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Visualización multiplex de ARN en células mediante ensayos ViewRNA FISH
Una célula en metafase positiva para el reordenamiento bcr / abl (asociado con leucemia mielógena crónica ) usando FISH. Los cromosomas se pueden ver en azul. El cromosoma que está etiquetado con manchas verdes y rojas (arriba a la izquierda) es donde está presente el reordenamiento.

La hibridación fluorescente in situ ( FISH ) es una técnica citogenética molecular que utiliza sondas fluorescentes que se unen solo a aquellas partes de una secuencia de ácido nucleico con un alto grado de complementariedad de secuencia . Fue desarrollado por investigadores biomédicos a principios de la década de 1980 [1] para detectar y localizar la presencia o ausencia de secuencias de ADN específicas en los cromosomas . La microscopía de fluorescencia se puede utilizar para averiguar dónde se une la sonda fluorescente a los cromosomas. FISH se utiliza a menudo para encontrar características específicas en el ADN para su uso enasesoramiento genético , medicina e identificación de especies. [2] FISH también se puede utilizar para detectar y localizar objetivos de ARN específicos ( ARNm , ARNlnc y miARN ) [ cita requerida ] en células, células tumorales circulantes y muestras de tejido. En este contexto, puede ayudar a definir los patrones espacio-temporales de expresión génica dentro de células y tejidos.

Sondas - ARN y ADN [ editar ]

Detección ViewRNA de miR-133 (verde) y mRNA de miogenina (rojo) en células diferenciadoras C2C12

En biología, una sonda es una hebra única de ADN o ARN que es complementaria a una secuencia de nucleótidos de interés.

Las sondas de ARN pueden diseñarse para cualquier gen o cualquier secuencia dentro de un gen para la visualización de ARNm , [3] [4] [5] ARNc [6] [7] [8] y miARN en tejidos y células. FISH se utiliza examinando el ciclo de reproducción celular, específicamente la interfase de los núcleos en busca de anomalías cromosómicas. [9] FISH permite el análisis de una gran serie de casos de archivo mucho más fácil de identificar el cromosoma identificado mediante la creación de una sonda con una base cromosómica artificial que atraerá cromosomas similares. [9] Las señales de hibridación para cada sonda cuando se detecta una anomalía nucleica. [9]Cada sonda para la detección de mRNA e lncRNA se compone de ~ 20 a 50 pares de oligonucleótidos, cada par cubre un espacio de 40 a 50 pb. Los detalles dependen de la técnica FISH específica utilizada. Para la detección de miARN, las sondas utilizan una química patentada para la detección específica de miARN y cubren toda la secuencia de miARN.

Células uroteliales marcadas con cuatro sondas diferentes

Las sondas a menudo se derivan de fragmentos de ADN que se aislaron, purificaron y amplificaron para su uso en el Proyecto Genoma Humano . El tamaño del genoma humano es tan grande, en comparación con la longitud que podría secuenciarse directamente, que fue necesario dividir el genoma en fragmentos. (En el análisis final, estos fragmentos se ordenaron digiriendo una copia de cada fragmento en fragmentos aún más pequeños usando endonucleasas específicas de secuencia, midiendo el tamaño de cada fragmento pequeño usando cromatografía de exclusión de tamaño, y usando esa información para determinar dónde se superponen los fragmentos grandes). Para preservar los fragmentos con sus secuencias de ADN individuales, los fragmentos se agregaron a un sistema de poblaciones de bacterias que se replican continuamente. Las poblaciones clonales de bacterias, cada una de las cuales mantiene un solo cromosoma artificial, se almacenan en varios laboratorios de todo el mundo. Los cromosomas artificiales ( BAC ) se pueden cultivar, extraer y etiquetar en cualquier laboratorio que contenga una biblioteca. Las bibliotecas genómicas a menudo reciben el nombre de la institución en la que se desarrollaron. Un ejemplo es la biblioteca RPCI-11, que lleva el nombre del Roswell Park Cancer Institute en Buffalo NY. Estos fragmentos son del orden de 100 mil pares de bases y son la base de la mayoría de las sondas FISH.

