La toxina B de Clostridium difficile es una citotoxina producida por la bacteria Clostridioides difficile , antes conocida como Clostridium difficile . Es uno de los dos tipos principales de toxinas producidas por C. difficile , el otro es una enterotoxina ( Toxina A ). Ambos son muy potentes y letales. [2] [3]
Toxina B | ||||||
---|---|---|---|---|---|---|
Identificadores | ||||||
Organismo | ||||||
Símbolo | toxB | |||||
Alt. simbolos | tcdB | |||||
Entrez | 4914074 | |||||
PDB | 2BVM | |||||
RefSeq (Prot) | YP_001087135.1 | |||||
UniProt | P18177 | |||||
Otros datos | ||||||
Número CE | 2.4.1.- | |||||
Cromosoma | genoma: 0,79 - 0,8 Mb | |||||
|
Dominio helicoidal N-terminal de la toxina TcdB | ||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
Identificadores | ||||||||
Símbolo | TcdB_N | |||||||
Pfam | PF12918 | |||||||
|
Dominio de glicosiltransferasa catalítica TcdA / TcdB | ||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
Identificadores | ||||||||
Símbolo | TcdA_TcdB | |||||||
Pfam | PF12919 | |||||||
|
Familia de peptidasa C80 | ||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
Identificadores | ||||||||
Símbolo | Peptidasa_C80 | |||||||
Pfam | PF11713 | |||||||
InterPro | IPR020974 | |||||||
|
Dominio de formación de poros TcdA / TcdB | ||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
Identificadores | ||||||||
Símbolo | TcdA_TcdB_pore | |||||||
Pfam | PF12920 | |||||||
TCDB | 1.C.57 | |||||||
Superfamilia OPM | 199 | |||||||
Proteína OPM | 6oq6 | |||||||
|
Estructura
La toxina B (TcdB) es una citotoxina que tiene un peso molecular de 270 kDa y un punto isoeléctrico , pl, de 4.1. [4] La toxina B tiene cuatro dominios estructurales diferentes: catalítico , cisteína proteasa , translocación y unión al receptor . [5] El dominio catalítico de glucosiltransferasa N-terminal incluye los residuos de aminoácidos 1-544, mientras que el dominio de cisteína proteasa incluye los residuos 545-801. Además, la región de translocación incorpora residuos de aminoácidos de 802 a 1664, mientras que la región de unión al receptor es parte de la región C-terminal e incluye residuos de aminoácidos de 1665 a 2366. [5]
La actividad de glicosilación de la toxina B ocurre en la región catalítica N-terminal (residuos 1-544). Esta región glicosila sustratos independientemente de cualquier actividad citotóxica. [6] Sin embargo, una pequeña deleción de la región de unión al receptor provoca la atenuación de la actividad de la toxina B. [6] La región de translocación contiene una estructura similar a un tallo hidrófobo, que puede ayudar a los residuos 958-1130 a formar poros que atraviesan la membrana . [5] La región de unión al receptor que incluye la región repetitiva C-terminal (CRR) aumenta la interacción de la membrana TcdB pero no participa en la formación de poros. [7] Además, la cisteína proteasa y las regiones de translocación tienen estructuras complejas que desempeñan un papel funcional importante en la translocación y la unión al receptor. [8] Sin embargo, la eliminación de la región de translocación de los aminoácidos reduce 4 veces la actividad citotóxica . Tanto las cisteína proteasas como la mayoría de las regiones de translocación albergan proteínas hidrófobas , que muestran acceso a TcdB y otras toxinas que atraviesan las membranas celulares . [8]
Dominio de enlace del receptor
El C-terminal de TcdB (la región verde de la Fig. 2) contiene una región conocida como oligopéptidos repetitivos combinados (CROP) que contiene los residuos de aminoácidos 1831-2366. [9] Estos CROP componen de 19 a 24 repeticiones cortas (SR) de aminoácidos, aproximadamente 31 repeticiones largas (LR) de aminoácidos, toxina A y toxina B. [9] [10] La región TcdB CROPs consta de 19 SR y 4 LR. Esta región SR y LR permite la formación de motivos de unión a la pared celular que ayudan a unir restos de azúcar de las superficies celulares. [9]
Purificación
Para purificar la toxina B de los cultivos de células de C. difficile , se usa caldo de infusión cerebro-corazón porque promueve la síntesis de la toxina B. [11] El método de filtración facilita la purificación de la toxina B del sobrenadante de C. difficile . La concentración de toxina del sobrenadante es proporcional al recuento de células del organismo. Numerosos estudios han propuesto que la mayoría de las toxinas se liberan en la fase logarítmica tardía o en las fases estacionarias tempranas , por lo que las células secretan continuamente la toxina B. [2] Aunque hay muchos métodos empleados por diferentes estudios para purificar la toxina B, la mayoría de los estudios usan métodos que involucran concentraciones de sulfato de amonio ultrafiltrado o precipitación , en lugar de filtración en gel o cromatografía de intercambio iónico . Además, la eficacia del método de cromatografía de intercambio iónico ayuda a diferenciar entre TcdA y TcdB.
