El punto inmunoabsorbente ligado a enzimas ( ELISpot ) es un tipo de ensayo que se enfoca en medir cuantitativamente la frecuencia de secreción de citoquinas para una sola célula. El ensayo ELISpot también es una forma de inmunotinción , ya que se clasifica como una técnica que utiliza anticuerpos para detectar un analito de proteína; la palabra analito se refiere a cualquier sustancia biológica o química que se identifique o mida.
El ensayo FluoroSpot es una variación del ensayo ELISpot. El ensayo FluoroSpot utiliza fluorescencia para analizar múltiples analitos, lo que significa que puede detectar la secreción de más de un tipo de proteína.
Cecil Czerkinsky describió por primera vez ELISpot en 1983 como una nueva forma de cuantificar la producción de una inmunoglobulina específica de antígeno por parte de las células de hibridoma . En 1988, Czerkinsky desarrolló un ensayo de punto ELISA que cuantificó la secreción de una linfoquina por las células T. En el mismo año, ELISpot de dos colores se combinó por primera vez con imágenes de computadora, lo que permitió la enumeración y el análisis de manchas. 1988 también marcó el primer uso de placas con fondo de membrana para realizar estos ensayos. [1]
El ensayo FluoroSpot es muy similar al ensayo ELISpot. La principal diferencia es que el ensayo FluoroSpot puede analizar la presencia de varios analitos en una placa de pocillos, mientras que el ensayo ELISpot solo puede analizar un analito a la vez. El ensayo FluoroSpot logra esto mediante el uso de fluorescencia en lugar de una reacción enzimática para la detección. Los pasos para un ensayo FluoroSpot también son similares, con algunas diferencias. [8]
Dado que el ensayo FluoroSpot identifica y cuantifica la presencia de múltiples analitos, es posible que la absorción de un analito pueda afectar la secreción de otro analito; esto se llama efectos de captura. [8] El efecto que un analito tiene sobre otro analito puede ser positivo o negativo (la producción del segundo analito puede aumentar o disminuir). Para contrarrestar los efectos de captura, es posible utilizar la coestimulación para evitar la disminución de la producción de un analito. [8] Esto es cuando se agrega a los pocillos un segundo anticuerpo que estimula la producción del mismo analito.
Los ensayos ELISpot y FluoroSpot se pueden utilizar en muchos campos de investigación: desarrollo de vacunas, [10] cáncer, [11] alergias, [12] caracterización de monocitos/macrófagos/células dendríticas, análisis de apolipoproteínas e investigación veterinaria. Con ELISpot, puede estudiar respuestas de citocinas específicas de antígeno, células secretoras de anticuerpos específicos, [13] antígenos tumorales, [11] liberación de granzima B y perforina por células T, eficacia de vacunas, [14] mapeo de epítopos, [15] T citotóxicos -actividad celular, detección de IL-4, IL-5 e IL-13, [12] respuestas de anticuerpos inducidas por vacunas, células B de memoria específicas de antígeno, [10] y mucho más.