Las pruebas de detección de antígenos de la malaria son un grupo de pruebas de diagnóstico rápido disponibles comercialmente del tipo prueba rápida de antígenos que permiten un diagnóstico rápido de la malaria por personas que no están capacitadas de otra manera en las técnicas de laboratorio tradicionales para diagnosticar la malaria o en situaciones en las que dicho equipo no está disponible. Actualmente, hay más de 20 pruebas de este tipo disponibles comercialmente (pruebas de productos de la OMS, 2008). El primer antígeno de la malaria adecuado como diana para dicha prueba fue una enzima glucolítica soluble Glutamato deshidrogenasa . [1] [2] [3] Ninguna de las pruebas rápidas es actualmente tan sensible como una gruesa frotis de sangre , ni tan barato. Un inconveniente importante en el uso de todos los métodos actuales de tira reactiva es que el resultado es esencialmente cualitativo. En muchas áreas endémicas de África tropical , sin embargo, la evaluación cuantitativa de la parasitemia es importante, ya que un gran porcentaje de la población dará positivo en cualquier ensayo cualitativo.
Pruebas de detección del antígeno de la malaria. | |
---|---|
Propósito | diagnóstico de malaria ... |
Pruebas de diagnóstico rápido de paludismo basadas en antígenos
La malaria es una enfermedad curable si los pacientes tienen acceso a un diagnóstico temprano y un tratamiento oportuno . Las pruebas de diagnóstico rápido (PDR) basadas en antígenos tienen un papel importante en la periferia de la capacidad de los servicios de salud porque muchas clínicas rurales no tienen la capacidad de diagnosticar la malaria en el lugar debido a la falta de microscopios y técnicos capacitados para evaluar los frotis de sangre. Además, en las regiones donde la enfermedad no es endémica , los técnicos de laboratorio tienen una experiencia muy limitada en la detección e identificación de los parásitos de la malaria. Cada año, un número cada vez mayor de viajeros de zonas templadas visitan países tropicales y muchos de ellos regresan con una infección de malaria. Las pruebas de RDT todavía se consideran complementos de la microscopía convencional , pero con algunas mejoras bien pueden reemplazar al microscopio . Las pruebas son sencillas y el procedimiento se puede realizar in situ en condiciones de campo. Estas pruebas usan sangre venosa o punción en el dedo , la prueba completa toma un total de 15 a 20 minutos y no se necesita un laboratorio. El umbral de detección por estas pruebas de diagnóstico rápido está en el rango de 100 parásitos / µl de sangre en comparación con 5 por microscopía de película gruesa. [4] [5] [6]
pGluDH
Un diagnóstico preciso es cada vez más importante, en vista de la creciente resistencia de Plasmodium falciparum y el alto precio de las alternativas a la cloroquina . La enzima pGluDH no se encuentra en el glóbulo rojo del huésped y fue recomendada como una enzima marcadora para las especies de Plasmodium por Picard-Maureau et al. en 1975. [7] La prueba de la enzima marcadora de malaria es adecuada para el trabajo de rutina y ahora es una prueba estándar en la mayoría de los departamentos que se ocupan de la malaria. Se sabe que la presencia de pGluDH representa la viabilidad del parásito [2] y una prueba de diagnóstico rápido que utilice pGluDH como antígeno tendría la capacidad de diferenciar los organismos vivos de los muertos. En China se ha desarrollado una PDR completa con pGluDH como antígeno y ahora se está sometiendo a ensayos clínicos . [3] Los GluDH son enzimas ubicuas que ocupan un importante punto de ramificación entre el metabolismo del carbono y el nitrógeno. Tanto las enzimas nicotinamida adenina dinucleótido (NAD) [EC 1.4.1.2] como las enzimas GluDH dependientes de nicotinamida adenina dinucleótido fosfato (NADP) [EC 1.4.1.4] están presentes en Plasmodia ; el GluDH dependiente de NAD es relativamente inestable y no es útil para fines de diagnóstico. La glutamato deshidrogenasa proporciona una fuente de carbono oxidable que se utiliza para la producción de energía, así como un portador de electrones reducido, NADH. El glutamato es el principal donante de aminoácidos