Función
Cuando el residuo de treonina catalítica de glucosiltransferasa desactiva una familia de pequeñas GTPasas , por ejemplo, la familia Rho ; Rac y Cdc42 dentro de las células diana alteran los mecanismos de transducción de señales , lo que conduce a la disfunción del citoesqueleto de actina , la unión célula - célula y la apoptosis (Fig. 5). [12] [13] [14] Rho induce la actividad de las fibras de tensión de actina . Las proteínas Rac controlan las actividades de ondulación de la membrana y neutrófilos oxidasa NADPH . Cdc42 regula la formación de filamentos de actina F en filopodios .
Citotoxicidad
Varios estudios han demostrado que la presencia de TcdB en células de mamíferos conduce a cambios rápidos en la morfología celular y la señalización celular . En un corto período de tiempo, las células tienen la apariencia de placa con pequeñas dosis de TcdB y TcdA. Además, la muerte de las células es un impacto importante de estas toxinas después de que las células han sido intoxicadas . Una investigación de Donta et al., Adelantó que TcdB tiene serios impactos en otras células de mamíferos como las células de ovario de hámster chino , células epiteliales cervicales humanas , células suprarrenales de ratón , hepatocitos de rata y astrocitos de rata (Figura 3). [15] [16]
La actividad citotóxica se basa en los tipos de células, que pueden oscilar entre 4 y 200 veces. Generalmente, cuando las células se infectan con TcdB, no solo pierden su integridad estructural, sino también la disminución de los filamentos de F-actina . [17] El redondeo celular por TcdB no toma más de 2 horas (Fig. 4), pero en lo que respecta a la muerte celular , puede tomar aproximadamente 24 horas. [15] Con respecto a la diarrea asociada a Clostridium difficile (DACD), los efectos de la citopatía son más críticos que la muerte celular real porque una vez que las células pierden la integridad del filamento de actina del citoesqueleto , también pierden su función normal.
Efectos sobre pequeñas GTPasas
La causa de la actividad citotóxica de TcdB dentro de la célula huésped está mediada principalmente por la endocitosis del receptor [ cita requerida ] . Los endosomas ácidos permiten que la toxina B ingrese al citosol . Este fenómeno tiene lugar mediante una región receptora de unión , que permite que la toxina entre en las células huésped [ cita requerida ] . A través de la accesibilidad del citosol de las células huésped , TcdB desactiva las pequeñas GTPasas (Fig. 5), por ejemplo, los miembros de la familia Rho Rac y Cdc42 mediante el proceso de glicosilación de treonina 35 en Cdc42 y Rac, y treonina 37 en Rho. [18] [19] Estas Rho GTPasas se encuentran ubicuamente en el citosol de las células eucariotas que son responsables de la organización del citoesqueleto de actina porque las toxinas en el citosol causan la condensación de los filamentos de actina como consecuencia del redondeo celular y la formación de ampollas en la membrana (Fig. .3), que finalmente conduce a la apoptosis . [20] [21] TcdB provoca cambios críticos en la dinámica y morfología celular . La Figura 3 muestra el efecto probable de la toxina B sobre la superficie de una célula; ampollas en la membrana (flechas negras). [22] Además, TcdB inactiva Rho GTPasas. Como consecuencia, se interrumpen las uniones célula-célula, lo que mejora la permeabilidad epitelial de la toxina B y la acumulación de líquido en la luz. Éste es uno de los principales agentes causantes de la contracción de la diarrea asociada a Clostridium difficile (DACD) (Fig. 5). [23] [24]
Además, la tasa de hidrólisis por TcdB de UDP-glucosa es aproximadamente cinco veces mayor que la de TcdA. [25] Varios estudios han indicado que Rho exhibe una modificación postraduccional a través de prenilación y carboximetilación, que ocurre en el lado citoplasmático de la membrana plasmática , por lo tanto, el intercambio de GTP a GDP . [26] Cuando TcdB se une a Rho y otras pequeñas GTPasas , GTP se hidroliza a GDP , lo que conduce a GTP unido (activo) a unido a GDP (inactivo) (Fig. 5). Además, esta actividad de intercambio está regulada por factores de guanina en el citosol de la célula. [27]
Perturbación en las vías de la señal
La regulación celular de Rho, Rac y Cdc42 tiene efectos fuera de la vecindad de los filamentos de actina del citoesqueleto (Fig. 4), [17] Estas pequeñas GTPasas se incorporan en el ciclo celular que regula las señales a través de las proteínas quinasas quinasas activadas por mitógenos. (MAPKK). [28] Es posible que algunas partes fisiológicas de las células que no están involucradas en los filamentos de actina no causen el redondeo celular o la muerte celular de inmediato, pero en la actividad de la vía corriente abajo, pueden conducir al deterioro de los filamentos de actina y, finalmente, a la muerte celular . [17]
