La cromatografía líquida micelar ( MLC ) es una forma de cromatografía líquida de fase inversa que utiliza una solución micelar acuosa como fase móvil. [1]
Acrónimo | MLC |
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Clasificación | Cromatografia |
Otras tecnicas | |
Relacionados | Cromatografía líquida de alta resolución Cromatografía en fase normal acuosa Cromatografía de exclusión por tamaño Cromatografía de intercambio iónico |
Teoría
El uso de micelas en cromatografía líquida de alta resolución fue introducido por primera vez por Armstrong y Henry en 1980. [2] [3] La técnica se utiliza principalmente para mejorar la retención y selectividad de varios solutos que de otro modo serían inseparables o estarían mal resueltos. La cromatografía líquida micelar (MLC) se ha utilizado en una variedad de aplicaciones que incluyen la separación de mezclas de solutos cargados y neutros, inyección directa de suero y otros fluidos fisiológicos, análisis de compuestos farmacéuticos , separación de enantiómeros , análisis de organometálicos inorgánicos y un huésped de otros.
Uno de los principales inconvenientes de la técnica es la reducción de la eficacia provocada por las micelas. A pesar de la eficiencia a veces pobre, MLC es una mejor opción que LC de intercambio iónico o LC de emparejamiento de iones para la separación de moléculas cargadas y mezclas de especies cargadas y neutras . [1] Algunos de los aspectos que se discutirán son los aspectos teóricos de MLC, el uso de modelos en la predicción de características retentivas de MLC, el efecto de las micelas en la eficiencia y selectividad, y aplicaciones generales de MLC.
La cromatografía líquida de alta resolución en fase inversa (RP-HPLC) implica una fase estacionaria no polar , a menudo una cadena de hidrocarburos , y una fase móvil o líquida polar. La fase móvil consiste generalmente en una porción acuosa con una adición orgánica, como metanol o acetonitrilo . Cuando se inyecta una solución de analitos en el sistema, los componentes comienzan a separarse de la fase móvil e interactuar con la fase estacionaria. Cada componente interactúa con la fase estacionaria de manera diferente dependiendo de su polaridad e hidrofobicidad . En HPLC de fase inversa, el soluto con la mayor polaridad interactuará menos con la fase estacionaria y pasará más tiempo en la fase móvil. A medida que disminuye la polaridad de los componentes, aumenta el tiempo de permanencia en la columna. Por tanto, se consigue una separación de componentes basada en la polaridad. [4] La adición de micelas a la fase móvil introduce una tercera fase en la que pueden dividirse los solutos.
Micelas
Las micelas se componen de monómeros tensioactivos o detergentes con un resto hidrófobo , o cola, en un extremo, y un resto hidrófilo , o grupo de cabeza, en el otro. El grupo de cabeza polar puede ser aniónico , catiónico , bipolar o no iónico. Cuando la concentración de un tensioactivo en solución alcanza su concentración micelar crítica (CMC), forma micelas que son agregados de los monómeros. La CMC es diferente para cada tensioactivo, al igual que el número de monómeros que forman la micela, denominado número de agregación (AN). [5] La Tabla 1 enumera algunos detergentes comunes utilizados para formar micelas junto con su CMC y AN cuando están disponibles.
