Inglés: Compartimentos de la vía endocítica en células HeLa. Son visibles los endosomas tempranos (E), los endosomas tardíos / MVB (M) y los lisosomas (L). Los receptores del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) y la transferrina (Tf) están marcados en los primeros endosomas.
Los receptores del factor de crecimiento epidérmico se marcan con un anticuerpo conjugado con oro de 10 nm, aplicado a la superficie celular. Las células se estimularon con EGF y se les permitió internalizar los receptores, trayendo consigo el oro. La imagen se tomó 5 minutos después de la internalización, momento en el que la mayor parte del EGFR-oro ha alcanzado los endosomas tempranos (puntos negros, marcados con puntas de flecha), pero aún no ha entrado en los endosomas tardíos o lisosomas. Las células también se cargan con transferrina conjugada con peroxidasa de rábano picante (TfHRP). El HRP cataliza una reacción en presencia de DAB que produce una mancha oscura en los compartimentos que contienen transferrina en la imagen.
Las células HeLa se preincubaron durante 1 h en medio sin suero. Durante los últimos 30 minutos, las células se incubaron con TfHRP. A continuación, las células se incubaron con EGF y anticuerpo conjugado con oro anti-EGFR de 10 nm durante 30 minutos a 4ºC, se lavaron y se incubaron a 37ºC durante 5 minutos más, todo en presencia de TfHRP. Puntas de flecha; anti-EGFR de oro de 10 nm. Contenido oscuro; TfHRP reticulado. Bar, 500 nm.
Philips EM400 TEM
Los métodos para la fijación celular y la preparación para microscopía electrónica se pueden encontrar en la referencia a continuación. Brevemente, las células se fijaron a temperatura ambiente, se realizó una reacción DAB y las células se tiñeron con osmio, se deshidrataron y se incrustaron en epon.
Referencia relacionada;
Doyotte, A., Russell, MRG, Hopkins, CR, Woodman, PG (2005) El agotamiento de TSG101 forma un compartimento de "Clase E" de mamífero: un endosoma temprano multicisternal con múltiples defectos de clasificación. J. Cell Sci, 118: 3003-3017.