Los ensayos de hidrólisis de diacetato de fluoresceína ( FDA ) se pueden usar para medir la actividad enzimática de los microbios en una muestra. Se produce un brillo amarillo verdoso brillante y es más fuerte cuando la actividad enzimática es mayor. Esto se puede cuantificar utilizando un espectrofluorómetro .
Aplicaciones
La hidrólisis de la FDA se utiliza a menudo para medir la actividad en muestras de suelo y compost; sin embargo, es posible que no proporcione una lectura precisa si los microbios con fases de actividad más baja, como las esterasas, escinden primero la fluoresceína .
También se usa en combinación con yoduro de propidio (PI) para determinar la viabilidad en células eucariotas. Las células vivas convertirán activamente la FDA no fluorescente en el compuesto fluorescente verde fluoresceína, un signo de viabilidad; mientras que el núcleo de las células comprometidas con la membrana emitirá una fluorescencia roja, un signo de muerte celular. Actualmente, la tinción FDA / PI es la evaluación estándar de la viabilidad de los islotes pancreáticos humanos con idoneidad para el trasplante cuando la puntuación de viabilidad es superior al 70%.
Preparación
La solución madre de la FDA se prepara disolviendo 5 mg de diacetato de fluoresceína en 1 ml de acetona , [1] y se puede agregar sacarosa para las pruebas de viabilidad de células vivas. La tinción FDA debe mantenerse en la oscuridad a 4 ° C o se echará a perder. [2]
Referencias
- ^ "PRUEBA DE VIABILIDAD CON DIACETATO DE FLUORESCEINA (FDA)" . www.cabri.org .
- ^ Fontvieille, DA; Outaguerouine, A .; Thevenot, DR (1992). "Hidrólisis de diacetato de fluoresceína como medida de actividad microbiana en sistemas acuáticos: Aplicación a lodos activados" (PDF) . Tecnología ambiental . 13 (6): 531–540. doi : 10.1080 / 09593339209385181 .
3. "Ensayo de hidrólisis de diacetato de fluoresceína" http://www.eeescience.utoledo.edu/Faculty/Sigler/Von_Sigler/LEPR_Protocols_files/FDA%20assay.pdf
- Departamento de Agricultura de los Estados Unidos (USDA): Ensayo de actividad hidrolítica de diacetato de fluoresceína para muestras de suelo
- Diacetato de fluoresceína: un indicador biológico potencial para suelos áridos