Los tejidos que se han conservado con formaldehído , un compuesto altamente reactivo, contienen una variedad de modificaciones químicas que pueden reducir la detectabilidad de proteínas en procedimientos biomédicos como la inmunohistoquímica . La recuperación de antígenos es un enfoque para reducir o eliminar estas modificaciones químicas. Los dos métodos principales de recuperación de antígenos son la recuperación de epítopos mediada por calor (HIER) y la recuperación de epítopos inducida por proteolíticos (PIER).
Recuperación de epítopos inducida por proteasa (PIER)
En PIER, se han utilizado enzimas que incluyen proteinasa K, tripsina y pepsina para restaurar la unión de anticuerpos a su epítopo. El supuesto mecanismo de acción es la escisión de péptidos que enmascaran el epítopo, restaurando la antigenicidad.
Las desventajas de PIER incluyen una baja tasa de éxito para restaurar la inmunorreactividad y la posible destrucción de la morfología del tejido y el antígeno de interés.
Recuperación de epítopos inducida por calor (HIER)
Se cree que HIER revierte algunos enlaces cruzados y permite la restauración de la estructura secundaria o terciaria del epítopo. [1] El protocolo requiere optimización para cada tejido, método de fijación y antígeno que se estudiará.
En general, HIER tiene una tasa de éxito mucho mayor que PIER. HIER se puede realizar con hornos microondas, ollas a presión, vapores de verduras, autoclaves o baños de agua. HIER es sensible al tiempo, temperatura, tampón y pH.
Recuperación de epítopos a temperatura ambiente (RTER)
RTER implica la reversión de enlaces cruzados utilizando ácidos como ácido clorhídrico (pH 1) o ácido fórmico (pH 2).
Recuperación de epítopos de sección congelada (FSER)
FSER se refiere a dos métodos de recuperación de antígenos diseñados específicamente para cortes de tejido congelados con criostato fijado con aldehído o células cultivadas; los métodos SDS y Heating En Bloc. [2]
El método SDS requiere un breve pretratamiento de 5 minutos con SDS al 1% y puede producir un aumento en la intensidad de la tinción por IHC, así como inmunofluorescencia. [3]
Calentar En Bloc toma bloques de tejido fijados en paraformaldehído, los calienta en soluciones de recuperación y luego los congela con hielo seco. El calentamiento ya se usa en AR y se ha demostrado que es ampliamente efectivo, pero se ha demostrado que los métodos de calentamiento anteriores matan las secciones congeladas. Este método demostró mejorar la inmunorreactividad para una amplia gama de antígenos y reducir la tinción de fondo en algunos casos. [4]
Referencias
- ^ "Métodos de recuperación de antígeno" . R & D Systems . Consultado el 20 de marzo de 2019 .
- ^ "Métodos, técnicas, protocolos de recuperación de antígenos" . www.ihcworld.com . Consultado el 3 de mayo de 2021 .
- ^ Brown, D. "Recuperación de antígeno en secciones de tejido de criostato y células cultivadas mediante tratamiento con dodecil sulfato de sodio (SDS)" . Pubmed . Consultado el 3 de mayo de 2021 .
- ^ Ino, Hidetoshi. "Recuperación de antígeno por calentamiento en bloque para material congelado prefijado" . Pubmed . Consultado el 3 de mayo de 2021 .