En 1993, un estudio realizado por Shoshan et al., Mostró que las células con TcdB cambiaban la actividad de la fosfolipasa A2 . Este fue un evento independiente de la interrupción del citoesqueleto de actina . [29] Shoshan et al., También mostró que tcdB inhibió la actividad de señalización mediante la desactivación de las proteínas Rho a través del receptor de la fosfolipasa D . [29]
Formación de poros
TcdB accede al interior de la célula a través de endocitosis mediada por clatrina , [30] Cuando la toxina B es parte del citosol , la glucosiltransferasa pasa a través de la membrana endosomal , lo que disminuye el pH, induce la translocación y finalmente conduce a cambios morfológicos de los residuos de la región de translocación ( 958-1130). [31] Las regiones hidrofóbicas están incrustadas en la membrana del hospedador para formar poros que permiten el paso de los dominios de glucosiltransferasa . [31] Cuando las células se infectan con TcdB en un ambiente ácido, atenúa las toxinas y provoca reordenamientos de forma (Fig. 6). [31] Como consecuencia del pH ácido, TcdB muestra claras diferencias en la fluorescencia original del triptófano , la susceptibilidad de las proteasas y las superficies hidrófobas . [31] Otro grupo ha demostrado que la acidificación conduce a cambios conformacionales de la toxina y, lo que es más importante, ayuda a formar poros. [7] Una supuesta región de translocación (Fig. 2) constituye aproximadamente 801-1400 aminoácidos, de los cuales los residuos 958-1130 son hidrófobos y son responsables de la formación de poros transmembrana. [20] La mayoría de los estudios utilizaron la cepa 630 de TcdB para mostrar la actividad de formación de poros de las toxinas de C. difficile . [31]
Inducido por pH
Para ver si los efectos de la escisión proteolítica de TcdB tienen lugar en la superficie celular o en endosomas ácidos , los estudios utilizaron Bafilomicina A1 , que se sabe que bloquea las H + -ATPasas de tipo v de los endosomas. Esto reduce la acidez en los endosomas. [31] La vía de captación fisiológica de TcdB previene la actividad citopática de TcdB. [31] Cuando las células estaban en condiciones ácidas (pH 4,0) durante 5 minutos después de unir TcdB a la superficie celular a 37 grados Celsius, se observaron reordenamientos de forma y redondeo. Sin embargo, cuando se incubaron células redondeadas durante una hora más en pH neutro (7,0) con parámetros similares, no se observó redondeo de células. [15] [31] Ambos estudios mostraron que la toxina B tiene una propiedad de escisión proteolítica , que es fundamental para el acceso al citosol . [7] [15] [31] Tener un pH endosómico ácido conduce a alteraciones topológicas de TcdB (Figura 6). [7]
Genética
El gen que codifica la proteína TcdB, tcdB , se encuentra dentro de la región cromosómica de 19,6 kb . Esto se conoce como el locus de patogenicidad o PaLoc (Figura 2). [32] [33] El marco de lectura abierto (ORF) para tcdB es de 7.098 nucleótidos de longitud. [17] Es importante mencionar que, además de los principales genes de toxinas en la región PaLoc, hay otros tres genes accesorios que codifican en la región PaLoc : tcdR (L), tcdC (R) y tcdE en el medio. Estos genes ayudan a regular la expresión de TcdA y TcdB. También ayudan a secretar o liberar las toxinas de la célula. [17] El gen codificador tcdE , ubicado entre tcdB y tcdA, es análogo a las proteínas holinas , por lo que se sugiere que tcdE funciona como un gen facilitador que mejora la liberación o secreción de TcdA y TcdB, lo que aumenta la permeabilidad de la célula huésped. membrana . [17]
Detección de toxinas
Hay diferentes tamaños de plásmido de C. difficile . Los pesos moleculares detectados oscilan entre 2,7 x 10 6 y 100 x 10 6 , pero los tamaños de plásmido no muestran correlación con la toxicidad . Para detectar el nivel de toxina B en C. difficile , los médicos utilizan ampliamente ensayos de cultivo celular derivados de muestras de heces de pacientes con PMC . [2] [3] El ensayo de cultivo celular se considera un "estándar de oro" para detectar la toxicidad en C. difficile porque una pequeña cantidad de toxina B es capaz de causar el redondeo celular (Fig. 4), por lo que es un importante ventaja de los laboratorios clínicos para hacer correlaciones con la CDAD causada por TcdB. [2] [3] Aunque se encontró actividad citotóxica de grandes toxinas