Tipo | Nombre | CMC (mM) | UN |
Aniónico | Ácido cólico , sal de sodio | 14 | 2-4 |
Ácido desoxicólico , sal sódica | 5 | 4-10 | |
Ácido glicocólico , sal sódica | 13 | 2 | |
Dodecil sulfato de sodio (SDS) | 8.27 | 62 | |
Ácido taurocólico , sal sódica | 10-15 | 4 | |
Tetradecil sulfato de sodio | 2.1 | ||
Catiónico | Cloruro de cetiltrimetilamonio | 1 | |
Bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB) | 1.3 | 78 | |
Bromuro de dodeciltrimetilamonio (DTAB) | 14 | 50 | |
Bromuro de hexadeciltrimetilamonio | 0,026 | 169 | |
Zwiteriónico | 3 - [(3-colamidopropil) dimetilamonio] -1-propanosulfonato ( CHAPS ) | 8 | 10 |
3 - [(3-colamidopropil) dimetilamonio] -2-hidroxi-1-propanosulfonato (CHAPSO) | 8 | 11 | |
Sulfonato de N-Dodecil-N, N-dimetilamonio-3-propano | 3.3 | ||
No iónico | n-decil-bD-glucopiranósido | 2.2 | |
Triton X-100 | 0,24 | 140 | |
Polioxietileno (23) dodecanol (BRIJ 35) | 0,1 | ||
Monooleato de polioxietileno [20] -sorbitano ( Tween 80 ) | 0,01 | ||
Monolaurato de polioxietileno [20] -sorbitano ( Tween 20 ) | 0,059 |
Muchas de las características de las micelas difieren de las de los disolventes a granel. Por ejemplo, las micelas son, por naturaleza, espacialmente heterogéneas con un hidrocarburo, un núcleo casi anhidro y un grupo de cabeza polar altamente solvatado . Tienen una alta relación superficie-volumen debido a su pequeño tamaño y forma generalmente esférica . Su entorno circundante ( pH , fuerza iónica, ion tampón, presencia de un codisolvente y temperatura ) influye en su tamaño, forma, concentración micelar crítica, número de agregación y otras propiedades. [6]
Otra propiedad importante de las micelas es el punto Kraft , la temperatura a la que la solubilidad del tensioactivo es igual a su CMC. Para aplicaciones de HPLC que involucran micelas, es mejor elegir un surfactante con un punto Kraft y CMC bajos. Una CMC alta requeriría una alta concentración de tensioactivo que aumentaría la viscosidad de la fase móvil, una condición indeseable. Además, una punta Kraft debe estar muy por debajo de la temperatura ambiente para evitar tener que aplicar calor a la fase móvil. Para evitar una posible interferencia con los detectores de absorción, un tensioactivo también debe tener una pequeña absortividad molar en la longitud de onda de análisis elegida . La dispersión de la luz no debería ser una preocupación debido al pequeño tamaño, unos pocos nanómetros , de la micela. [1]
El efecto de los aditivos orgánicos sobre las propiedades micelares es otra consideración importante. A menudo se agrega una pequeña cantidad de solvente orgánico a la fase móvil para ayudar a mejorar la eficiencia y mejorar las separaciones de compuestos. Se debe tener cuidado al determinar cuánto orgánico agregar. Una concentración demasiado alta de lo orgánico puede hacer que la micela se disperse, ya que depende de los efectos hidrófobos para su formación. La concentración máxima de materia orgánica depende del propio disolvente orgánico y de la micela. Esta información generalmente no se conoce con precisión, pero una práctica generalmente aceptada es mantener el porcentaje de volumen de orgánico por debajo del 15-20%. [1]
Investigar
Fischer y Jandera [7] estudiaron el efecto de cambiar la concentración de metanol en los valores de CMC para tres tensioactivos de uso común. Para el experimento se eligieron dos bromuro de hexadeciltrimetilamonio catiónico (CTAB) y bromuro de N- (α-carbetoxipentadecil) trimetilamonio ( Septonex ) y un tensioactivo aniónico, dodecilsulfato de sodio (SDS). En términos generales, la CMC aumentó a medida que aumentaba la concentración de metanol. Luego se concluyó que la distribución del tensioactivo entre la fase móvil en masa y la fase micelar se desplaza hacia la masa a medida que aumenta la concentración de metanol. Para CTAB, el aumento de CMC es mayor de 0 a 10% de metanol y es casi constante de 10 a 20%. Por encima del 20% de metanol, las micelas se disgregan y no existen. Para SDS, los valores de CMC no se ven afectados por debajo del 10% de metanol, pero comienzan a aumentar a medida que aumenta aún más la concentración de metanol. La desagregación ocurre por encima del 30% de metanol. Finalmente, para Septonex, solo se observa un ligero aumento en CMC hasta el 20%, con desagregación que ocurre por encima del 25%. [7]
Como se ha afirmado, la fase móvil en MLC consiste en micelas en un solvente acuoso , usualmente con una pequeña cantidad de modificador orgánico agregado para completar la fase móvil. Se usa una fase estacionaria unida a alquilo de fase inversa típica . La primera discusión de la termodinámica involucrada en el mecanismo de retención fue publicada por Armstrong y Nome en 1981. [8] En MLC, hay tres coeficientes de partición que deben tenerse en cuenta. El soluto se repartirá entre el agua y la fase estacionaria (KSW), el agua y las micelas (KMW), y las micelas y la fase estacionaria (KSM).
