La dilución en agar es uno de los dos métodos (junto con la dilución en caldo) que utilizan los investigadores para determinar la concentración inhibitoria mínima (MIC) de los antibióticos. Es el método de dilución que se utiliza con más frecuencia para probar la eficacia de nuevos antibióticos cuando se prueban algunos antibióticos contra un gran panel de bacterias diferentes. [1] : 149 [2]
El antibiótico a analizar se diluye con agua para producir una serie de concentraciones. A continuación, se combina un volumen apropiado con agar fundido para producir placas en las que las concentraciones finales de antibiótico representan una serie de diluciones de 2 veces. Después de esto, las bacterias preparadas a una concentración estándar se añaden como un punto a cada placa, con 10 4 unidades formadoras de colonias (UFC) por punto. Esta técnica permite analizar manchas replicadas de un tipo bacteriano [3]o manchas de diferentes bacterias para poder probar la CMI del antibiótico contra múltiples tipos de bacterias. Los controles necesarios incluyen una placa de control que no recibe antibióticos y placas de diseminación bacteriana que demuestran que las bacterias inoculadas están en el rango de concentración correcto. Las placas de dilución se incuban luego a una temperatura de 37 grados Celsius . [4] Luego, las placas se incuban durante dieciséis a dieciocho horas, aunque el tiempo de incubación puede ser menor para las poblaciones de bacterias que se dividen rápidamente. [1] : 374 Después de la incubación, se examinan las placas para determinar si se ha producido un crecimiento bacteriano en los puntos inoculados. Se considera que la concentración más baja de antibióticos que impidió el crecimiento bacteriano es la concentración inhibitoria mínima de ese antibiótico contra esa bacteria. [4]
La dilución en agar se considera el estándar de oro de las pruebas de susceptibilidad, o la forma más precisa de medir la resistencia de las bacterias a los antibióticos. Los resultados de la dilución en agar se reproducen fácilmente y pueden monitorearse a un costo mucho más económico que el requerido por otros métodos de dilución. Además, se pueden analizar hasta treinta muestras de patógenos (más dos controles) a la vez, por lo que la dilución en agar es útil para las pruebas por lotes.[1] : 149
Cada placa de dilución en las pruebas de agar debe inocularse manualmente con el patógeno que se va a analizar, por lo que las pruebas de dilución en agar son laboriosas y costosas. [1] : 149 A diferencia de las pruebas de microdilución en caldo , la dilución en agar no se puede utilizar para analizar más de un antibiótico a la vez.[5]