clostridiales (LCT) en muestras de heces de pacientes con PMC, la actividad de la toxina B tuvo efectos citotóxicos más perjudiciales en comparación con la toxina A. [2] Por lo tanto, la actividad de la toxina A se atenúa cuando no se aísla de la toxina B. [2] [3] La detección de la toxicidad de C. difficile es extremadamente sensible; sin embargo, el uso del ensayo de cultivo celular permite a los laboratorios clínicos superar el desafío; el uso de dosis tan pequeñas como 1 pg / ml de toxina B es suficiente para provocar el redondeo celular. [2] [3] Esta es la principal ventaja de utilizar el ensayo de cultivo de tejido para detectar toxicidad en pacientes con PMC . [2] A pesar de que los laboratorios clínicos han intentado utilizar un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) en placa de microtitulación y otras técnicas para detectar la actividad citotóxica de la toxina B en las heces de los pacientes con PMC , los resultados no son tan precisos como aquellos en los que Se utilizaron ensayos de cultivo celular . [2] [3] [34]
Factor de producción
Al agregar un antimicrobiano , por ejemplo, clindamicina , en el medio de crecimiento del cultivo, los estudios han demostrado que la actividad citotóxica en los cultivos de C. difficile aumenta entre 4 y 8 veces. [35] [36] Además, conociendo el papel de los antibióticos en las causas de la PMC, muchos estudios anteriores se centraron en los efectos de la producción de toxinas por parte de los antimicrobianos . Como resultado, los estudios pudieron concluir que la naturaleza subinhibidora de los niveles de vancomicina y penicilina estaban aumentando la producción de toxinas en cultivos de C. difficile . [37] Las cantidades de producción de toxinas se correlacionaron con el uso de medio de crecimiento para los organismos. Otro estudio ilustró que los altos niveles de producción de toxinas de TcdB se observaron en medios complejos como el caldo de infusión de cerebro y corazón . [38] [39] Se produjeron altos niveles de toxinas con el aislamiento de las altamente virulentas . Por el contrario, se produjeron niveles bajos de toxinas con el aislamiento de débilmente virulentos . Por tanto, muestra que las producciones de toxinas estaban correguladas. Aunque no se comprende el mecanismo detrás de la participación del entorno en la modulación de las señales que expresan las toxinas, los estudios in vitro han demostrado que la expresión de la toxina se ve reforzada por la represión de catabolitos y el estrés, por ejemplo, antibióticos . [40] [41] [42] Otro estudio ha demostrado que limitar la biotina en un medio bien caracterizado aumenta la producción de TcdB en 64 veces y de TcdA en 35 veces. Esto se hizo con C. difficile y dosis de biotina tan pequeñas como 0,05 nM. [41] Varios otros estudios tempranos han argumentado en contra de la teoría de que la producción de toxina tiene algo que ver con el estrés o la represión de catabolitos de la toxina TcdA o TcdB. [42] Además, muchos estudios dicen que la razón principal de las diferencias entre otros estudios se debe a que la producción de toxinas no ocurre con todos los aislamientos de C. difficile .
Significación clínica
Muchos estudios iniciales han sugerido que la toxina A (también conocida como TcdA) es la principal proteína de la toxina que causa la diarrea asociada a antibióticos (DAA); sin embargo, los científicos de investigación en la última década más o menos han demostrado que la toxina B (o TcdB) juega un papel más importante en la enfermedad de lo que nadie había pronosticado. Con este conocimiento, la toxina B se ha identificado como el principal factor de virulencia que causa la apertura de uniones estrechas de las células epiteliales intestinales , lo que permite que la toxina aumente la permeabilidad vascular e induzca hemorragia . Por tanto, esto conduce a que el factor de necrosis tumoral α (TNF α) y las interleucinas proinflamatorias se establezcan como los principales agentes causantes de la colitis pseudomembranosa (PMC) y la diarrea asociada a antibióticos (AAD). [2] [3] [43]
La participación de la toxina A y, lo que es más importante, la toxina B es el elemento clave que determina la enfermedad causada por C. difficile . Los laboratorios clínicos han identificado estas toxinas en las heces de los pacientes basándose en ensayos de anticuerpos y citotoxicidad . [44] Se ha demostrado que estas toxinas bacterianas están asociadas con la toxina hemorrágica de Clostridium sordellii (TcsH), la toxina letal (TcsL) y la toxina alfa de Clostridium novyi (Tcn α), por lo que esta cohorte es la gran familia de toxinas clostridiales . [17] Debido a las similitudes de estas toxinas con otras, los investigadores las han clasificado como la familia de las grandes toxinas clostridiales (LCT). [9]
