Una microplaca o placa de microtitulación (deletreado Microtiter es un nombre comercial registrado en los Estados Unidos), placa de micropocillos , multipocillo , [1] es una placa plana con múltiples "pocillos" que se utilizan como pequeños tubos de ensayo. La microplaca se ha convertido en una herramienta estándar en la investigación analítica y los laboratorios de pruebas de diagnóstico clínico. Un uso muy común es en el ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA), la base de la mayoría de las pruebas de diagnóstico médico modernas en humanos y animales.
Una microplaca tiene típicamente 6, 12, 24, 48, 96, 384 o 1536 pocillos de muestra dispuestos en una matriz rectangular de 2: 3 . Algunas microplacas se han fabricado con 3456 o 9600 pozos, y se ha desarrollado un producto de "cinta de matriz" que proporciona una tira continua de microplacas estampadas en una cinta de plástico flexible. [2]
Cada pocillo de una microplaca suele contener entre decenas de nanolitros [3] [4] [5] [6]a varios mililitros de líquido. También se pueden utilizar para almacenar polvo seco o como rejillas para soportar inserciones de tubos de vidrio. Los pozos pueden ser circulares o cuadrados. Para aplicaciones de almacenamiento de compuestos, se prefieren los pozos cuadrados con tapetes de silicona ajustados. Las microplacas se pueden almacenar a bajas temperaturas durante períodos prolongados, se pueden calentar para aumentar la velocidad de evaporación del disolvente de sus pocillos e incluso se pueden sellar con calor con papel de aluminio o película transparente. Varias empresas desarrollaron microplacas con una capa incrustada de material de filtro a principios de la década de 1980 y, en la actualidad, existen microplacas para casi todas las aplicaciones en la investigación de las ciencias de la vida que implican filtración, separación, detección óptica, almacenamiento, mezcla de reacción, cultivo celular y detección de actividad antimicrobiana. [7]
El enorme crecimiento en los estudios de células vivas completas ha llevado a una gama completamente nueva de productos de microplacas que son " tratados con cultivo de tejidos " especialmente para este trabajo. Las superficies de estos productos se modifican utilizando una descarga de plasma de oxígeno para hacer que sus superficies sean más hidrófilas, de modo que sea más fácil para las células adherentes crecer en la superficie que de otro modo sería fuertemente hidrófoba .
Varias empresas han desarrollado robots para manipular específicamente microplacas. Estos robots pueden ser manipuladores de líquidos que aspiran o dispensan muestras líquidas desde y hacia estas placas, o "transportadores de placas" que las transportan entre instrumentos, apiladores de placas que almacenan microplacas durante estos procesos, hoteles de placas para almacenamiento a largo plazo, lavadoras de placas para el procesamiento de placas. , selladores térmicos de placas para aplicar sellos térmicos, des selladores para quitar sellos térmicos o incubadoras de microplacas para garantizar una temperatura constante durante las pruebas. Las empresas de instrumentos han diseñado lectores de placas que pueden detectar eventos biológicos, químicos o físicos específicos en las muestras almacenadas en estas placas. Un lector de placas especializadoTambién se ha desarrollado que puede realizar el control de calidad del contenido de los pocillos de la microplaca, capaz de identificar pozos vacíos, pozos llenos y precipitados. [8]
Fabricación y composición [ editar ]
Los microtitulación se fabrican en una variedad de materiales. El más común es el poliestireno , utilizado para la mayoría de las microplacas de detección óptica. Puede colorearse de blanco mediante la adición de dióxido de titanio para la detección óptica de absorbancia o luminiscencia o de negro mediante la adición de carbono para ensayos biológicos fluorescentes . El polipropileno se utiliza para la construcción de placas sujetas a grandes cambios de temperatura, como el almacenamiento a -80 ° C y los ciclos térmicos. Tiene excelentes propiedades para el almacenamiento a largo plazo de nuevos compuestos químicos . Policarbonatoes barato y fácil de moldear y se ha utilizado para microplacas desechables para el método de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de amplificación de ADN . Las cicloolefinas se utilizan ahora para proporcionar microplacas que transmiten luz ultravioleta para su uso en ensayos desarrollados recientemente. También hay microplacas construidas con piezas sólidas de vidrio y cuarzo para aplicaciones especiales.