Proceso de preparación e hibridación - ARN [ editar ]

Las células, las células tumorales circulantes (CTC) o las secciones de tejido congeladas e incluidas en parafina fijadas con formalina (FFPE) o congeladas se fijan y luego se permeabilizan para permitir la accesibilidad del objetivo. FISH también se ha realizado con éxito en células no fijadas. [10] Una sonda específica de la diana, compuesta por 20 pares de oligonucleótidos, se hibrida con los ARN diana. Los sistemas de amplificación de señales separados pero compatibles permiten el ensayo multiplex (hasta dos dianas por ensayo). La amplificación de la señal se logra mediante una serie de pasos de hibridación secuenciales. Al final del ensayo, las muestras de tejido se visualizan bajo un microscopio de fluorescencia.

Proceso de preparación e hibridación - ADN [ editar ]

Esquema del principio del Experimento FISH para localizar un gen en el núcleo.

Primero, se construye una sonda. La sonda debe ser lo suficientemente grande para hibridar específicamente con su objetivo, pero no tanto como para impedir el proceso de hibridación. La sonda se marca directamente con fluoróforos , con dianas para anticuerpos o con biotina . El marcado se puede realizar de varias formas, como traducción de muescas o reacción en cadena de la polimerasa utilizando nucleótidos marcados .

Luego, se produce una preparación de cromosomas en interfase o metafase . Los cromosomas están firmemente adheridos a un sustrato , generalmente vidrio. Las secuencias de ADN repetitivas deben bloquearse agregando fragmentos cortos de ADN a la muestra. Luego, la sonda se aplica al ADN del cromosoma y se incuba durante aproximadamente 12 horas mientras se hibrida. Varios pasos de lavado eliminan todas las sondas sin hibridar o parcialmente hibridadas. Luego, los resultados se visualizan y cuantifican utilizando un microscopio que es capaz de excitar el tinte y registrar imágenes.

Si la señal fluorescente es débil, puede ser necesaria la amplificación de la señal para superar el umbral de detección del microscopio . La intensidad de la señal fluorescente depende de muchos factores, como la eficacia del etiquetado de la sonda, el tipo de sonda y el tipo de tinte. Los anticuerpos marcados con fluorescencia o la estreptavidina se unen a la molécula de colorante. Estos componentes secundarios se seleccionan para que tengan una señal fuerte.

Variaciones sobre sondas y análisis [ editar ]

FISH es una técnica muy general. Las diferencias entre las distintas técnicas de FISH se deben normalmente a variaciones en la secuencia y el etiquetado de las sondas; y cómo se utilizan en combinación. Las sondas se dividen en dos categorías genéricas: celulares y acelulares. En la hibridación fluorescente "in situ" se refiere a la colocación celular de la sonda.

El tamaño de la sonda es importante porque las sondas más largas se hibridan de forma menos específica que las sondas más cortas, por lo que a menudo se utilizan cadenas cortas de ADN o ARN (a menudo de 10 a 25 nucleótidos) que son complementarias a una secuencia diana determinada para localizar una diana. La superposición define la resolución de características detectables. Por ejemplo, si el objetivo de un experimento es detectar el punto de ruptura de una translocación , entonces la superposición de las sondas (el grado en que una secuencia de ADN está contenida en las sondas adyacentes) define la ventana mínima en la que se puede detectar el punto de ruptura. .

La mezcla de secuencias de sondas determina el tipo de característica que la sonda puede detectar. Las sondas que se hibridan a lo largo de un cromosoma completo se utilizan para contar el número de un determinado cromosoma, mostrar translocaciones o identificar fragmentos extracromosómicos de cromatina . Esto a menudo se denomina "pintura de cromosomas completos". Si se utilizan todas las sondas posibles, cada cromosoma (el genoma completo) se marcaría con fluorescencia, lo que no sería particularmente útil para determinar características de secuencias individuales. Sin embargo, es posible crear una mezcla de sondas más pequeñas que sean específicas para una región particular (locus) de ADN; estas mezclas se utilizan para detectar mutaciones por deleción. Cuando se combina con un color específico, se usa una mezcla de sondas específicas de locus para detectar translocaciones muy específicas. A menudo se utilizan mezclas especiales de sondas específicas de locus para contar los cromosomas, uniéndose a las regiones centroméricas de los cromosomas, que son lo suficientemente distintivas como para identificar cada cromosoma (con la excepción del cromosoma 13 , 14 , 21 , 22 ).