Mecanismo de bezlotoxumab con TcdB
Bezlotoxumab es un anticuerpo monoclonal humano diseñado para la prevención de la recurrencia de infecciones por Clostridium difficile. Mediante la estructura cristalizada por rayos X del N-terminal de TcdB, se identifica que la toxina consta de tres dominios: un dominio de glucosiltransferasa (GTD), una cisteína proteasa y un dominio de oligopéptido repetitivo combinado (CROP). Bezlotoxumab se une específicamente a dos sitios homólogos dentro del dominio CROP de TcdB. El análisis estructural por cristalografía de rayos X indica que la unión del anticuerpo ocluye parcialmente las bolsas de unión a los carbohidratos putativos. De acuerdo con esta idea, Bezlotoxumab bloquea la unión de TcdB a células de mamíferos. [45]
Papel en la colitis pseudomembranosa
En las primeras etapas de la enfermedad de PMC , muchos estudios han especulado que TcdA es más potente que TcdB. Esto se ha deducido de experimentos in vivo en los que las producciones de toxinas de TcdA fueron más graves que las de TcdB con cecitis por antibióticos. [38] [46] Posteriormente, varios estudios mostraron que TcdB juega un papel importante en la enfermedad de PMC y ADD. El estudio demostró que aunque C. difficile no produce TcdA, todavía presenta síntomas de la enfermedad. [47] Además, estudios posteriores han demostrado que una forma purificada de TcdB es una enterotoxina más letal en comparación con TcdA, y también, que el epitelio intestinal está severamente dañado y causa una respuesta inflamatoria aguda. [48] Con una mejor comprensión de la toxina, los investigadores pudieron afirmar que TcdB es el principal factor de virulencia que causa CDI sobre TcdA. Sin embargo, cuando TcdA está presente en el intestino, ayuda a facilitar que la actividad de TcdB tenga impactos más amplios y, en consecuencia, afecte a múltiples sistemas de órganos. [49] Además, cuando los hámsteres fueron vacunados contra TcdA, mostró que los hámsteres no estaban completamente protegidos de la enfermedad de C. difficile y esto llevó a los estudios a concluir que TcdB es muy letal y potente. [50] Además, inyectar una pequeña dosis de TcdA con una dosis letal de TcdB por vía intravenosa o intraperitoneal resultó suficiente para causar la muerte de un animal. Por lo tanto, TcdA funciona como un facilitador de TcdB que sale del intestino. [50]
Ver también
- Clostridium difficile TcdE Holin
- Holin
Referencias
- ^ Reinert DJ, Jank T, Aktories K, Schulz GE (septiembre de 2005). "Base estructural para la función de la toxina B de Clostridium difficile ". Revista de Biología Molecular . 351 (5): 973–81. doi : 10.1016 / j.jmb.2005.06.071 . PMID 16054646 .
- ^ a b c d e f g h yo j Lyerly DM, Krivan HC, Wilkins TD (enero de 1988). " Clostridium difficile : su enfermedad y toxinas" . Revisiones de microbiología clínica . 1 (1): 1–18. doi : 10.1128 / cmr.1.1.1 . PMC 358025 . PMID 3144429 .
- ^ a b c d e f g Bartlett JG (1990). " Clostridium difficile : consideraciones clínicas". Reseñas de enfermedades infecciosas . 12 Suppl 2: S243–51. doi : 10.1093 / clinids / 12.Supplement_2.S243 . PMID 2406876 .
- ^ von Eichel-Streiber C (1997). "Enterotoxina A y citotoxina B ( Clostridium difficile )". En Montecucco C, Rappuoli R (eds.). Guía de toxinas proteicas y su uso en biología celular . Oxford [Oxfordshire]: Oxford University Press. pag. 72. ISBN 978-0-19-859954-8.
- ^ a b c Albesa-Jové D, Bertrand T, Carpenter EP, Swain GV, Lim J, Zhang J, Haire LF, Vasisht N, Braun V, Lange A, von Eichel-Streiber C, Svergun DI, Fairweather NF, Brown KA (marzo de 2010) . "Cuatro dominios estructurales distintos en la toxina B de Clostridium difficile visualizados usando SAXS". Revista de Biología Molecular . 396 (5): 1260–70. doi : 10.1016 / j.jmb.2010.01.012 . PMID 20070948 .
- ^ a b Hofmann F, Busch C, Prepens U, Just I, Aktories K (abril de 1997). "Localización de la actividad glucosiltransferasa de la toxina B de Clostridium difficile en la parte N-terminal de la holotoxina" . Revista de Química Biológica . 272 (17): 11074–8. doi : 10.1074 / jbc.272.17.11074 . PMID 9111001 .
- ^ a b c d Barth H, Pfeifer G, Hofmann F, Maier E, Benz R, Aktories K (abril de 2001). "Formación de canales iónicos inducida por pH bajo por la toxina B de Clostridium difficile en células diana" . Revista de Química Biológica . 276 (14): 10670–6. doi : 10.1074 / jbc.M009445200 . PMID 11152463 .
