La electrotransferencia es un método en biología molecular / bioquímica / inmunogenética para transferir proteínas o ácidos nucleicos a una membrana mediante el uso de PVDF o nitrocelulosa , después de la electroforesis en gel . [2] [3] La proteína o el ácido nucleico se pueden analizar posteriormente utilizando sondas como anticuerpos específicos , ligandos como lectinas o tinciones. Este método se puede utilizar con todos los geles de poliacrilamida y agarosa. Una técnica alternativa para transferir proteínas de un gel es la transferencia capilar.
Desarrollo
Esta técnica fue patentada en 1989 por William J. Littlehales bajo el título "Técnica de electrotransferencia para transferir muestras de una electroforesis de poliacrilamida o gel similar a una membrana. [1] [4]
Procedimiento de electrotransferencia
Esta técnica se basa en la corriente y en una solución tampón de transferencia para impulsar proteínas o ácidos nucleicos hacia una membrana. Después de la electroforesis, se configura un tanque estándar o un sistema de transferencia de transferencia semiseco. Una pila se forma en el siguiente orden de cátodo a ánodo: esponja | tres hojas de papel de filtro empapadas en tampón de transferencia | gel | PVDF o membrana de nitrocelulosa | tres hojas de papel de filtro empapadas en tampón de transferencia | esponja. Es una necesidad que la membrana esté ubicada entre el gel y el ánodo cargado positivamente, ya que la corriente y la muestra se moverán en esa dirección. Una vez preparada la pila, se coloca en el sistema de transferencia y se aplica una corriente de magnitud adecuada por un período de tiempo adecuado según los materiales que se utilicen.
Normalmente, el gel de electroforesis se tiñe con Coomassie Brilliant Blue después de la transferencia para garantizar que se haya transferido una cantidad suficiente de material. Debido a que las proteínas pueden retener o recuperar parte de su estructura durante la transferencia, pueden reaccionar con anticuerpos específicos dando lugar al término inmunotransferencia . Alternativamente, las proteínas pueden reaccionar con ligandos como lectinas dando lugar al término transferencia por afinidad .
Ver también
Referencias
- ↑ a b R C Dubey (2014). Biotecnología avanzada . Publicaciones de S. Chand. págs. 199–. ISBN 978-81-219-4290-4.
- ^ David Sheehan (30 de abril de 2013). Bioquímica física: principios y aplicaciones . John Wiley e hijos. págs. 206–. ISBN 978-1-118-68748-2.
- ^ MP Bansal (1 de enero de 2013). Biología Molecular y Biotecnología: protocolos experimentales básicos . Instituto de Energía y Recursos (TERI). págs. 141–. ISBN 978-81-7993-379-4.
- ^ "Patente de Estados Unidos 4840714" . Archivado desde el original el 29 de septiembre de 2007 . Consultado el 24 de mayo de 2007 .
enlaces externos
- Transferencia de proteínas (Western): introducción a la transferencia de membranas de anticuerpos
- Procedimiento detallado de electrotransferencia a PVDF - Laboratorio de Química de Proteínas