Armstrong y Nome derivaron una ecuación que describe los coeficientes de partición en términos del factor de retención , formalmente factor de capacidad, k ¢. En HPLC, el factor de capacidad representa la relación molar del soluto en la fase estacionaria a la fase móvil. El factor de capacidad se mide fácilmente en función de los tiempos de retención del compuesto y cualquier compuesto no retenido. La ecuación reescrita por Guermouche et al. [9] se presenta aquí:
- 1 / k ¢ = [n • (KMW-1) / (f • KSW)] • CM + 1 / (f • KSW)
Dónde:
- k ¢ es el factor de capacidad del soluto
- KSW es el coeficiente de partición del soluto entre la fase estacionaria y el agua.
- KMW es el coeficiente de partición del soluto entre las micelas y el agua.
- f es la relación de volumen de fase (volumen de fase estacionaria / volumen de fase móvil)
- n es el volumen molar del tensioactivo
- CM es la concentración de la micela en la fase móvil (concentración total de tensioactivo - concentración micelar crítica)
Una gráfica de 1 / k ¢ frente a CM da una línea recta en la que KSW se puede calcular a partir de la intersección y KMW se puede obtener a partir de la relación entre la pendiente y la intersección. Finalmente, KSM se puede obtener a partir de la relación de los otros dos coeficientes de partición:
- KSM = KSW / KMW [8]
Como se puede observar en la Figura 1, KMW es independiente de cualquier efecto de la fase estacionaria, asumiendo la misma fase móvil micelar. [9]
La validez del mecanismo de retención propuesto por Armstrong y Nome se ha confirmado con éxito y se ha repetido experimentalmente. Sin embargo, también se han propuesto algunas variaciones y teorías alternativas. Jandera y Fischer [10] desarrollaron ecuaciones para describir la dependencia del comportamiento de retención del cambio en las concentraciones micelares. Descubrieron que la retención de la mayoría de los compuestos probados disminuía al aumentar las concentraciones de micelas. A partir de esto, se puede suponer que los compuestos se asocian con las micelas ya que pasan menos tiempo asociados con la fase estacionaria. [10]
Foley propuso un modelo retentivo similar al de Armstrong y Nome, que era un modelo general para equilibrios químicos secundarios en cromatografía líquida. [11] Si bien este modelo se desarrolló en una referencia anterior, y podría usarse para cualquier equilibrio químico secundario , como el equilibrio ácido-base y el emparejamiento de iones, Foley refinó aún más el modelo para MLC. Cuando se añade un equilibrante (X), en este caso tensioactivo, a la fase móvil, se crea un equilibrio secundario en el que existirá un analito como analito libre (A) y formará un complejo con el equilibrante (AX). Las dos formas serán retenidas por la fase estacionaria en diferentes grados, permitiendo así variar la retención ajustando la concentración de equilibrante (micelas). [11]
La ecuación resultante resuelta para el factor de capacidad en términos de coeficientes de partición es muy similar a la de Armstrong y Nome:
- 1 / k ¢ = (KSM / k ¢ S) • [M] + 1 / k ¢ S
Dónde:
- k ¢ es el factor de capacidad del soluto complejado y del soluto libre
- k ¢ S es el factor de capacidad del soluto libre
- KSM es el coeficiente de partición del soluto entre la fase estacionaria y la micela
- [M] puede ser la concentración de tensioactivo o la concentración de micelas
Foley utilizó la ecuación anterior para determinar las constantes de asociación soluto-micela y los factores de retención de soluto libre para una variedad de solutos con diferentes tensioactivos y fases estacionarias. A partir de estos datos, es posible predecir el tipo y las concentraciones óptimas de tensioactivo necesarias para un soluto o solutos determinados. [11]