- ^ a b Jank T, Aktories K (mayo de 2008). "Estructura y modo de acción de las toxinas glucosilantes clostridiales: el modelo ABCD". Tendencias en microbiología . 16 (5): 222–9. doi : 10.1016 / j.tim.2008.01.011 . PMID 18394902 .
- ^ a b c d von Eichel-Streiber C, Boquet P, Sauerborn M, Thelestam M (octubre de 1996). "Grandes citotoxinas clostridiales - una familia de glicosiltransferasas que modifican pequeñas proteínas de unión a GTP". Tendencias en microbiología . 4 (10): 375–82. doi : 10.1016 / 0966-842X (96) 10061-5 . PMID 8899962 .
- ^ Jank T, Giesemann T, Aktories K (abril de 2007). "Toxinas A y B de Clostridium difficile rho-glucosilantes: nuevos conocimientos sobre la estructura y función" . Glicobiología . 17 (4): 15R – 22R. doi : 10.1093 / glycob / cwm004 . PMID 17237138 .
- ^ Meador J, Tweten RK (julio de 1988). "Purificación y caracterización de la toxina B de Clostridium difficile " . Infección e inmunidad . 56 (7): 1708–14. PMC 259466 . PMID 3384474 .
- ^ Aktories K, Just I (diciembre de 1995). "Monoglucosilación de proteínas Rho de unión a GTP de baja masa molecular por citotoxinas clostridiales". Tendencias en biología celular . 5 (12): 441–3. doi : 10.1016 / S0962-8924 (00) 89107-2 . PMID 14732022 .
- ^ Dillon ST, Rubin EJ, Yakubovich M, Pothoulakis C, LaMont JT, Feig LA, Gilbert RJ (abril de 1995). "Implicación de las proteínas Rho relacionadas con Ras en los mecanismos de acción de la toxina A y la toxina B de Clostridium difficile " . Infección e inmunidad . 63 (4): 1421–6. PMC 173169 . PMID 7890404 .
- ^ Wilkins TD, Lyerly DM (febrero de 1996). " Las toxinas de Clostridium difficile atacan Rho". Tendencias en microbiología . 4 (2): 49–51. doi : 10.1016 / 0966-842X (96) 81508-3 . PMID 8820565 .
- ^ a b c d Pfeifer G, Schirmer J, Leemhuis J, Busch C, Meyer DK, Aktories K, Barth H (noviembre de 2003). "Captación celular de la toxina B de Clostridium difficile . Translocación del dominio catalítico N-terminal en el citosol de células eucariotas" . Revista de Química Biológica . 278 (45): 44535–41. doi : 10.1074 / jbc.M307540200 . PMID 12941936 .
- ^ Donta ST, Sullivan N, Wilkins TD (junio de 1982). "Efectos diferenciales de las toxinas de Clostridium difficile en células cultivadas de tejidos" . Revista de microbiología clínica . 15 (6): 1157–8. PMC 272271 . PMID 7107845 .
- ^ a b c d e f g Voth DE, Ballard JD (abril de 2005). " Toxinas de Clostridium difficile : mecanismo de acción y papel en la enfermedad" . Revisiones de microbiología clínica . 18 (2): 247–63. doi : 10.1128 / CMR.18.2.247-263.2005 . PMC 1082799 . PMID 15831824 .
- ^ Solo yo, Selzer J, Wilm M, von Eichel-Streiber C, Mann M, Aktories K (junio de 1995). "Glucosilación de proteínas Rho por la toxina B de Clostridium difficile ". Naturaleza . 375 (6531): 500–3. doi : 10.1038 / 375500a0 . PMID 7777059 .
- ^ Solo yo, Wilm M, Selzer J, Rex G, von Eichel-Streiber C, Mann M, Aktories K (junio de 1995). "La enterotoxina de Clostridium difficile (ToxA) monoglucosila las proteínas Rho" . Revista de Química Biológica . 270 (23): 13932–6. doi : 10.1074 / jbc.270.23.13932 . PMID 7775453 .
- ^ a b von Eichel-Streiber C, Warfolomeow I, Knautz D, Sauerborn M, Hadding U (noviembre de 1991). "Cambios morfológicos en células adherentes inducidos por toxinas de Clostridium difficile " (PDF) . Transacciones de la sociedad bioquímica . 19 (4): 1154–60. doi : 10.1042 / bst0191154 . PMID 1794484 .
- ^ Thelestam M, Chaves-Olarte E (2000). Efectos citotóxicos de las toxinas de Clostridium difficile . Temas de actualidad en microbiología e inmunología . 250 . págs. 85–96. doi : 10.1007 / 978-3-662-06272-2_4 . ISBN 978-3-642-08668-7. PMID 10981358 .