Una variedad de otras técnicas utiliza mezclas de sondas de diferentes colores. Se puede detectar una gama de colores en mezclas de tintes fluorescentes, por lo que cada cromosoma humano se puede identificar por un color característico utilizando mezclas de sondas de cromosomas completos y una variedad de proporciones de colores. Aunque hay más cromosomas que colores de tintes fluorescentes fácilmente distinguibles, se pueden usar proporciones de mezclas de sondas para crear colores secundarios . De manera similar a la hibridación genómica comparativa , la mezcla de sondas para los colores secundarios se crea mezclando la proporción correcta de dos conjuntos de sondas de diferentes colores para el mismo cromosoma. Esta técnica a veces se llama M-FISH.

La misma física que hace posible una variedad de colores para M-FISH se puede utilizar para la detección de translocaciones. Es decir, los colores adyacentes parecen superponerse; se observa un color secundario. Algunos ensayos están diseñados para que el color secundario esté presente o ausente en los casos de interés. Un ejemplo es la detección de BCR / ABLtranslocaciones, donde el color secundario indica enfermedad. Esta variación a menudo se denomina FISH de doble fusión o D-FISH. En la situación opuesta, donde la ausencia del color secundario es patológica, se ilustra con un ensayo utilizado para investigar translocaciones en las que solo uno de los puntos de corte es conocido o constante. Las sondas específicas de locus se fabrican para un lado del punto de ruptura y el otro cromosoma intacto. En las células normales, se observa el color secundario, pero solo se observan los colores primarios cuando se produce la translocación. Esta técnica a veces se denomina "PESCADO de separación".

FISH de ARN de molécula única [ editar ]

FISH de ARN de molécula única, también conocido como Stellaris® RNA FISH, [11] es un método para detectar y cuantificar ARNm y otras moléculas de ARN largas en una capa delgada de muestra de tejido. Se pueden obtener imágenes de los objetivos de manera confiable mediante la aplicación de múltiples sondas oligonucleotídicas cortas marcadas individualmente . [12] La unión de hasta 48 oligos marcados con fluorescencia a una sola molécula de ARNm proporciona suficiente fluorescencia para detectar y localizar con precisión cada ARNm objetivo en una imagen de microscopía fluorescente de campo amplio . Las sondas que no se unen a la secuencia deseada no logran una fluorescencia localizada suficiente para distinguirse del fondo . [13]

Los ensayos FISH de ARN de molécula única se pueden realizar en simplex o multiplex , y se pueden usar como un experimento de seguimiento de la PCR cuantitativa , o se pueden obtener imágenes simultáneamente con un ensayo de anticuerpos fluorescentes . La tecnología tiene aplicaciones potenciales en el diagnóstico del cáncer , [14] neurociencia , análisis de expresión génica [15] y diagnósticos complementarios .

Fibra FISH [ editar ]

En una técnica alternativa a las preparaciones en interfase o metafase, la fibra FISH, los cromosomas en interfase se unen a un portaobjetos de tal manera que se estiran en línea recta, en lugar de estar enrollados con fuerza, como en el FISH convencional, o adoptando un territorio cromosómico. conformación, como en la interfase FISH. Esto se logra aplicando cizallamiento mecánico a lo largo del portaobjetos, ya sea a las células que se han fijado al portaobjetos y luego lisadas , o a una solución de ADN purificado. Una técnica conocida como peinado de cromosomas se utiliza cada vez más para este propósito. La conformación extendida de los cromosomas permite una resolución dramáticamente más alta, incluso hasta unas pocas kilobases.. La preparación de muestras de fibra FISH, aunque conceptualmente simple, es una técnica bastante hábil, y solo los laboratorios especializados usan la técnica de manera rutinaria. [dieciséis]

Q-FISH [ editar ]

Artículo principal: Q-FISH

Q-FISH combina FISH con PNA y software de computadora para cuantificar la intensidad de la fluorescencia. Esta técnica se utiliza de forma rutinaria en la investigación de la longitud de los telómeros .