de otros aminoácidos en reacciones de transaminación posteriores. Las múltiples funciones del glutamato en el equilibrio del nitrógeno lo convierten en una puerta de entrada entre el amoníaco libre y los grupos amino de la mayoría de los aminoácidos. Se publica su estructura cristalina . [8] La actividad GluDH en P.vivax , P.ovale y P. malariae nunca se ha probado, pero dada la importancia de GluDH como enzima de ramificación, cada célula debe tener una alta concentración de GluDH. Es bien sabido que las enzimas con un peso molecular alto (como GluDH) tienen muchas isoenzimas , lo que permite diferenciaciones de cepas (dado el anticuerpo monoclonal correcto ). El huésped produce anticuerpos contra la enzima parásita, lo que indica una baja identidad de secuencia. [1]
Proteína II rica en histidina
La proteína II rica en histidina (HRP II) es una proteína soluble en agua rica en histidina y alanina , que se localiza en varios compartimentos celulares, incluido el citoplasma del parásito. El antígeno es expresado únicamente por trofozoítos de P. falciparum . [9] [10] La HRP II de P. falciparum se ha relacionado con la biocristalización de la hemozoína , una forma cristalina inerte de ferriprotoporfirina IX (Fe (3 +) - PPIX) producida por el parásito. El parásito secreta una cantidad sustancial de HRP II en el torrente sanguíneo del huésped y el antígeno puede detectarse en eritrocitos , suero , plasma , líquido cefalorraquídeo e incluso orina como una proteína soluble en agua secretada. [11] Estos antígenos persisten en la sangre circulante después de que la parasitemia ha desaparecido o se ha reducido considerablemente. Por lo general, después de un tratamiento exitoso, las pruebas basadas en HRP2 tardan alrededor de dos semanas en dar negativo, pero pueden tardar hasta un mes, lo que compromete su valor en la detección de una infección activa. [12] Se notificaron resultados de tira reactiva falsos positivos en pacientes con artritis reumatoide positiva al factor reumatoide . [9] Dado que el HRP-2 es expresado solo por P. falciparum , estas pruebas darán resultados negativos con muestras que contengan solo P. vivax , P. ovale o P. malariae ; Por lo tanto, muchos casos de malaria no causada por P. falciparum pueden diagnosticarse erróneamente como negativos para la malaria (algunas cepas de P. falciparum tampoco tienen HRP II). La variabilidad en los resultados de las PDR basadas en pHRP2 está relacionada con la variabilidad en el antígeno diana. [13]
pLDH
La lactato deshidrogenasa de P. falciparum (PfLDH) es una oxidorreductasa de 33 kDa [EC 1.1.1.27]. [14] Es la última enzima de la vía glucolítica, esencial para la generación de ATP y una de las enzimas más abundantes expresadas por P. falciparum . [15] Plasmodium LDH (pLDH) de P. vivax , P. malariae y P. ovale ) exhiben 90-92% de identidad con PfLDH de P. falciparum . [16] Se ha observado que los niveles de pLDH se reducen en la sangre antes que el HRP2 después del tratamiento. [17] A este respecto, pLDH es similar a pGluDH. Sin embargo, las propiedades cinéticas y las sensibilidades a los inhibidores dirigidos al sitio de unión del cofactor difieren significativamente y son identificables midiendo las constantes de disociación de los inhibidores que difieren hasta 21 veces. [18]
pAldo
La fructosa-bisfosfato aldolasa [EC 4.1.2.13] cataliza una reacción clave en la glucólisis y la producción de energía y es producida por las cuatro especies. [19] La aldolasa de P. falciparum es una proteína de 41 kDa y tiene una similitud de secuencia del 61-68% con las aldolasas eucariotas conocidas . [20] Se ha publicado su estructura cristalina. [21] La presencia de anticuerpos contra p41 en el suero de adultos humanos parcialmente inmunes a la malaria sugiere que p41 está implicado en la respuesta inmunitaria protectora contra el parásito. [22]
Ver también
- Tinción de Romanowsky
Referencias
- ^ a b c Ling IT .; Cooksley S .; Bates PA .; Hempelmann E .; Wilson RJM. (1986). "Anticuerpos contra la glutamato deshidrogenasa de Plasmodium falciparum" (PDF) . Parasitología . 92 (2): 313–324. doi : 10.1017 / S0031182000064088 . PMID 3086819 .