- ^ Fiorentini C, Fabbri A, Falzano L, Fattorossi A, Matarrese P, Rivabene R, Donelli G (junio de 1998). "La toxina B de Clostridium difficile induce la apoptosis en células cultivadas intestinales" . Infección e inmunidad . 66 (6): 2660–5. PMC 108253 . PMID 9596731 .
- ^ Feltis BA, Wiesner SM, Kim AS, Erlandsen SL, Lyerly DL, Wilkins TD, Wells CL (diciembre de 2000). " Las toxinas A y B de Clostridium difficile pueden alterar la permeabilidad epitelial y promover la migración paracelular bacteriana a través de los enterocitos HT-29". Choque . 14 (6): 629–34. doi : 10.1097 / 00024382-200014060-00010 . PMID 11131913 .
- ^ Johal SS, Solomon K, Dodson S, Borriello SP, Mahida YR (junio de 2004). "Efectos diferenciales de concentraciones variables de toxina A de Clostridium difficile sobre la función de barrera epitelial y expresión de citocinas" . La Revista de Enfermedades Infecciosas . 189 (11): 2110–9. doi : 10.1086 / 386287 . PMID 15143480 .
- ^ Ciesla WP, Bobak DA (junio de 1998). " Las toxinas A y B de Clostridium difficile son hidrolasas de glucosa-UDP dependientes de cationes con diferentes actividades catalíticas" . Revista de Química Biológica . 273 (26): 16021–6. doi : 10.1074 / jbc.273.26.16021 . PMID 9632652 .
- ^ Adamson P, Marshall CJ, Hall A, Tilbrook PA (octubre de 1992). "Modificaciones postraduccionales de las proteínas p21rho". Revista de Química Biológica . 267 (28): 20033–8. PMID 1400319 .
- ^ Zhou K, Wang Y, Gorski JL, Nomura N, Collard J, Bokoch GM (julio de 1998). "Los factores de intercambio de nucleótidos de guanina regulan la especificidad de la señalización aguas abajo de Rac y Cdc42" . Revista de Química Biológica . 273 (27): 16782–6. doi : 10.1074 / jbc.273.27.16782 . PMID 9642235 .
- ^ Zhang Y, Dong C (noviembre de 2007). "Mecanismos reguladores de la señalización de quinasas activadas por mitógenos". Ciencias de la vida celular y molecular . 64 (21): 2771–89. doi : 10.1007 / s00018-007-7012-3 . PMID 17726577 .
- ^ a b Shoshan MC, Florin I, Thelestam M (mayo de 1993). "Activación de la fosfolipasa celular A2 por la toxina B de Clostridium difficile ". Revista de bioquímica celular . 52 (1): 116–24. doi : 10.1002 / jcb.240520115 . PMID 8320270 .
- ^ Papatheodorou P, Zamboglou C, Genisyuerek S, Guttenberg G, Aktories K (mayo de 2010). "Las toxinas glucosilantes clostridiales entran en las células mediante endocitosis mediada por clatrina" . PLOS ONE . 5 (5): e10673. doi : 10.1371 / journal.pone.0010673 . PMC 2871790 . PMID 20498856 .
- ^ a b c d e f g h yo Qa'Dan M, Spyres LM, Ballard JD (mayo de 2000). "Cambios conformacionales inducidos por pH en la toxina B de Clostridium difficile " . Infección e inmunidad . 68 (5): 2470–4. doi : 10.1128 / IAI.68.5.2470-2474.2000 . PMC 97448 . PMID 10768933 .
- ^ Carter GP, Rood JI, Lyras D (enero de 2012). "El papel de la toxina A y la toxina B en la virulencia de Clostridium difficile ". Tendencias en microbiología . 20 (1): 21–9. doi : 10.1016 / j.tim.2011.11.003 . PMID 22154163 .
- ^ Braun V, Hundsberger T, Leukel P, Sauerborn M, von Eichel-Streiber C (noviembre de 1996). "Definición del sitio de integración único del locus de patogenicidad en Clostridium difficile ". Gene . 181 (1–2): 29–38. doi : 10.1016 / S0378-1119 (96) 00398-8 . PMID 8973304 .
- ^ Musher DM, Manhas A, Jain P, Nuila F, Waqar A, Logan N, Marino B, Graviss EA (agosto de 2007). "Detección de toxina de Clostridium difficile : comparación de resultados de inmunoensayo enzimático con resultados obtenidos por ensayo de citotoxicidad" . Revista de microbiología clínica . 45 (8): 2737–9. doi : 10.1128 / JCM.00686-07 . PMC 1951241 . PMID 17567791 .
- ^ Nakamura S, Mikawa M, Tanabe N, Yamakawa K, Nishida S (1982). "Efecto de la clindamicina sobre la producción de citotoxinas por Clostridium difficile " . Microbiología e inmunología . 26 (11): 985–92. doi : 10.1111 / j.1348-0421.1982.tb00248.x . PMID 7167065 .
