Extensión de base única


La extensión de base única (SBE) es un método para determinar la identidad de una base de nucleótido en una posición específica a lo largo de un ácido nucleico . El método se utiliza para identificar un polimorfismo de un solo nucleótido (SNP).

En el método, un oligonucleótidoel cebador se hibrida con una región complementaria a lo largo del ácido nucleico para formar un dúplex, con el extremo 3' terminal del cebador directamente adyacente a la base de nucleótidos que se va a identificar. Usando una polimerasa de ADN, el cebador de oligonucleótidos se extiende enzimáticamente por una sola base en presencia de los cuatro terminadores de nucleótidos; el terminador de nucleótido complementario a la base en la plantilla que se está interrogando se incorpora e identifica. La presencia de los cuatro terminadores suprime la incorporación errónea de nucleótidos no complementarios. Se pueden tomar muchos enfoques para determinar la identidad de un terminador incorporado, incluido el marcaje de fluorescencia, el marcaje de masas para espectrometría de masas, el marcaje de isótopos y el marcaje de la base con un hapteno y la detección cromogénica con un conjugado de anticuerpo-enzima anti-hapteno (p. ej., a través de un formato ELISA).

El método fue inventado por Philip Goelet, Michael Knapp, Richard Douglas y Stephen Anderson mientras trabajaban en la empresa Molecular Tool. Este enfoque fue diseñado para el genotipado de SNP de alto rendimiento y originalmente se denominó "Análisis de bits genéticos" (GBA). Illumina, Inc. utiliza este método en su tecnología Infinium ( http://www.illumina.com/technology/beadarray-technology/infinium-hd-assay.html ) para medir los niveles de metilación del ADN en el genoma humano.