- ^ a b Rodríguez-Acosta A, Domínguez NG, Aguilar I, Girón ME (1998). "Caracterización del antígeno soluble en glutamato deshidrogenasa de Plasmodium falciparum" . Braz J Med Biol Res . 31 (9): 1149-1155. doi : 10.1590 / S0100-879X1998000900008 . PMID 9876282 .
- ^ a b Li Y, Ning YS, Li L, Peng DD, Dong WQ, Li M (2005). "Preparación de un anticuerpo monoclonal contra la glutamato deshidrogenasa de Plasmodium falciparum y establecimiento de ensayo inmunocromatográfico de oro coloidal". Di Yi Jun Yi da Xue Xue Bao = Revista académica de la Primera Facultad de Medicina del PLA . 25 (4): 435–438. PMID 15837649 .
- ^ Warhurst DC, Williams JE (1996). "ACP Broadsheet no 148. Julio de 1996. Diagnóstico de laboratorio de la malaria" . J Clin Pathol . 49 (7): 533–38. doi : 10.1136 / jcp.49.7.533 . PMC 500564 . PMID 8813948 .
- ^ Moody A. (2002). "Pruebas de diagnóstico rápido de parásitos de la malaria" . Clin Microbiol Rev . 15 (1): 66–78. doi : 10.1128 / CMR.15.1.66-78.2002 . PMC 118060 . PMID 11781267 .
- ^ Murray CK, Bennett JW (2008). "Diagnóstico rápido de la malaria" . Interdiscip Perspect Infect Dis . 2009 : 1–7. doi : 10.1155 / 2009/415953 . PMC 2696022 . PMID 19547702 .
- ^ Picard-Maureau A, Hempelmann E, Krämmer G, Jackisch R, Jung A (1975). "Glutathionstatus en Plasmodium vinckei parasitierten Erythrozyten en Abhängigkeit vom intraerythrozytären Entwicklungsstadium des Parasiten". Parasitol Tropenmed . 26 (4): 405–416. PMID 1216329 .
- ^ Werner C, Stubbs MT, Krauth-Siegel RL, Klebe G (2005). "La estructura cristalina de la glutamato deshidrogenasa de Plasmodium falciparum, un objetivo putativo de nuevos fármacos antipalúdicos". J Mol Biol . 349 (3): 597–607. doi : 10.1016 / j.jmb.2005.03.077 . PMID 15878595 .
- ^ a b Iqbal J, Sher A, Rab A (2000). "Ensayo de diagnóstico de inmunocaptura basada en la proteína 2 rica en histidina de Plasmodium falciparum para la malaria: reactividad cruzada con factores reumatoides" . J Clin Microbiol . 38 (3): 1184-1186. doi : 10.1128 / JCM.38.3.1184-1186.2000 . PMC 86370 . PMID 10699018 .
- ^ Beadle C, Long GW, Weiss WR, McElroy PD, Maret SM, Oloo AJ, Hoffman SL (1994). "Diagnóstico de malaria por detección de antígeno de Plasmodium falciparum HRP-2 con un ensayo de captura de antígeno de tira reactiva rápida" . Lancet . 343 (8897): 564–568. doi : 10.1016 / S0140-6736 (94) 91520-2 . PMID 7906328 . S2CID 25450213 .
- ^ Rock EP, Marsh K, Saul AJ, Wellems TE, Taylor DW, Maloy WL, Howard RJ (1987). "Análisis comparativo de las proteínas ricas en histidina de Plasmodium falciparum HRP-I, HRP-II y HRP-III en parásitos de la malaria de diverso origen". Parasitología . 95 (2): 209-227. doi : 10.1017 / S0031182000057681 . PMID 3320887 .
- ^ Humar A, Ohrt C, Harrington MA, Pillai D, Kain KC (1997). "Prueba de Parasight F comparada con la reacción en cadena de la polimerasa y la microscopía para el diagnóstico de paludismo por Plasmodium falciparum en viajeros". Am J Trop Med Hyg . 56 (1): 44–48. doi : 10.4269 / ajtmh.1997.56.44 . PMID 9063360 .