Flow-FISH [ editar ]

Artículo principal: Flow-FISH

Flow-FISH usa citometría de flujo para realizar FISH automáticamente usando mediciones de fluorescencia por celda.

MA-FISH [ editar ]

FISH asistido por microfluidos ( MA-FISH ) utiliza un flujo de microfluidos para aumentar la eficiencia de la hibridación del ADN, disminuyendo el costoso consumo de la sonda FISH y reduciendo el tiempo de hibridación. MA-FISH se aplica para detectar el gen HER2 en tejidos de cáncer de mama. [17]

MAR-FISH [ editar ]

La microautorradiografía FISH es una técnica para combinar sustratos radiomarcados con FISH convencional para detectar grupos filogenéticos y actividades metabólicas simultáneamente. [18]

Híbrido Fusion-FISH [ editar ]

Hybrid Fusion FISH ( HF-FISH ) utiliza una combinación de excitación / emisión aditiva primaria de fluoróforos para generar espectros adicionales a través de un proceso de etiquetado conocido como transmisión óptica dinámica (DOT). Tres fluoróforos primarios pueden generar un total de 7 espectros de emisión fácilmente detectables como resultado del marcado combinatorio utilizando DOT. Hybrid Fusion FISH permite aplicaciones FISH altamente multiplexadas que están dirigidas dentro de los paneles de oncología clínica. La tecnología ofrece una puntuación más rápida con conjuntos de sondas eficientes que se pueden detectar fácilmente con microscopios fluorescentes tradicionales.

Aplicaciones médicas [ editar ]

A menudo, los padres de niños con una discapacidad del desarrollo quieren saber más sobre las condiciones de su hijo antes de elegir tener otro hijo. Estas preocupaciones pueden abordarse mediante el análisis del ADN de los padres y del niño. En los casos en que no se comprenda la discapacidad del desarrollo del niño, la causa de la misma se puede determinar potencialmente utilizando FISH y técnicas citogenéticas . Ejemplos de enfermedades que se diagnostican mediante FISH incluyen síndrome de Prader-Willi , síndrome de Angelman , síndrome de deleción 22q13 , leucemia mielógena crónica , leucemia linfoblástica aguda , Cri-du-chat , síndrome velocardiofacial ySíndrome de Down . FISH en espermatozoides está indicado para hombres con un cariotipo somático o meiótico anormal , así como para aquellos con oligozoospermia , ya que aproximadamente el 50% de los hombres oligozoospérmicos tienen una tasa aumentada de anomalías en los cromosomas espermáticos. [19] El análisis de los cromosomas 21, X e Y es suficiente para identificar a los individuos oligozoospérmicos en riesgo. [19]

En medicina, FISH se puede utilizar para formar un diagnóstico , evaluar el pronóstico o evaluar la remisión de una enfermedad, como el cáncer . Luego, el tratamiento se puede adaptar específicamente. Un examen tradicional que involucra el análisis de cromosomas en metafase a menudo no puede identificar características que distinguen una enfermedad de otra, debido a características cromosómicas sutiles; FISH puede dilucidar estas diferencias. FISH también se puede utilizar para detectar células enfermas con mayor facilidad que la citogenética estándar.métodos, que requieren la división de células y requieren trabajo y preparación manual y análisis de los portaobjetos por parte de un técnico. FISH, por otro lado, no requiere células vivas y se puede cuantificar automáticamente, una computadora cuenta los puntos fluorescentes presentes. Sin embargo, se requiere un técnico capacitado para distinguir diferencias sutiles en los patrones de bandas en los cromosomas en metafase doblados y retorcidos. FISH se puede incorporar en un dispositivo de microfluidos Lab-on-a-chip . Esta tecnología aún se encuentra en una etapa de desarrollo pero, al igual que otros métodos de laboratorio en un chip, puede conducir a técnicas de diagnóstico más portátiles. [20] [21]

Proceso general de hibridación fluorescente in situ (FISH) utilizado para la identificación de patógenos bacterianos. Primero, se toma una muestra de tejido infectado del paciente. Luego, un oligonucleótido complementario al código genético del patógeno sospechoso se sintetiza y se etiqueta químicamente con una sonda fluorescente. La muestra de tejido se trata químicamente para hacer que las membranas celulares sean permeables al oligonucleótido marcado con fluorescencia. Luego se agrega la etiqueta fluorescente y solo se une al ADN complementario del patógeno sospechoso. Si el patógeno está presente en la muestra de tejido, las células del patógeno emitirán fluorescencia después del tratamiento con el oligonucleótido marcado. Ninguna otra celda brillará.

