Electroforesis discontinua

Tipo de técnica de laboratorio

Bandas de ADN después de la electroforesis

La electroforesis discontinua (coloquialmente electroforesis en disco ^[a] ) es un tipo de electroforesis en gel de poliacrilamida . Fue desarrollado por Ornstein y Davis. ^{[2] [1]} Este método produce una alta resolución y una buena definición de banda. Es una técnica ampliamente utilizada para separar proteínas según tamaño y carga. ^[3]

Método

En este método, el gel se divide en dos partes discontinuas , gel de resolución y apilamiento, ambos tienen diferentes concentraciones de poliacrilamida. ^[4] El que tiene una concentración más baja se apila sobre el que tiene una concentración más alta. La discontinuidad se basa en cuatro parámetros: estructura del gel, valor de pH del tampón, fuerza iónica del tampón y la naturaleza de los iones en el gel y el tampón del electrodo. El tampón del electrodo contiene glicina . La glicina tiene una carga neta muy baja a pH 6,8 del gel de apilamiento, por lo que tiene poca movilidad . Las proteínas se separan según el principio de isotacoforesis.y forman pilas en el orden de movilidad (efecto de apilamiento). La movilidad depende de la carga neta, no del tamaño de la molécula. Las proteínas se mueven hacia el ánodo lentamente a velocidad constante hasta que alcanzan el límite del gel de separación. De repente, la resistencia a la fricción aumenta, pero la glicina no se ve afectada y pasa las proteínas y se vuelve altamente cargada en la zona de resolución. Las proteínas presentes en el tampón homogéneo comienzan a separarse según los principios de la electroforesis de zona. Ahora su movilidad depende tanto del tamaño como de la carga. El valor de pH se eleva a 9,5 y la carga neta aumenta. ^{[5] [6]}

Ver también

• Electroforesis de afinidad
• SDS-PAGE
• Isotacoforesis

Referencias

1. Ornstein, Leonard (16 de diciembre de 2006). "ELECTROFORESIS DE DISCO-I ANTECEDENTES Y TEORÍA *". Anales de la Academia de Ciencias de Nueva York . Wiley. 121 (2): 321–349. doi : 10.1111 / j.1749-6632.1964.tb14207.x . ISSN  0077-8923 .
2. Williams, Donald E. y Reisfeld, Ralph A. (1964). "Electroforesis en DISCO EN GELES DE POLIACRILAMIDA". Anales de la Academia de Ciencias de Nueva York . 121 (2): 372–381. Código Bibliográfico : 1964NYASA.121..373W . doi : 10.1111 / j.1749-6632.1964.tb14210.x . PMID 14240536 . 
3. Electroforesis en gel de poliacrilamida (PDF) . davidson.edu .
4. "Principio de electroforesis de disco" . Archivado desde el original el 29 de junio de 2016 . Consultado el 4 de julio de 2016 .
5. Electroforesis en disco y técnicas relacionadas de electroforesis en gel de poliacrilamida Autor HR Maurer Edición 2, editor ilustrado Walter de Gruyter, 1978 ISBN 3110836203 , 9783110836202 
6. "TÉCNICAS EXPERIMENTALES - Electroforesis" . Consultado el 4 de julio de 2016 .

1. Ornstein derivó el nombre de electroforesis en disco de: "la dependencia de la nueva técnica de lasontinuidades del disco en la matriz electroforética y, casualmente, de laforma del disco oide de las zonas separadas de iones en la forma estándar de nuestra técnica". ^[1]

enlaces externos

• Análisis de proteínas marcadas con C14 mediante electroforesis en disco