Prueba de Ames
La prueba de Ames es un método ampliamente utilizado que utiliza bacterias para probar si una sustancia química determinada puede causar mutaciones en el ADN del organismo de prueba. Más formalmente, es un ensayo biológico para evaluar el potencial mutagénico de los compuestos químicos. [1] Una prueba positiva indica que el químico es mutagénico y, por lo tanto, puede actuar como carcinógeno , porque el cáncer a menudo está relacionado con la mutación .. La prueba sirve como un ensayo rápido y conveniente para estimar el potencial carcinogénico de un compuesto porque los ensayos carcinógenos estándar en ratones y ratas requieren mucho tiempo (de dos a tres años en completarse) y son costosos. Sin embargo, se conocen falsos positivos y falsos negativos. [2]
El procedimiento fue descrito en una serie de artículos a principios de la década de 1970 por Bruce Ames y su grupo en la Universidad de California, Berkeley . [3] [4] [5] [6]
La prueba de Ames utiliza varias cepas de la bacteria Salmonella typhimurium que portan mutaciones en genes implicados en la síntesis de histidina . Estas cepas son mutantes auxotróficas , es decir, requieren histidina para crecer, pero no pueden producirla. El método prueba la capacidad de la sustancia probada para crear mutaciones que resulten en un retorno a un estado "prototrófico", de modo que las células puedan crecer en un medio libre de histidina.
Las cepas de prueba están especialmente diseñadas para detectar mutaciones de cambio de marco (por ejemplo, cepas TA-1537 y TA-1538) o puntuales (por ejemplo, cepa TA-1531) en los genes necesarios para sintetizar histidina, de modo que se puedan identificar los mutágenos que actúan a través de diferentes mecanismos. Algunos compuestos son bastante específicos y causan reversiones en solo una o dos cepas. [4] Las cepas de prueba también portan mutaciones en los genes responsables de la síntesis de lipopolisacáridos , lo que hace que la pared celular de la bacteria sea más permeable, [5] y en el sistema de reparación por escisión para que la prueba sea más sensible. [6]
Los organismos más grandes, como los mamíferos, tienen procesos metabólicos que podrían convertir potencialmente una sustancia química que no se considera mutagénica en una que sí lo es, o una que se considera mutagénica en otra que no lo es. [7] Por lo tanto, para probar de manera más efectiva la mutagenicidad de un compuesto químico en relación con organismos más grandes, se pueden agregar enzimas de hígado de rata en un intento de replicar el efecto de los procesos metabólicos en el compuesto que se está probando en la prueba de Ames. El extracto de hígado de rata se agrega opcionalmente para simular el efecto del metabolismo , ya que algunos compuestos, como el benzo[ a ]pireno , no son mutagénicos en sí mismos, pero sus productos metabólicos sí lo son. [3]
Las bacterias se esparcen en una placa de agar con una pequeña cantidad de histidina. Esta pequeña cantidad de histidina en el medio de cultivo permite que la bacteria crezca durante un tiempo inicial y tenga la oportunidad de mutar. Cuando se agota la histidina, solo sobrevivirán las bacterias que han mutado para obtener la capacidad de producir su propia histidina. La placa se incuba durante 48 horas. La mutagenicidad de una sustancia es proporcional al número de colonias observadas.