Identificación de especies [ editar ]

El FISH se ha estudiado ampliamente como técnica de diagnóstico para la identificación de patógenos en el campo de la microbiología médica. [22] Aunque se ha demostrado que es una técnica útil y aplicable, todavía no se aplica ampliamente en los laboratorios de diagnóstico. El corto tiempo hasta el diagnóstico (menos de 2 horas) ha sido una ventaja importante en comparación con la diferenciación bioquímica, pero esta ventaja se ve desafiada por MALDI-TOF-MS, que permite la identificación de una gama más amplia de patógenos en comparación con las técnicas de diferenciación bioquímica. El uso de FISH con fines diagnósticos ha encontrado su propósito cuando se necesita la identificación inmediata de especies, específicamente para la investigación de hemocultivos para los cuales FISH es una técnica barata y fácil para el diagnóstico rápido preliminar. [22]

FISH también se puede utilizar para comparar los genomas de dos especies biológicas , para deducir relaciones evolutivas . Una técnica de hibridación similar se llama zoo blot . Las sondas FISH bacterianas son a menudo cebadores para la región de rRNA 16s .

FISH se utiliza ampliamente en el campo de la ecología microbiana , para identificar microorganismos . Las biopelículas , por ejemplo, están compuestas por organizaciones bacterianas complejas (a menudo) de múltiples especies. La preparación de sondas de ADN para una especie y la realización de FISH con esta sonda permite visualizar la distribución de esta especie específica dentro de la biopelícula. La preparación de sondas (en dos colores diferentes) para dos especies permite a los investigadores visualizar / estudiar la co-localización de estas dos especies en la biopelícula y puede ser útil para determinar la arquitectura fina de la biopelícula.

Hibridación genómica comparativa [ editar ]

La hibridación genómica comparativa se puede describir como un método que usa FISH de manera paralela con la comparación de la fuerza de hibridación para recordar cualquier interrupción importante en el proceso de duplicación de las secuencias de ADN en el genoma del núcleo. [23]

Cariotipo virtual [ editar ]

El cariotipo virtual es otra alternativa rentable y clínicamente disponible a los paneles FISH que utiliza de miles a millones de sondas en una sola matriz para detectar cambios en el número de copias, en todo el genoma, con una resolución sin precedentes. Actualmente, este tipo de análisis solo detectará ganancias y pérdidas de material cromosómico y no detectará reordenamientos equilibrados, como translocaciones e inversiones, que son aberraciones características que se observan en muchos tipos de leucemia y linfoma.

Cariotipo espectral [ editar ]

El cariotipo espectral es una imagen de cromosomas coloreados. El cariotipo espectral implica FISH utilizando múltiples formas de muchos tipos de sondas con el resultado de ver cada cromosoma marcado a través de su etapa de metafase. Este tipo de cariotipo se usa específicamente cuando se buscan arreglos cromosómicos.

Ver también [ editar ]

  • Estructura fina del cromosoma eucariota
  • Bandas G
  • Hibridación in situ , la técnica utilizada para el etiquetado.
  • Hibridación cromogénica in situ (CISH)
  • Citogenética molecular
  • Cariotipo virtual
  • Mapeo de genes
  • Feliz mapeo

Galería [ editar ]

  • Otro esquema del proceso FISH.

  • Chip de microfluidos que redujo el costo por prueba de FISH en un 90%.

  • Imagen FISH de doble etiqueta; Bifidobacteria Cy3, Bacterias totales FITC.

  • Paraspeckles visualizados por FISH de molécula única contra NEAT1 (Quasar 570) en células U-2 OS (DAPI).

