La sincronización celular es un proceso mediante el cual las células de un cultivo en diferentes etapas del ciclo celular pasan a la misma fase. La sincronía celular es un proceso vital en el estudio de las células que progresan a través del ciclo celular, ya que permite recopilar datos de toda la población en lugar de depender únicamente de experimentos unicelulares. Los tipos de sincronización se clasifican ampliamente en dos grupos; fraccionamiento físico y bloqueo químico.
El fraccionamiento físico es un proceso mediante el cual las células que se dividen continuamente se separan en poblaciones enriquecidas en fase según características como las siguientes:
Dado que las células adquieren diferentes morfologías y marcadores de superficie a lo largo del ciclo celular, estos rasgos se pueden utilizar para separar por fase. Hay dos métodos de uso común.
(Anteriormente llamado: centrifugación en contracorriente) La elutriación centrífuga se puede utilizar para separar células en diferentes fases del ciclo celular en función de su tamaño y velocidad de sedimentación (relacionada con el coeficiente de sedimentación ). Debido a los patrones de crecimiento consistentes a lo largo del ciclo celular, la elutriación centrífuga puede separar las células en fases G1 , S , G2 y M aumentando el tamaño (y aumentando los coeficientes de sedimentación) con resolución disminuida entre las fases G2 y M debido a la heterogeneidad celular y la falta de un cambio de tamaño distinto. [1]
Las células más grandes sedimentan más rápido, por lo que una célula en G2, que ha experimentado más tiempo de crecimiento, sedimentará más rápido que una célula en G1 y, por lo tanto, puede fraccionarse. Las células que crecen en suspensión tienden a ser más fáciles de elutrir dado que no se adhieren entre sí y tienen formas redondeadas y uniformes. Sin embargo, algunos tipos de células adherentes se pueden tratar con tripsina y resuspender para la elutrición, ya que adoptarán una forma más redondeada en suspensión. [2]
La citometría de flujo permite la detección, el recuento y la medición de las propiedades físicas y químicas de las células. Las células se suspenden en líquido y se pasan por el citómetro de flujo. Las células se envían de una en una a través de un rayo láser y un detector mide la dispersión de la luz. Las células o sus componentes se pueden etiquetar con marcadores fluorescentes para que emitan diferentes longitudes de onda de luz en respuesta al láser, lo que permite la recopilación de datos adicionales.