- ^ Baker J, McCarthy J, Gatton M, Kyle DE, Belizario V, Luchavez J, Bell D, Cheng Q (2005). "Diversidad genética de la proteína 2 rica en histidina de Plasmodium falciparum (PfHRP2) y su efecto sobre el rendimiento de las pruebas de diagnóstico rápido basadas en PfHRP2" . J Infect Dis . 192 (5): 870–877. doi : 10.1086 / 432010 . PMID 16088837 .
- ^ Bzik DJ, Fox BA, Gonyer K (1993). "Expresión de la lactato deshidrogenasa de Plasmodium falciparum en Escherichia coli". Mol Biochem Parasitol . 59 (1): 155-166. doi : 10.1016 / 0166-6851 (93) 90016-Q . PMID 8515777 .
- ^ Vander Jagt DL, Hunsaker LA, Heidrich JE (1981). "Purificación parcial y caracterización de lactato deshidrogenasa de Plasmodium falciparum". Parasitología molecular y bioquímica . 4 (5–6): 255–264. doi : 10.1016 / 0166-6851 (81) 90058-X . PMID 7038478 .
- ^ Penna-Coutinho J, Cortopassi WA, Oliveira AA, França TC, Krettli AU (2011). "Actividad antipalúdica de inhibidores potenciales de la enzima lactato deshidrogenasa de Plasmodium falciparum seleccionada por estudios de acoplamiento" . PLOS ONE . 6 (7): e21237. Código bibliográfico : 2011PLoSO ... 621237P . doi : 10.1371 / journal.pone.0021237 . PMC 3136448 . PMID 21779323 .
- ^ Iqbal J, Siddique A, Jameel M, Hira PR (2004). "Proteína 2 rica en histidina persistente, lactato deshidrogenasa de parásito y reactividad del antígeno panmalarial después de la eliminación de la monoinfección por Plasmodium falciparum" . J Clin Microbiol . 42 (9): 4237–4241. doi : 10.1128 / JCM.42.9.4237-4241.2004 . PMC 516301 . PMID 15365017 .
- ^ Brown WM, Yowell CA, Hoard A, Vander Jagt TA, Hunsaker LA, Deck LM, Royer RE, Piper RC, Dame JB, Makler MT, Vander Jagt DL (2004). "Análisis estructural comparativo y propiedades cinéticas de lactato deshidrogenasas de las cuatro especies de parásitos de la malaria humana". Bioquímica . 43 (20): 6219–6229. doi : 10.1021 / bi049892w . PMID 15147206 .
- ^ Meier B, Döbeli H, Certa U (1992). "Expresión de etapa específica de isoenzimas de aldolasa en el parásito de la malaria de roedores Plasmodium berghei". Mol Biochem Parasitol . 52 (1): 15-27. doi : 10.1016 / 0166-6851 (92) 90032-F . PMID 1625704 .
- ^ Knapp B, Hundt E, Küpper HA (1990). "Plasmodium falciparum aldolasa: estructura génica y localización". Mol Biochem Parasitol . 40 (1): 1–12. doi : 10.1016 / 0166-6851 (90) 90074-V . PMID 2190085 .
- ^ Kim H, Certa U, Döbeli H, Jakob P, Hol WG (1998). "Estructura cristalina de la fructosa-1,6-bisfosfato aldolasa del parásito de la malaria humana Plasmodium falciparum". Bioquímica . 37 (13): 4388–96. doi : 10.1021 / bi972233h . PMID 9521758 .
- ^ Srivastava IK, Schmidt M, Certa U, Döbeli H, Perrin LH (1990). "Especificidad y actividad inhibidora de anticuerpos contra Plasmodium falciparum aldolasa" . J Immunol . 144 (4): 1497–503. PMID 2406342 .
enlaces externos
- Anticuerpos de la malaria
- Hacer retroceder la malaria
- Pruebas de productos de la OMS 2008
- Pruebas de diagnóstico rápido (PDR) de la OMS