Foley no ha sido el único investigador interesado en determinar las constantes de asociación soluto-micela. Un artículo de revisión de Marina y García con 53 referencias analiza la utilidad de obtener constantes de asociación soluto-micela. [12] Las constantes de asociación para dos solutos pueden usarse para ayudar a comprender el mecanismo de retención. El factor de separación de dos solutos, a, se puede expresar como KSM1 / KSM2. Si el experimental a coincide con la relación de los dos coeficientes de partición soluto-micela, se puede suponer que su retención ocurre a través de una transferencia directa de la fase micelar a la fase estacionaria. Además, el cálculo de a permitiría predecir la selectividad de la separación antes de realizar el análisis, siempre que se conozcan los dos coeficientes. [12]
El deseo de predecir el comportamiento de retención y la selectividad ha llevado al desarrollo de varios modelos matemáticos. [13] Los cambios en el pH, la concentración de tensioactivo y la concentración de modificador orgánico juegan un papel importante en la determinación de la separación cromatográfica. A menudo, uno o más de estos parámetros deben optimizarse para lograr la separación deseada, pero los parámetros óptimos deben tener en cuenta las tres variables simultáneamente. La revisión de García-Alvarez-Coque et al. mencionó varios modelos exitosos para diferentes escenarios, algunos de los cuales se mencionarán aquí. Los modelos clásicos de Armstrong y Nome y Foley se utilizan para describir los casos generales. El modelo de Foley se aplica a muchos casos y se ha verificado experimentalmente para solutos iónicos, neutros, polares y apolares; tensioactivos aniónicos, catiónicos y no iónicos, y fases estacionarias C8, C¬18 y ciano . El modelo comienza a desviarse para solutos muy y poco retenidos. Los solutos muy retenidos pueden unirse irreversiblemente a la fase estacionaria, donde los solutos poco retenidos pueden eluir en el volumen vacío de la columna. [13]
Otros modelos propuestos por Arunyanart y Cline-Love y Rodgers y Khaledi describen el efecto del pH sobre la retención de ácidos y bases débiles. Estos autores derivaron ecuaciones que relacionan el pH y la concentración micelar con la retención. A medida que varía el pH, se observa un comportamiento sigmoideo para la retención de especies ácidas y básicas. Se ha demostrado que este modelo predice con precisión el comportamiento de retención. [13] Aún otros modelos predicen el comportamiento en sistemas micelares híbridos usando ecuaciones o modelando el comportamiento basado en experimentación controlada. Además, se han sugerido modelos que tienen en cuenta el efecto simultáneo del pH, la micela y la concentración orgánica. Estos modelos permiten una mejora adicional de la optimización de la separación de ácidos y bases débiles. [13]
Un grupo de investigación, Rukhadze, et al. [14] derivó una relación lineal de primer orden que describe la influencia de la micela y la concentración orgánica, y el pH en la selectividad y resolución de siete barbitúricos . Los investigadores descubrieron que una ecuación matemática de segundo orden se ajustaría con mayor precisión a los datos. Las derivaciones y los detalles experimentales están más allá del alcance de esta discusión. El modelo logró predecir las condiciones experimentales necesarias para lograr una separación de compuestos que tradicionalmente son difíciles de resolver. [14]
Jandera, Fischer y Effenberger abordaron el problema del modelado de otra manera. [15] El modelo utilizado se basó en índices de lipofilia y polaridad de solutos. El índice de lipofilicidad relaciona un soluto dado con un número hipotético de átomos de carbono en una cadena de alquilo. Se basa y depende de una serie de calibración determinada determinada experimentalmente. El índice de lipofilicidad debe ser independiente de la fase estacionaria y la concentración de modificador orgánico. El índice de polaridad es una medida de la polaridad de las interacciones soluto-solvente. Depende en gran medida del disolvente orgánico y algo de los grupos polares presentes en la fase estacionaria. Se analizaron 23 compuestos con diferentes fases móviles y se compararon con los índices de lipofilia y polaridad. Los resultados mostraron que el modelo podría aplicarse a MLC, pero se encontró un mejor comportamiento predictivo con concentraciones de tensioactivo por debajo de la CMC, submicellar. [15]