- ^ George RH, Johnson M, Youngs D, Burdon DW (1980). "Inducción de la toxina de Clostridium difficile por antibióticos". Quimioterapia actual y enfermedades infecciosas . 2 (1): 955–56.
- ^ Onderdonk AB, Lowe BR, Bartlett JG (octubre de 1979). "Efecto del estrés ambiental sobre los niveles de toxina de Clostridium difficile durante el cultivo continuo" . Microbiología aplicada y ambiental . 38 (4): 637–41. PMC 243552 . PMID 44176 .
- ^ a b Lyerly DM, Sullivan NM, Wilkins TD (enero de 1983). "Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas para la toxina A de Clostridium difficile " . Revista de microbiología clínica . 17 (1): 72–8. PMC 272577 . PMID 6338036 .
- ^ Sullivan NM, Pellett S, Wilkins TD (marzo de 1982). "Purificación y caracterización de toxinas A y B de Clostridium difficile " . Infección e inmunidad . 35 (3): 1032–40. PMC 351151 . PMID 7068210 .
- ^ Dupuy B, Sonenshein AL (enero de 1998). "Transcripción regulada de genes de toxina de Clostridium difficile " . Microbiología molecular . 27 (1): 107-20. doi : 10.1046 / j.1365-2958.1998.00663.x . PMID 9466260 .
- ^ a b Yamakawa K, Karasawa T, Ikoma S, Nakamura S (febrero de 1996). "Mejora de la producción de toxina de Clostridium difficile en condiciones limitadas por biotina". Revista de Microbiología Médica . 44 (2): 111–4. CiteSeerX 10.1.1.623.71 . doi : 10.1099 / 00222615-44-2-111 . PMID 8642571 .
- ^ a b Mani N, Dupuy B (mayo de 2001). "Regulación de la síntesis de toxinas en Clostridium difficile por un factor sigma de ARN polimerasa alternativo" . Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 98 (10): 5844–9. doi : 10.1073 / pnas.101126598 . PMC 33301 . PMID 11320220 .
- ^ Bartlett JG (mayo de 1994). " Clostridium difficile : historia de su papel como patógeno entérico y estado actual del conocimiento sobre el organismo". Enfermedades Clínicas Infecciosas . 18 Suppl 4: S265–72. doi : 10.1093 / clinids / 18.Supplement_4.S265 . PMID 8086574 .
- ^ Carter GP, Rood JI, Lyras D (enero de 2012). "El papel de la toxina A y la toxina B en la virulencia de Clostridium difficile ". Tendencias en microbiología . 20 (1): 21–9. doi : 10.1016 / j.tim.2011.11.003 . PMID 22154163 .
- ^ Orth P, Xiao L, Hernandez LD, Reichert P, Sheth PR, Beaumont M, et al. (Junio de 2014). "Mecanismo de acción y epítopos del anticuerpo neutralizador de la toxina B de Clostridium difficile bezlotoxumab revelado por cristalografía de rayos X" . La revista de química biológica . 289 (26): 18008–21. doi : 10.1074 / jbc.m114.560748 . PMC 4140266 . PMID 24821719 .
- ^ Arnon SS, Mills DC, Day PA, Henrickson RV, Sullivan NM, Wilkins TD (enero de 1984). "Muerte rápida de monos rhesus lactantes inyectados con toxinas A y B de Clostridium difficile : bases fisiológicas y patológicas". Revista de pediatría . 104 (1): 34–40. doi : 10.1016 / S0022-3476 (84) 80585-5 . PMID 6690674 .
- ^ Drudy D, Fanning S, Kyne L (enero de 2007). "Toxina A-negativo, toxina B-positivo Clostridium difficile " . La Revista de Enfermedades Infecciosas . 11 (1): 5–10. doi : 10.1016 / j.ijid.2006.04.003 . PMID 16857405 .
- ^ Savidge TC, Pan WH, Newman P, O'Brien M, Anton PM, Pothoulakis C (agosto de 2003). "La toxina B de Clostridium difficile es una enterotoxina inflamatoria en el intestino humano". Gastroenterología . 125 (2): 413-20. doi : 10.1016 / S0016-5085 (03) 00902-8 . PMID 12891543 .
- ^ Dobson G, Hickey C, Trinder J (junio de 2003). " Colitis por Clostridium difficile que causa megacolon tóxico, sepsis grave y síndrome de disfunción multiorgánica". Medicina de cuidados intensivos . 29 (6): 1030. doi : 10.1007 / s00134-003-1754-7 . PMID 12734650 .
- ^ a b Lyerly, DM; Roberts, MD; Phelps, CJ; Wilkins, TD (enero de 1986). "Purificación y propiedades de las toxinas A y B de Clostridium difficile " . Cartas de Microbiología FEMS . 33 (1): 31–35. doi : 10.1111 / j.1574-6968.1986.tb01206.x .