La ADN polimerasa Pfu es una enzima que se encuentra en el arqueo hipertermofílico Pyrococcus furiosus , donde funciona para copiar el ADN del organismodurante la división celular. En el entorno de laboratorio, Pfu se utiliza para amplificar el ADN en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), donde la enzima cumple la función central de copiar una nueva hebra de ADN durante cada paso de extensión.
Es una familia B ADN polimerasa . Tiene un dominio de exonucleasa 3'-5 'similar a la RNasa H , típico de la polimerasa de la familia B, como la ADN polimerasa II . [1]
La ADN polimerasa Pfu tiene propiedades de termoestabilidad y corrección de pruebas superiores en comparación con la ADN polimerasa Taq . A diferencia de Taq DNA polimerasa, Pfu DNA polimerasa posee 3' a 5' exonucleasa corrección de pruebas de actividad, lo que significa que a medida que el ADN se ensambla a partir de la 5' extremo a extremo 3' , la actividad exonucleasa elimina inmediatamente nucleótidos mal incorporados en el extremo 3' de la creciente Cadena de ADN. En consecuencia, los fragmentos de PCR generados por la polimerasa de ADN de Pfu tendrán menos errores que los insertos de PCR generados por Taq .
La Pfu comercialmente disponible normalmente da como resultado una tasa de error de 1 en 1,3 millones de pares de bases y puede producir un 2,6% de productos mutados cuando se amplifican fragmentos de 1 kb mediante PCR. Sin embargo, la Pfu es más lenta y por lo general requiere de 1 a 2 minutos por ciclo para amplificar 1 kb de ADN a 72 ° C. El uso de la ADN polimerasa de Pfu en reacciones de PCR también da como resultado productos de PCR de extremos romos. [2]
Por lo tanto, la ADN polimerasa de Pfu es superior a la ADN polimerasa Taq para técnicas que requieren síntesis de ADN de alta fidelidad, pero también se puede usar junto con la polimerasa Taq para obtener la fidelidad de Pfu con la velocidad de la actividad de la polimerasa Taq . [3]
Los científicos dirigidos por Eric Mathur en la empresa de biotecnología Stratagene, con sede en La Jolla, California , descubrieron la ADN polimerasa Pfu que exhibe una fidelidad de replicación significativamente mayor que la ADN polimerasa Taq en 1991. [4] Recibieron patentes para Pfu deficiente en exonucleasas y el Pfu en 1996. [5]