El proceso de fabricación más común es el moldeo por inyección , utilizando materiales como poliestireno, polipropileno y cicloolefina para diferentes necesidades de temperatura y resistencia química. El vidrio también es un material común, y la formación al vacío se puede usar con muchos otros plásticos como el policarbonato. Las microplacas compuestas, las placas de fondo de filtro, las placas de extracción en fase sólida (SPE) e incluso algunos diseños avanzados de placas de PCR utilizan varios componentes que se moldean por separado y luego se ensamblan en un producto terminado. Las placas ELISA ahora se pueden ensamblar a partir de doce tiras separadas de ocho pocillos, lo que facilita el uso parcial de una placa.
Hay multitud de formatos, con la misma huella pero diferente cantidad de pozos y alturas.
| pozos | volumen [ml] | |
|---|---|---|
| número | arreglo | |
| 6 | 2 × 3 | 2-5 |
| 12 | 3 × 4 | 2-4 |
| 24 | 4 × 6 | 0,5–3 |
| 48 | 6 × 8 | 0,5-1,5 |
| 96 | 8 × 12 | 0,1-0,3 |
| 384 | 16 × 24 | 0.03-0.1 |
| 1536 | 32 × 48 | 0,005-0,015; Uso en UHTS (Ultra HTS) |
| 3456 | 48 × 72 | 0,001–0,005; Uso en UHTS (Ultra HTS). |
Los pozos están disponibles en diferentes formas:
- F-Bottom: fondo plano
- C-Bottom: fondo con bordes redondeados mínimos
- Parte inferior en V: parte inferior en forma de V
- Fondo en U: Fondo en forma de U
También hay microplacas de pozos profundos a veces llamadas "bloques", así como placas de 192 y 768 pocillos. [9]
La estandarización de las placas de micropocillos la realiza la Society for Biomolecular Sciences con los estándares ANSI (ANSI / SBS 1-2004, ANSI / SBS 2-2004, ANSI / SBS 3-2004, ANSI / SBS 4-2004) [10 ]
24 pocillos
48 pocillos
96 pocillos
384 pocillos
Historia [ editar ]
La primera microplaca fue creada en 1951 por un húngaro, el Dr. Gyula Takátsy , quien mecanizó seis filas de 12 "pozos" en Lucite . [9] [11] [12] Sin embargo, el uso común de la microplaca comenzó a fines de la década de 1980 cuando John Liner introdujo una versión moldeada. En 1990 había más de 15 empresas que producían una amplia gama de microplacas con diferentes características. Se estimó que solo en 2000 se utilizaron 125 millones de microplacas. [13] La palabra "Microtiter" es una marca comercial registrada de Cooke Engineering Company, y Thermo Electron OY es el último propietario de la marca registrada (marca comercial de EE . UU . 72,128,338 ). Ahora es más habitual utilizar el término genérico "microplaca".
Otros nombres comerciales de microplacas incluyen Viewplate y Unifilter (introducidos a principios de la década de 1990 por Polyfiltronics y vendidos por Packard Instrument, que ahora forma parte de Perkin Elmer).
En 1996, la Society for Biomolecular Screening (SBS), más tarde conocida como Society for Biomolecular Sciences, inició una iniciativa para crear una definición estándar de placa de microtitulación. En 2003 se propuso una serie de normas y el Instituto Nacional Estadounidense de Normas (ANSI) las publicó en nombre de la SBS. Los estándares rigen varias características de una microplaca, incluidas las dimensiones del pozo (por ejemplo , diámetro , espaciado y profundidad), así como las propiedades de la placa (por ejemplo, dimensiones y rigidez) (dimensión típica ~ 5 ″ × 3,33 ″), lo que permite la interoperabilidad entre microplacas, instrumentación y equipo. de diferentes proveedores, y es particularmente importante en la automatización de laboratorios . En 2010, elSociety for Biomolecular Sciences se fusionó con la Association for Laboratory Automation (ALA) para formar una nueva organización, la Society for Laboratory Automation and Screening (SLAS). De ahora en adelante, los estándares de microplacas se conocen como estándares ANSI / SLAS.
Ver también [ editar ]
- Plato de picotiter
Referencias [ editar ]
- ^ "Copia archivada" . Archivado desde el original el 6 de febrero de 2011 . Consultado el 6 de febrero de 2011 .CS1 maint: archived copy as title (link)
- ↑ Elaine May (15 de junio de 2007). <fecha> /url=http://www.genengnews.com/articles/chtitem.aspx?tid=2136 "Cinta de matriz para genotipado miniaturizado" . Noticias de Ingeniería Genética y Biotecnología . Mary Ann Liebert, Inc. pág. 22. Archivado desde el original en 2007 . Consultado el 6 de julio de 2008 .