Referencias [ editar ]

  1. ^ Langer-Safer, PR; Levine, M .; Ward, DC (1982). "Método inmunológico para el mapeo de genes en cromosomas polytene de Drosophila " . Actas de la Academia Nacional de Ciencias . 79 (14): 4381–5. Código Bibliográfico : 1982PNAS ... 79.4381L . doi : 10.1073 / pnas.79.14.4381 . PMC  346675 . PMID  6812046 .
  2. ^ Amann, Rudolf; Fuchs, Bernhard M. (2008). "Identificación unicelular en comunidades microbianas mediante técnicas mejoradas de hibridación in situ fluorescente". Nature Reviews Microbiología . 6 (5): 339–348. doi : 10.1038 / nrmicro1888 . PMID 18414500 . S2CID 22498325 .  
  3. ^ Anthony, SJ; St. Leger, JA; Pugliares, K .; Ip, HS; Chan, JM; Carpenter, ZW; Navarrete-Macias, I .; Sánchez-León, M .; Saliki, JT; Pedersen, J .; Karesh, W .; Daszak, P .; Rabadan, R .; Rowles, T .; Lipkin, WI (2012). "Aparición de la influenza aviar fatal en las focas del puerto de Nueva Inglaterra" . mBio . 3 (4): e00166 – e00112. doi : 10.1128 / mBio.00166-12 . PMC 3419516 . PMID 22851656 .  
  4. ^ Everitt, AR; Clare, S .; Pertel, T .; John, SP; Lavado, RS; Smith, SE; Chin, CR; Feeley, EM; Sims, JS; Adams, DJ; Sabio, HM; Kane, L .; Goulding, D .; Digard, P .; Anttila, V .; Baillie, JK; Walsh, TS; Hume, DA; Palotie, A .; Xue, Y .; Colonna, V .; Tyler-Smith, C .; Dunning, J .; Gordon, SB; Everingham, K .; Dawson, H .; Hope, D .; Ramsay, P .; Walsh (investigador principal local), TS; et al. (2012). "IFITM3 restringe la morbilidad y mortalidad asociadas a la influenza" . Naturaleza . 484 (7395): 519–23. Bibcode : 2012Natur.484..519. . doi : 10.1038 / nature10921 . PMC 3648786 . PMID  22446628 .
  5. ↑ Louzada, S .; Adega, F .; Chaves, R. (2012). "Definición de las líneas celulares de tumor mamario de rata hermana HH-16 cl.2 / 1 y HH-16.cl.4 como modelo celular in vitro para Erbb 2" . PLOS ONE . 7 (1): e29923. Código bibliográfico : 2012PLoSO ... 729923L . doi : 10.1371 / journal.pone.0029923 . PMC 3254647 . PMID 22253826 .  
  6. ^ Ting, DT; Lipson, D .; Paul, S .; Brannigan, BW; Akhavanfard, S .; Coffman, EJ; Contino, G .; Deshpande, V .; Iafrate, AJ; Letovsky, S .; Rivera, MN; Bardeesy, N .; Maheswaran, S .; Haber, DA (2011). "Sobreexpresión aberrante de las repeticiones de satélite en el páncreas y otros cánceres epiteliales" . Ciencia . 331 (6017): 593–6. Código bibliográfico : 2011Sci ... 331..593T . doi : 10.1126 / science.1200801 . PMC 3701432 . PMID 21233348 .  
  7. ^ Zhang, B .; Arun, G .; Mao, YS; Lazar, Z .; Hung, G .; Bhattacharjee, G .; Xiao, X .; Booth, CJ; Wu, J .; Zhang, C .; Spector, DL (2012). "El lncRNA Malat1 es prescindible para el desarrollo del ratón, pero su transcripción juega un papel regulador cis en el adulto" . Informes de celda . 2 (1): 111–23. doi : 10.1016 / j.celrep.2012.06.003 . PMC 3408587 . PMID 22840402 .  
  8. ^ Lee, K .; Kunkeaw, N .; Jeon, SH; Lee, I .; Johnson, BH; Kang, G. -Y .; Bang, JY; Park, HS; Leelayuwat, C .; Lee, YS (2011). "El precursor miR-886, un nuevo ARN no codificante reprimido en el cáncer, se asocia con PKR y modula su actividad" . ARN . 17 (6): 1076–89. doi : 10.1261 / rna.2701111 . PMC 3096040 . PMID 21518807 .  
  9. ↑ a b c Bernasconi, B .; Karamitopolou-Diamantiis, E .; Tornillo, L .; Lugli, A .; Di Vizio, D .; Dirnhofer, S .; Wengmann, S .; Glatz-Krieger, K .; Fend, F .; Capella, C .; Insabato, L .; Terracciano, LM (2008). "Inestabilidad cromosómica en linfomas de tejido linfoide asociados a mucosa gástrica: un estudio de hibridación in situ fluorescente utilizando un enfoque de micromatriz de tejido". Patología humana . 39 (4): 536–42. doi : 10.1016 / j.humpath.2007.08.009 . PMID 18234275 . 
  10. ^ Haroon, Mohamed F .; Skennerton, Connor T .; Steen, Jason A .; Lachner, Nancy; Hugenholtz, Philip y Tyson, Gene W. (2013). "Capítulo uno: hibridación in situ fluorescente en solución y clasificación de células activadas por fluorescencia para la recuperación del genoma de una sola célula y una población". En F. DeLong Edward (ed.). Métodos en enzimología . 531 . Prensa académica. págs. 3–19.