Un último tipo de modelo basado en las propiedades moleculares de un soluto es una rama de las relaciones cuantitativas estructura-actividad (QSAR). Los estudios QSAR intentan correlacionar la actividad biológica de los fármacos , o una clase de fármacos, con las estructuras. El medio de absorción normalmente aceptado de un fármaco, o su metabolito, es mediante la división en bicapas lipídicas . El descriptor más utilizado en QSAR para determinar la hidrofobicidad de un compuesto es el coeficiente de reparto octanol- agua, log P. [16] MLC proporciona una alternativa atractiva y práctica a QSAR. Cuando se añaden micelas a una fase móvil, existen muchas similitudes entre la fase móvil micelar / fase estacionaria y la interfaz biológica membrana / agua. En MLC, la fase estacionaria se modifica mediante la adsorción de monómeros tensioactivos que son estructuralmente similares a las cadenas de hidrocarburos membranosos en el modelo biológico. Además, las interacciones hidrófilas / hidrófobas de las micelas son similares a las de las regiones polares de una membrana. Por tanto, el desarrollo de relaciones cuantitativas estructura-retención (QRAR) se ha generalizado. [17]
Escuder-Gilabert y col. [18] probó tres modelos de retención QRAR diferentes en compuestos iónicos. Se probaron varias clases de compuestos que incluyen catecolaminas , anestésicos locales , diuréticos y aminoácidos . Se encontró que el mejor modelo que relaciona log K y log P es aquel en el que la carga molar total de un compuesto a un pH dado se incluye como variable. Este modelo demostró proporcionar predicciones bastante precisas de log P, R > 0,9. [18] Se han realizado otros estudios que desarrollan modelos QRAR predictivos para antidepresivos tricíclicos [17] y barbitúricos. [dieciséis]
Eficiencia
La principal limitación en el uso de MLC es la reducción de la eficiencia (ensanchamiento de picos) que se observa cuando se utilizan fases móviles micelares puramente acuosas. [19] Se han teorizado varias explicaciones para la baja eficiencia. Se ha postulado como posibles causas la mala humectación de la fase estacionaria por la fase móvil acuosa micelar, la transferencia lenta de masa entre las micelas y la fase estacionaria, y la mala transferencia de masa dentro de la fase estacionaria. Para mejorar la eficiencia, los enfoques más comunes han sido la adición de pequeñas cantidades de alcohol isopropílico y el aumento de temperatura. Una revisión de Berthod [19] estudió las teorías combinadas presentadas anteriormente y aplicó la ecuación de Knox para determinar de forma independiente la causa de la eficiencia reducida. La ecuación de Knox se usa comúnmente en HPLC para describir las diferentes contribuciones al ensanchamiento general de la banda de un soluto. La ecuación de Knox se expresa como:
- h = An ^ (1/3) + B / n + Cn
Dónde:
- h = el recuento de la altura de la placa reducida (altura de la placa / diámetro de partícula de la fase estacionaria)
- n = la velocidad lineal reducida de la fase móvil (velocidad multiplicada por el diámetro de partícula de la fase estacionaria / coeficiente de difusión del soluto en la fase móvil)
- A, B y C son constantes relacionadas con la anisotropía del flujo de solutos (difusión de remolinos), la difusión longitudinal molecular y las propiedades de transferencia de masa, respectivamente.
