Los análogos de aminoácidos fotorreactivos son análogos artificiales de aminoácidos naturales que se pueden usar para la reticulación de complejos de proteínas. [1] Los análogos de aminoácidos fotorreactivos se pueden incorporar en proteínas y péptidos in vivo o in vitro . Los análogos de aminoácidos fotorreactivos de uso común son los análogos de diazirina fotorreactivos de leucina y metionina , y para -benzoilfenilalanina. Tras la exposición a la luz ultravioleta , se activan y se unen covalentemente a las proteínas que interactúan que se encuentran a unos pocos angstroms del análogo de aminoácido fotorreactivo.
La L -foto-leucina y la L -foto-metionina son análogos de los aminoácidos naturales L - leucina y L - metionina que se incorporan endógenamente en la secuencia primaria de proteínas durante la síntesis utilizando la maquinaria de traducción normal. Luego se activan con luz ultravioleta (UV) para entrecruzar covalentemente las proteínas dentro de los dominios de interacción proteína-proteína en su entorno nativo in vivo . El método permite la determinación y caracterización de interacciones de proteínas tanto estables como transitorias en las células sin la adición de reticuladores químicos y disolventes asociados que pueden afectar negativamente a labiología celular que se estudia en el experimento.
Cuando se usa en combinación con medios limitantes que carecen de leucina y metionina, los derivados fotoactivables son tratados como aminoácidos naturales por la maquinaria de síntesis de proteínas celulares. Como resultado, pueden sustituir a la leucina o la metionina en la estructura primaria de las proteínas. Los derivados de la fotoleucina y la fotometionina contienen anillos de diazirina que se activan cuando se exponen a la luz ultravioleta para convertirse en productos intermedios reactivos que forman enlaces covalentes con las cadenas laterales y los esqueletos de las proteínas cercanas. Las proteínas que interactúan naturalmente dentro de la célula pueden ser atrapadas instantáneamente por fotoactivaciónde las proteínas que contienen diazirina en las células cultivadas. Los complejos de proteínas entrecruzadas se pueden detectar mediante una movilidad reducida en SDS-PAGE seguida de transferencia Western , cromatografía de exclusión por tamaño , sedimentación en gradiente de densidad de sacarosa o espectrometría de masas .