  11. ^ Orjalo, ArturoV. Jr .; Johansson, HansE. (1 de enero de 2016). Feng, Yi; Zhang, Lin (eds.). Stellaris® RNA Fluorescente In Situ Hibridación para la detección simultánea de RNA inmaduros y maduros largos no codificantes en células adherentes . Métodos en Biología Molecular. 1402 . Springer Nueva York. págs. 119-134. doi : 10.1007 / 978-1-4939-3378-5_10 . ISBN 9781493933761. PMID  26721487 .
  12. ^ Raj, A .; Van Den Bogaard, P .; Rifkin, SA; Van Oudenaarden, A .; Tyagi, S. (2008). "Imágenes de moléculas de ARNm individuales utilizando múltiples sondas marcadas individualmente" . Métodos de la naturaleza . 5 (10): 877–9. doi : 10.1038 / nmeth.1253 . PMC 3126653 . PMID 18806792 .  
  13. ^ Biosearch Technologies firma una licencia exclusiva para tecnologías FISH de molécula única de UMDNJ . biosearchtech.com
  14. ^ Cagir, B .; Gelmann, A .; Park, J .; Fava, T .; Tankelevitch, A .; Bittner, EW; Weaver, EJ; Palazzo, JP; Weinberg, D .; Fry, RD; Waldman, SA (1999). "Una nueva prueba para el cáncer de colon recurrente". Annals of Internal Medicine . 131 (11): 805-12. doi : 10.7326 / 0003-4819-131-11-199912070-00024 . PMID 10610624 . 
  15. ^ Kosman, D .; Mizutani, CM; Limones, D; Cox, WG; McGinnis, W; Bier, E (2004). "Detección multiplex de expresión de ARN en embriones de Drosophila". Ciencia . 305 (5685): 846. doi : 10.1126 / science.1099247 . PMID 15297669 . S2CID 26313219 .  
  16. ^ Heiskanen, Mervi; Kallioniemi, Olli; Palotie, Aarno (1996). "Fiber-FISH: Experiencias y un protocolo depurado" . Análisis genético: Ingeniería Biomolecular . 12 (5-6): 179-184. doi : 10.1016 / S1050-3862 (96) 80004-0 . PMID 8740834 . 
  17. ^ Nguyen HT, Trouillon R, Matsuoka S, Fiche M, de Leval L, Bisig B, et al. (Enero de 2017). "Hibridación in situ de fluorescencia asistida por microfluidos para la evaluación ventajosa del receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano en el cáncer de mama" . Lab Invest . 97 (1): 93–103. doi : 10.1038 / labinvest.2016.121 . PMID 27892928 . 
  18. ^ Okabe, Satoshi; Kindaichi, Tomonori; Ito, Tsukasa (2004). "MAR-FISH: un enfoque ecofisiológico para vincular la afiliación filogenética y la actividad metabólica in situ de los microorganismos en una resolución unicelular" . Microbios y entornos . 19 (2): 83–98. doi : 10.1264 / jsme2.19.83 . ISSN 1342-6311 . 
  19. ↑ a b Sarrate, Z .; Vidal, F .; Blanco, J. (2010). "Papel de los estudios de hibridación in situ fluorescente de espermatozoides en pacientes infértiles: indicaciones, enfoque del estudio y relevancia clínica". Fertilidad y esterilidad . 93 (6): 1892–902. doi : 10.1016 / j.fertnstert.2008.12.139 . PMID 19254793 . 
  20. ^ Kurz, CM; vd Moosdijk, S .; Thielecke, H .; Velten, T. (2011). "Hacia una plataforma celular de análisis de múltiples parámetros: Hibridación in situ fluorescente (FISH) en chips de matriz de microagujeros". 2011 Conferencia Internacional Anual de la Sociedad de Ingeniería en Medicina y Biología del IEEE . Actas de la conferencia: ... Conferencia internacional anual de la Sociedad de Ingeniería en Medicina y Biología del IEEE. Sociedad de Ingeniería en Medicina y Biología del IEEE. Conferencia anual . 2011 . págs. 8408-11. doi : 10.1109 / IEMBS.2011.6092074 . ISBN 978-1-4577-1589-1. PMID  22256298 . S2CID  4955677 .
  21. ^ Eneldo, K .; Hui Liu, R .; Grodzinski, P. (2008). Microarrays: preparación, microfluidos, métodos de detección y aplicaciones biológicas . Saltador. pag. 323. ISBN 978-0387727165.
  22. ↑ a b Frickmann, Hagen; Zautner, Andreas Erich; Moter, Annette; Kikhney, Judith; Hagen, Ralf Matthias; Stender, Henrik; Poppert, Sven (4 de mayo de 2017). "Hibridación fluorescente in situ (FISH) en el laboratorio de rutina de diagnóstico microbiológico: una revisión" . Revisiones críticas en microbiología . 43 (3): 263-293. doi : 10.3109 / 1040841X.2016.1169990 . ISSN 1040-841X . PMID 28129707 . S2CID 25252460 .   
  23. ^ "Hibridación genómica comparativa" . Diccionario McGraw-Hill de términos científicos y técnicos . Consultado el 19 de septiembre de 2013 .

