cambia a alrededor de 500 nm cuando se une al ARN. [3] [4]
La emisión azul de DAPI es conveniente para los microscopistas que desean utilizar múltiples tinciones fluorescentes en una sola muestra. Existe cierta superposición de fluorescencia entre DAPI y moléculas fluorescentes verdes como la fluoresceína y la proteína fluorescente verde (GFP), pero el efecto de esto es pequeño. El uso de la desmezcla espectral puede explicar este efecto si se requiere un análisis de imagen extremadamente preciso.
Fuera de la microscopía de luz de fluorescencia analítica, DAPI también es popular para el etiquetado de cultivos celulares para detectar el ADN de Mycoplasma o virus contaminantes . Las partículas de virus o micoplasma marcadas en el medio de crecimiento emiten fluorescencia una vez que se tiñen con DAPI, lo que las hace fáciles de detectar. [5]
Modelado de propiedades de absorción y fluorescencia.
Esta sonda fluorescente de ADN se ha modelado eficazmente [6] utilizando la teoría funcional de densidad dependiente del tiempo , junto con la versión IEF del modelo continuo polarizable . Este modelado mecánico-cuántico ha racionalizado el comportamiento de absorción y fluorescencia dado por la unión e intercalación de surcos menores en la bolsa de ADN, en términos de una flexibilidad estructural y polarización reducidas.
Células vivas y toxicidad
DAPI se puede utilizar para la tinción de células fijas. La concentración de DAPI necesaria para la tinción de células vivas es generalmente muy alta; rara vez se usa para células vivas. [7] Está etiquetado como no tóxico en su MSDS [8] y aunque no se demostró que tenga mutagenicidad en E. coli , [9] está etiquetado como mutágeno conocido en la información del fabricante. [2] Como es un pequeño compuesto que se une al ADN, es probable que tenga algunos efectos cancerígenos y se debe tener cuidado al manipularlo y desecharlo.
Alternativas
Las tinciones de Hoechst son similares a DAPI en que también son tinciones de ADN azul fluorescente que son compatibles con aplicaciones de células vivas y fijas, además de ser visibles utilizando la misma configuración de filtro de equipo que para DAPI.
Referencias
- ↑ a b Kapuscinski, J. (septiembre de 1995). "DAPI: una sonda fluorescente específica de ADN". Biotecnología. Histochem . 70 (5): 220–233. doi : 10.3109 / 10520299509108199 . PMID 8580206 .
- ^ a b Invitrogen, tinción de ácido nucleico DAPI Archivado el 6 de marzo de 2009 en la Wayback Machine . consultado el 8 de diciembre de 2009.
- ^ Scott Prahl, DAPI . consultado el 8 de diciembre de 2009.
- ^ Kapuscinski, J (2017). "Interacciones de ácidos nucleicos con tintes fluorescentes: propiedades espectrales de complejos condensados" . Revista de histoquímica y citoquímica . 38 (9): 1323-1329. doi : 10.1177 / 38.9.1696951 . PMID 1696951 .
- ^ Russell, WC; Newman, Carol; Williamson, DH (1975). "Una técnica citoquímica sencilla para la demostración de ADN en células infectadas con micoplasmas y virus". Naturaleza . 253 (5491): 461–462. Código bibliográfico : 1975Natur.253..461R . doi : 10.1038 / 253461a0 . PMID 46112 . S2CID 25224870 .
- ^ Biancardi, Alessandro; Biver, Tarita; Secco, Fernando; Mennucci, Benedetta (2013). "Una investigación de las propiedades fotofísicas de DAPI intercalado e intercalado de surco menor a través de herramientas de mecánica cuántica y espectroscópicas". Phys. Chem. Chem. Phys . 15 (13): 4596–603. Código Bibliográfico : 2013PCCP ... 15.4596B . doi : 10.1039 / C3CP44058C . PMID 23423468 .
- ^ Zink D, Sadoni N, Stelzer E (2003). "Visualización de cromatina y cromosomas en células vivas. Por lo general, para la tinción de células vivas se utiliza la tinción de Hoechst. DAPI da una señal más alta en las células fijas en comparación con la tinción de Hoechst, pero en las células vivas se utiliza la tinción de Hoechst". Métodos . 29 (1): 42–50. doi : 10.1016 / S1046-2023 (02) 00289-X . PMID 12543070 .
- ^ FICHA DE DATOS DE SEGURIDAD DE MATERIALES DAPI . kpl.com
- ^ Ohta T, Tokishita S, Yamagata H (2001). "El bromuro de etidio y SYBR Green I mejoran la genotoxicidad de la radiación UV y mutágenos químicos en E. coli ". Mutat. Res . 492 (1–2): 91–7. doi : 10.1016 / S1383-5718 (01) 00155-3 . PMID 11377248 .
Ver también
- Ligando de unión al ADN
- Tinción Hoechst
- Lexitropsina
- Netropsina
- Pentamidina