La elutriación centrífuga a contracorriente ( CCE ) es una técnica de clarificación de líquidos. Este método permite a los científicos separar diferentes células con diferentes tamaños. Dado que el tamaño celular se correlaciona con las etapas del ciclo celular, este método también permite la separación de células en diferentes etapas del ciclo celular. [1]
El concepto clave es que las células más grandes tienden a permanecer dentro de la solución tampón que fluye, mientras que las células más pequeñas se eliminarán después de la solución tampón (diferente propiedad de sedimentación dentro de la solución tampón), y las células tendrán diferentes propiedades de sedimentación en diferentes etapas del ciclo celular. [2] [3]
El principio básico de la separación de las células dentro de la CCE es el equilibrio entre la fuerza de arrastre centrípeta y contraflujo. Cuando las células ingresan a la cámara de elutriación, todas las células permanecerán en el borde exterior de la cámara debido a la fuerza centrífuga. Luego, cuando aumenta la velocidad de flujo de la solución tampón, la solución tiende a empujar las celdas hacia la mitad del CCE. Cuando la fuerza de arrastre del contraflujo supera la fuerza centrípeta, las partículas serán impulsadas por la fuerza neta y abandonarán la cámara. Las partículas más pequeñas pueden salir de la cámara a velocidades de flujo más bajas. Por el contrario, las partículas más grandes permanecerán dentro de la cámara de elutriación. Por lo tanto, la tasa de flujo del tampón se puede usar para controlar la clasificación por tamaño dentro de la cámara de elutriación. [4]
Durante la separación, la célula solo necesita suspenderse en una solución tampón e ingresar a una centrífuga , todo el proceso no implica ningún efecto químico (p. ej., tinción) ni físico (p. ej., unión de anticuerpos, lisis de la membrana celular) en las células. por lo que la celda permanecerá sin cambios antes y después de la separación. Debido a esto, las células recolectadas se pueden usar para experimentos adicionales o para una mayor separación mediante otras técnicas. Finalmente, el CCE se basa en la fuerza centrífuga y la fuerza de arrastre a contracorriente para separar las células, por lo que la velocidad de separación es rápida. En resumen:
Como se mencionó anteriormente, el CCE separa las células en función de su propiedad de sedimentación, pero no de características específicas (p. ej., proteína de superficie, forma de la célula). No puede separar diferentes tipos de células que tienen propiedades de sedimentación similares. Esto significa que es necesario realizar una purificación previa para la muestra de tipo de células mixtas. El CCE también se limita a las células que pueden suspenderse individualmente en la solución tampón. Las células que siempre se adhieren a algo no pueden ser separadas por el CCE.