El uso de Berthod de la ecuación de Knox para determinar experimentalmente cuál de las teorías propuestas era la más correcta lo llevó a las siguientes conclusiones. La anisotropía de flujo en la fase micelar parece ser mucho mayor que en las fases móviles hidroorgánicas tradicionales de viscosidad similar . Es probable que esto se deba a la obstrucción parcial de los poros de la fase estacionaria por las moléculas de tensioactivo adsorbidas. El aumento de la temperatura de la columna sirvió tanto para disminuir la viscosidad de la fase móvil como para la cantidad de tensioactivo adsorbido. Ambos resultados reducen el término A y la cantidad de difusión de remolinos y, por lo tanto, aumentan la eficiencia. [19]
El aumento del término B, en relación con la difusión longitudinal, se asocia con la disminución del coeficiente de difusión de solutos en la fase móvil, DM, debido a la presencia de las micelas, y un aumento del factor de capacidad, k ¢. Una vez más, esto está relacionado con la adsorción de tensioactivo en la fase estacionaria que causa una disminución dramática en el coeficiente de difusión de soluto en la fase estacionaria, DS. De nuevo, un aumento de temperatura, ahora junto con la adición de alcohol a la fase móvil, disminuye drásticamente la cantidad de tensioactivo absorbido. A su vez, ambas acciones reducen el término C causado por una lenta transferencia de masa de la fase estacionaria a la fase móvil. Se puede lograr una mayor optimización de la eficiencia reduciendo el caudal a uno que se corresponda estrechamente con el derivado de la ecuación de Knox. En general, las tres teorías propuestas parecían tener efectos contribuyentes de la baja eficiencia observada y pueden contrarrestarse parcialmente mediante la adición de modificadores orgánicos, en particular alcohol, y el aumento de la temperatura de la columna. [19]
Aplicaciones
A pesar de la eficacia reducida frente a la HPLC de fase inversa, se han informado cientos de aplicaciones que utilizan MLC. Uno de los más ventajosos es la posibilidad de inyectar directamente fluidos fisiológicos. Las micelas tienen la capacidad de solubilizar proteínas, lo que permite que la MLC sea útil en el análisis de fluidos biológicos no tratados como plasma , suero y orina . [1] Martinez y col. [20] encontraron que el MLC es muy útil para analizar una clase de fármacos llamados antagonistas beta , los llamados bloqueadores beta , en muestras de orina. La principal ventaja del uso de MLC con este tipo de muestra, es el gran ahorro de tiempo en la preparación de la muestra. Los métodos alternativos de análisis, incluida la HPLC de fase inversa, requieren largos procedimientos de extracción y procesamiento de muestras antes de que pueda comenzar el análisis. Con MLC, a menudo es posible la inyección directa, con tiempos de retención de menos de 15 minutos para la separación de hasta nueve beta-antagonistas. [20]
Otra aplicación comparó HPLC de fase reversa con MLC para el análisis de deferoxamina en suero. [21] La desferrioxamina (DFO) es un fármaco de uso común para eliminar el exceso de hierro en pacientes con niveles crónicos y agudos. El análisis de DFO junto con sus complejos quelados , Fe (III) DFO y Al (III) DFO ha demostrado ser difícil en el mejor de los casos en intentos anteriores. Este estudio encontró que la inyección directa del suero era posible para MLC, frente a un paso de ultrafiltración necesario en HPLC. Este análisis demostró tener dificultades con la separación de los compuestos DFO quelados y con los niveles de sensibilidad para el propio DFO cuando se aplicó MLC. El investigador descubrió que, en este caso, la HPLC de fase inversa era una técnica mejor y más sensible a pesar del ahorro de tiempo en la inyección directa. [21]