Lectura adicional [ editar ]

  • Pernthaler A, Pernthaler J, Amann R (2002). "Hibridación de fluorescencia in situ y deposición de reportero catalizado para la identificación de bacterias marinas" . Microbiología aplicada y ambiental . 68 (6): 3094–3101. doi : 10.1128 / AEM.68.6.3094-3101.2002 . PMC  123953 . PMID  12039771 .
  • Wagner M, Horn M, Daims H (2003). "Hibridación fluorescente in situ para la identificación y caracterización de procariotas". Opinión actual en microbiología . 2003 (6): 302–309. doi : 10.1016 / S1369-5274 (03) 00054-7 . PMID  12831908 .
  • Carthy, JD (1965). Puntos de vista en biología . Inglaterra: Butterworth & Co. p. 66.

Enlaces externos [ editar ]

  • Fluorescent + in + Situ + Hybridization en los encabezados de temas médicos (MeSH) de la Biblioteca Nacional de Medicina de EE. UU .
  • Información sobre fibra FISH de Olympus Corporation
  • Una guía de pescado de fibra de Octavian Henegariu
  • Protocolo Fiber FISH del Proyecto Genoma Humano en el Centro Sanger
  • CARD-FISH, BioMineWiki
  • Preparación de conjuntos de sondas de ADN complejas para FISH 3D con hasta seis fluorocromos diferentes
  • Notas técnicas y protocolos de FISH de GeneDetect.com
  • Fluorescencia in situ Hibridación Fotos de bacterias
  • Diseño racional de mezclas de sondas de polinucleótidos para identificar genes particulares en taxones definidos: www.dnaBaser.com/PolyPro