La interferometría de polarización dual ( DPI ) es una técnica analítica que prueba las capas moleculares adsorbidas a la superficie de una guía de ondas utilizando la onda evanescente de un rayo láser . Se utiliza para medir el cambio conformacional en proteínas u otras biomoléculas, según funcionan (lo que se conoce como relación de actividad de conformación ).
Instrumentación
DPI [1] enfoca la luz láser en dos guías de ondas. Una de estas funciones como guía de ondas de "detección" que tiene una superficie expuesta, mientras que la segunda funciona para mantener un haz de referencia. Se forma un patrón de interferencia bidimensional en el campo lejano combinando la luz que pasa a través de las dos guías de ondas. La técnica DPI rota la polarización del láser para excitar alternativamente dos modos de polarización de las guías de ondas. La medición del interferograma para ambas polarizaciones permite calcular tanto el índice de refracción como el espesor de la capa adsorbida. La polarización se puede cambiar rápidamente, lo que permite mediciones en tiempo real de las reacciones químicas que tienen lugar en la superficie de un chip en un sistema de flujo continuo. Estas medidas se pueden utilizar para inferir información conformacional sobre las interacciones moleculares que tienen lugar, a medida que cambia el tamaño de la molécula (a partir del espesor de la capa) y la densidad de pliegues (a partir del RI). El DPI se utiliza normalmente para caracterizar interacciones bioquímicas cuantificando cualquier cambio conformacional al mismo tiempo que se miden las velocidades de reacción, las afinidades y la termodinámica. [ cita requerida ]
La técnica es cuantitativa y en tiempo real (10 Hz) con una resolución dimensional de 0,01 nm. [2]
Aplicaciones
Una nueva aplicación para la interferometría de polarización dual surgió en 2008, donde la intensidad de la luz que pasa a través de la guía de ondas se extingue en presencia de crecimiento de cristales. Esto ha permitido controlar las etapas más tempranas de la nucleación de cristales de proteínas. [3] Las versiones posteriores de los interferómetros de polarización dual también tienen la capacidad de cuantificar el orden y la interrupción en películas delgadas birrefringentes. [4] Esto se ha utilizado, por ejemplo, para estudiar la formación de bicapas lipídicas y su interacción con proteínas de membrana. [5] [6]
Referencias
- ^ Cruz, G; Reeves, AA; Marca, S; Popplewell, JF; Peel, LL; Swann, MJ; Freeman, Nueva Jersey (2003). "Un nuevo biosensor óptico cuantitativo para la caracterización de proteínas". Biosensores y Bioelectrónica . 19 (4): 383–90. doi : 10.1016 / S0956-5663 (03) 00203-3 . PMID 14615097 .
- ^ Swann, MJ; Freeman, Nueva Jersey; Cruz, GH (2007). "Interferometría de polarización dual: una técnica óptica en tiempo real para medir la orientación (bio) molecular, estructura y función en la interfaz sólido / líquido". En Marcas, RS; Lowe, CR; Cullen, DC; Weetall, HH; Karube, I. (eds.). Manual de Biosensores y Biochips . Vol. 1. Wiley . Pt. 4, cap. 33, págs. 549-568. ISBN 978-0-470-01905-4.
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tiene texto extra ( ayuda ) - ^ Boudjemline, A; Clarke, DT; Freeman, Nueva Jersey; Nicholson, JM; Jones, GR (2008). "Primeras etapas de cristalización de proteínas según lo revelado por la tecnología emergente de guías de ondas ópticas". Revista de Cristalografía Aplicada . 41 (3): 523. doi : 10.1107 / S0021889808005098 .
- ^ Mashaghi, A; Swann, M; Popplewell, J; Textor, M; Reimhult, E (2008). "Anisotropía óptica de estructuras lipídicas soportadas probadas por espectroscopia de guía de ondas y su aplicación al estudio de la cinética de formación de bicapas lipídicas soportadas". Química analítica . 80 (10): 3666–76. doi : 10.1021 / ac800027s . PMID 18422336 .
- ^ Sanghera, N; Swann, MJ; Ronan, G; Pinheiro, TJ (2009). "Información sobre los primeros eventos en la agregación de la proteína priónica en las membranas lipídicas". Biochimica et Biophysica Acta . 1788 (10): 2245–51. doi : 10.1016 / j.bbamem.2009.08.005 . PMID 19703409 .
- ^ Lee, TH; Heng, C; Swann, MJ; Gehman, JD; Separovic, F; Aguilar, MI (2010). "Análisis cuantitativo en tiempo real del desorden de lípidos por aureína 1.2 durante la adsorción, desestabilización y lisis de la membrana" . Biochimica et Biophysica Acta . 1798 (10): 1977–86. doi : 10.1016 / j.bbamem.2010.06.023 . PMID 20599687 .
Otras lecturas
- Cross, GH; Ren, Y; Freeman, Nueva Jersey (1999). "Franjas de Young a partir de guías de ondas de losas integradas verticalmente: aplicaciones a la detección de humedad" (PDF) . Revista de Física Aplicada . 86 (11): 6483. Bibcode : 1999JAP .... 86.6483C . doi : 10.1063 / 1.371712 .
- Cruz, G (2003). "Un nuevo biosensor óptico cuantitativo para la caracterización de proteínas". Biosensores y Bioelectrónica . 19 (4): 383–90. doi : 10.1016 / S0956-5663 (03) 00203-3 . PMID 14615097 .
- Freeman, Nueva Jersey; Peel, LL; Swann, MJ; Cross, GH; Reeves, A; Marca, S; Lu, JR (2004). "Estudios en tiempo real y de alta resolución de la estructura y adsorción de proteínas en la interfaz sólido-líquido mediante interferometría de polarización dual". Revista de física: materia condensada . 16 (26): S2493 – S2496. Código Bibliográfico : 2004JPCM ... 16S2493F . doi : 10.1088 / 0953-8984 / 16/26/023 .
- Khan, TR; Grandin, HM; Mashaghi, A; Textor, M; Reimhult, E; Reviakine, I (2008). "Redistribución de lípidos en vesículas que contienen fosfatidilserina que adsorben titania". Biointerfases . 3 (2): FA90. doi : 10.1116 / 1.2912098 . PMID 20408675 . S2CID 28632810 .