El análisis de productos farmacéuticos por MLC también está ganando popularidad. La selectividad y la forma de los picos de MLC sobre la cromatografía de pares iónicos de uso común se mejoran mucho. [22] MLC imita, pero mejora, la selectividad ofrecida por los reactivos de apareamiento de iones para la separación de ingredientes activos en fármacos . En el caso de los fármacos básicos, el MLC mejora el exceso de colas de los picos que se observa con frecuencia en el apareamiento de iones. Los fármacos hidrófilos a menudo no se retienen usando HPLC convencional, son retenidos por MLC debido a la solubilización en las micelas. Los fármacos que se encuentran comúnmente en los medicamentos para el resfriado como el acetaminofén , el ácido L-ascórbico , la fenilpropanolamina HCL, el hibenzato de tipepidina y el maleato de clorfeniramina se han separado con éxito con una buena forma de pico utilizando MLC. Los medicamentos básicos adicionales como muchos narcóticos, como la codeína y la morfina , también se han separado con éxito utilizando MLC. [22]
Otra nueva aplicación de MLC implica la separación y análisis de compuestos inorgánicos , en su mayoría iones simples. Esta es un área relativamente nueva para MLC, pero ha visto algunos resultados prometedores. [23] Se ha observado que la MLC proporciona una mejor selectividad de los iones inorgánicos que la cromatografía de intercambio iónico o de emparejamiento de iones. Si bien esta aplicación se encuentra todavía en las etapas iniciales de desarrollo, existen posibilidades de separaciones novedosas y muy mejoradas de especies inorgánicas. [23]
Desde que se informó por primera vez sobre la técnica en 1980, la cromatografía líquida micelar se ha utilizado en cientos de aplicaciones. Esta técnica controlada por micelas brinda oportunidades únicas para resolver problemas de separación complicados. A pesar de la baja eficiencia de MLC, se ha utilizado con éxito en muchas aplicaciones. El uso de MLC en el futuro parece ser extremadamente ventajoso en las áreas de fluidos fisiológicos, productos farmacéuticos e incluso iones inorgánicos. La técnica ha demostrado ser superior al emparejamiento e intercambio de iones para muchas aplicaciones. A medida que se desarrollen nuevos enfoques para combatir la escasa eficiencia de MLC, es seguro que su aplicación se extenderá y obtendrá más aceptación.
Referencias
- ↑ a b c d e f Khaledi, MG (12 de septiembre de 1997). "Micelas como medio de separación en cromatografía líquida de alto rendimiento y electroforesis capilar de alto rendimiento: visión general y perspectiva". Journal of Chromatography A . 780 (1): 3–40. doi : 10.1016 / S0021-9673 (97) 00610-9 .
- ^ Armstrong, DW y Henry, SJ (1980). "Uso de una fase móvil micelar acuosa para la separación de fenoles e hidrocarburos aromáticos polinucleares mediante HPLC". Revista de cromatografía líquida y tecnologías relacionadas . 3 (5): 657–662. doi : 10.1080 / 01483918008060181 .
- ^ DW Armstrong, septiembre de Purif. Métodos 14 (1985) 213
- ^ Meyer, V. (1999). Cromatografía líquida práctica de alto rendimiento (3 ed.). John Wiley e hijos. págs. 14-16. ISBN 978-0-471-98373-6.
- ^ a b Baker, D. (1995). Electroforesis capilar . Nueva York: Wiley Interscience. págs. 56–57. ISBN 978-0-471-11763-6.
- ^ Poole, C. Revista de cromatografía A, 1998, 807, 307-310
- ^ a b Fischer, J. y Jandera, P. (31 de mayo de 1996). "Comportamiento cromatográfico en cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa con fases móviles micelares y submicellares: efectos del modificador orgánico". Journal of Chromatography B . 681 (1): 3–19. doi : 10.1016 / 0378-4347 (95) 00538-2 . PMID 8798907 .[ enlace muerto ]
- ^ a b Armstrong, Daniel W. y Nome, Faruk (septiembre de 1981). "Comportamiento de partición de solutos eluidos con fases móviles micelares en cromatografía líquida". Química analítica . 53 (11): 1662–1666. doi : 10.1021 / ac00234a026 .
- ^ a b Guermouche, MH; Habel, D .; Guermouche, S. (junio de 1998). "Aspectos teóricos de la cromatografía líquida micelar utilizando tensioactivo DAPS C 12 ". Equilibrios de fase fluida . 147 (1–2): 301–307. doi : 10.1016 / S0378-3812 (98) 00242-8 .