(subtítulo) Procesamiento de cientos de equivalentes de microplacas sin equipos complejos de manipulación de placas
- ^ Lindström, Sara; Eriksson, Malin; Vazin, Tandis; Sandberg, Julia; Lundeberg, Joakim; Frisén, Jonas; Andersson-Svahn, Helene (1 de enero de 2009). "Chip de micropocillos de alta densidad para cultivo y análisis de células madre" . PLOS ONE . 4 (9): e6997. doi : 10.1371 / journal.pone.0006997 . ISSN 1932-6203 . PMC 2736590 . PMID 19750008 .
- ^ Weibull, Emilie; Antypas, Haris; Kjäll, Peter; Brauner, Annelie; Andersson-Svahn, Helene; Richter-Dahlfors, Agneta (1 de septiembre de 2014). "Cultivos bacterianos a nanoescala para pruebas de susceptibilidad a antibióticos multiplexados fenotípicos" . Revista de microbiología clínica . 52 (9): 3310–3317. doi : 10.1128 / JCM.01161-14 . ISSN 1098-660X . PMC 4313156 . PMID 24989602 .
- ^ Lindström, Sara; Larsson, Rolf; Svahn, Helene Andersson (1 de marzo de 2008). "Hacia el cultivo y análisis de clones / células individuales de alto rendimiento". Electroforesis . 29 (6): 1219-1227. doi : 10.1002 / elps.200700536 . ISSN 0173-0835 . PMID 18288779 . S2CID 25258352 .
- ^ Antypas, H .; Veses-García, M .; Weibull, E .; Andersson-Svahn, H .; Richter-Dahlfors, A. (2018). "Una plataforma universal para la selección y el cribado fenotípico de alta resolución de mutantes bacterianos utilizando el portaobjetos de nanopozos" . Lab on a Chip . 18 (12): 1767-1777. doi : 10.1039 / c8lc00190a . ISSN 1473-0197 . PMC 5996734 . PMID 29781496 .
- ^ Inglin, Raffael C. (2015). "Ensayos de detección de alto rendimiento para actividades antibacterianas y antifúngicas de especies de Lactobacillus". Revista de métodos microbiológicos . 114 (julio de 2015): 26–29. doi : 10.1016 / j.mimet.2015.04.011 . PMID 25937247 .
- ^ Baillargeon P, Scampavia L, Einsteder R, Hodder P (2011). "Monitorización de la calidad de la biblioteca de compuestos HTS a través de un instrumento de procesamiento y adquisición de imágenes de alta resolución" . J Lab Autom . 16 (3): 197-203. doi : 10.1016 / j.jala.2011.02.004 . PMC 3417353 . PMID 21609702 . CS1 maint: multiple names: authors list (link)
- ^ a b Microarrays y microplacas: aplicaciones en ciencias biomédicas . Ye, S. (Shu), 1961-, Day, Ian NM Oxford, Reino Unido: BIOS. 2003. ISBN 978-1-85996-074-5. OCLC 51032550 .CS1 maint: others (link)
- ^ Sociedad de Ciencias Biomoleculares (Hrsg.): Grupo de trabajo de estándares de microplacas - Estándares publicados . abgerufen am: 12. de febrero de 2009.
- ^ Farkas E. (27 de julio de 1992). "Microtitulaciones en serología y virología - un comentario clásico de citas sobre el uso de bucles en espiral en micro-métodos serológicos y virológicos por Takatsy, G." (PDF) . Contenidos actuales / Ciencias de la vida (30): 10.
- ^ Takatsy G (1950). "Uj modszer sorozatos higitasok gyors es pontos elvegzesere" [Un método rápido y preciso para diluciones en serie]. Kiserl. Orvostud . 5 : 393–7.
- ^ Manns, Roy (1999). Historia de la microplaca (2 ed.).
Enlaces externos [ editar ]
- [1] Un artículo sobre la invención de la microplaca, publicado en GIT Laboratory Journal (consultado el 10/06/10)
- [2] Dr. Gyula Takátsy, en el sitio web del Centro Nacional de Epidemiología de Hungría (consultado el 10/06/10)
- [3] Sitio web oficial que publica normas de microplacas.
