El ciclo de cuantificación / calificación (C q ) es un parámetro utilizado en las técnicas de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real , que indica el número de ciclo en el que una curva de amplificación por PCR cumple un criterio matemático predefinido. AC q se puede usar para la cuantificación de la secuencia diana o para determinar si la secuencia diana está presente o no.
Dos criterios para determinar el C q son utilizados por diferentes termocicladores: ciclo umbral (C t ) es el número de ciclos necesarios para que la señal fluorescente de cruzar un umbral de valor dado. Por lo general, el umbral se establece por encima de la línea de base, aproximadamente 10 veces la desviación estándar del ruido de la línea de base, [1] para evitar efectos aleatorios en el C t . Sin embargo, el umbral no debe establecerse mucho más alto que eso para evitar una reproducibilidad reducida debido a factores no controlados.
El punto de cruce (Cp) y el punto de despegue (TOP) son el valor del ciclo de la segunda derivada máxima de la curva de amplificación. [2]
Referencias
- ^ "Tecnologías de la vida: manual de PCR en tiempo real" (PDF) . Gene-quantification.com . Consultado el 27 de septiembre de 2015 .
- ^ Tichopad, A .; Dilger, M .; Schwarz, G .; Pfaffl, MW (2003). "Determinación estandarizada de la eficiencia de la PCR en tiempo real a partir de una configuración de reacción única" . Investigación de ácidos nucleicos . Gene-quantification.com. 31 (20): 122e – 122. doi : 10.1093 / nar / gng122 . PMC 219490 . PMID 14530455 .