- ^ a b Jandera, P. y Fischer, J. (29 de marzo de 1996). "Comportamiento cromatográfico en cromatografía líquida de alta resolución en fase inversa con fases móviles micelares y submicellares". Journal of Chromatography A . 728 (1–2): 279–298. doi : 10.1016 / 0021-9673 (95) 00955-8 .[ enlace muerto ]
- ↑ a b c Foley, JP Analytica Chimica Acta, 1990, 231, 237-247
- ^ a b Marina, ML y García, MA (12 de septiembre de 1997). "Evaluación de coeficientes de distribución en cromatografía líquida micelar". Journal of Chromatography A . 780 (1-2): 103-116. doi : 10.1016 / S0021-9673 (97) 00329-4 .[ enlace muerto ]
- ↑ a b c d García-Alvarez-Coque, MC; Torres-Lapasio, JR; Baeza-Baeza, JJ; Revista de cromatografía A, 1997, 780, 129-148
- ^ a b Rukhadze, M .; Bezarashvili, G .; Sebiskveradze, M .; Meyer, V. (1 de mayo de 1998). "Separación de barbitúricos con cromatografía líquida micelar y optimización por diseño matemático de segundo orden". Journal of Chromatography A . 805 (1–2): 45–53. doi : 10.1016 / S0021-9673 (97) 01301-0 .[ enlace muerto ]
- ^ a b Jandera, P .; Fischer, J .; Effenberger, H. (20 de mayo de 1998). "Caracterización de la retención en cromatografía líquida micelar de alta resolución y en cromatografía electrocinética micelar mediante índices de lipofilicidad y polaridad". Journal of Chromatography A . 807 (1): 57–70. doi : 10.1016 / S0021-9673 (98) 00067-3 .[ enlace muerto ]
- ↑ a b Cuenca-Benito, M .; Sagrado, S .; Villanueva-Camanas, R .; Medina-Hernández, M; Revista de cromatografía A, 1998, 814, 121-132
- ^ a b Quiñones-Torrelo, C .; Sagrado, S .; Villanueva-Camañas, RM; Medina-Hernández, MJ (24 de julio de 1999). "Desarrollo de modelos de relación de actividad-retención predictiva de antidepresivos tricíclicos por cromatografía líquida micelar". Revista de química medicinal . 42 (16): 3154–3162. doi : 10.1021 / jm9910369 . PMID 10447960 .
- ^ a b Escuder-Gilabert, L .; Sanchis-Mallols, JM; Sagrado, S .; Medina-Hernández, MJ; Villanueva-Camañas, RM (9 de octubre de 1998). "Cuantificación cromatográfica de la hidrofobicidad de compuestos iónicos mediante el uso de fases móviles micelares". Journal of Chromatography A . 823 (1–2): 549–559. doi : 10.1016 / S0021-9673 (98) 00456-7 .[ enlace muerto ]
- ^ a b c d Bethod, Alain (12 de septiembre de 1997). "Causas y remediación de la eficiencia reducida en cromatografía líquida micelar". Journal of Chromatography A . 780 (1–2): 191–206. doi : 10.1016 / S0021-9673 (97) 00195-7 .[ enlace muerto ]
- ^ a b Rapado Martínez, I .; Villanueva Camañas, RM; García Alvarez-Coque, MC (5 de diciembre de 1998). "Cromatografía líquida micelar: una técnica digna para la determinación de β-antagonistas en muestras de orina". Química analítica . 71 (2): 319–326. doi : 10.1021 / ac980472k . PMID 9949726 .
- ^ a b Menéndez-Fraga, P .; Blanco-González, E .; Sanz-Medel, A .; Cannata-Andía, JB (12 de diciembre de 1997). "Cromatografía líquida de fase micelar versus fase inversa para la determinación de deferoxamina y sus quelatos con aluminio y hierro en suero urémico". Talanta . 45 (1): 25–33. doi : 10.1016 / S0039-9140 (97) 00097-0 . PMID 18966977 .[ enlace muerto ]
- ^ a b Nishi, H. (12 de septiembre de 1997). "Aplicaciones farmacéuticas de las micelas en cromatografía y electroforesis". Journal of Chromatography A . 780 (1–2): 243–264. doi : 10.1016 / S0021-9673 (97) 00347-6 . PMID 9335130 .[ enlace muerto ]
- ^ a b Okada, Tetsuo (12 de septiembre de 1997). "Cromatografía micelar de compuestos inorgánicos". Journal of Chromatography A . 780 (1–2): 343–360. doi : 10.1016 / S0021-9673 (97) 00291-4 .[ enlace muerto ]