En genómica , la hibridación ADN-ADN es una técnica de biología molecular que mide el grado de similitud genética entre grupos de secuencias de ADN . Por lo general, se utiliza para determinar la distancia genética entre dos organismos y se ha utilizado ampliamente en filogenia y taxonomía .
El ADN de un organismo se marca y luego se mezcla con el ADN no marcado para compararlo. La mezcla se incuba para permitir que las cadenas de ADN se disocien y luego se enfría para formar ADN de doble cadena híbrido renovado. Las secuencias híbridas con un alto grado de similitud se unirán más firmemente y requerirán más energía para separarlas: es decir, se separan cuando se calientan a una temperatura más alta que las secuencias diferentes, un proceso conocido como " fusión de ADN ".
Para evaluar el perfil de fusión del ADN hibridado, el ADN de doble cadena se une a una columna y la mezcla se calienta en pequeños pasos. En cada paso, la columna se lava; las secuencias que se funden se vuelven monocatenarias y se lavan de la columna. Las temperaturas a las que el ADN marcado sale de la columna reflejan la cantidad de similitud entre las secuencias (y la muestra de autohibridación sirve como control). Estos resultados se combinan para determinar el grado de similitud genética entre organismos.
Se introdujo un método para hibridar un gran número de muestras de ADN con un gran número de sondas de ADN en una sola membrana. Estas muestras tendrían que separarse en sus propios carriles dentro de las membranas y luego la membrana tendría que girarse a un ángulo diferente donde daría como resultado una hibridación simultánea con muchas sondas de ADN diferentes. [1]
Cuando se comparan varias especies, los valores de similitud permiten ordenar los organismos en un árbol filogenético ; por lo tanto, es un enfoque posible para llevar a cabo la sistemática molecular . [ cita requerida ]
La hibridación ADN-ADN se usó una vez como método principal para distinguir especies bacterianas; un valor de similitud superior al 70% y ≤ 5 °C en ΔTm en la estabilidad del heterodúplex se describe como indicativo de que las cepas comparadas pertenecían a la misma especie. [ aclaración necesaria ] [2] [3] [4] En 2014, se sugirió un umbral del 79 % de similitud para separar las subespecies bacterianas. [5] La hibridación ADN-ADN no se ha probado mucho en todo el mundo porque podría llevar años obtener resultados y no siempre es tan fácil de realizar en los laboratorios de rutina. Sin embargo, en 2004, se probó un nuevo método mediante la digestión de perfiles de fusión con Sau3A en microplacas para obtener un resultado de prueba de hibridación ADN-ADN más rápido.[6]