homogeneizador de rebote
Inventado y llamado así por Alexander Dounce [1] [2] , un homogeneizador Dounce o "Douncer", es un tubo de vidrio cilíndrico, cerrado en un extremo, con dos manos de vidrio de diámetros exteriores cuidadosamente especificados, destinado a la homogeneización suave de eucariotas . células (por ejemplo, células de mamífero). Los homogeneizadores Dounce todavía se usan comúnmente hoy en día para aislar orgánulos celulares.
Los dos morteros del homogeneizador Dounce (conocidos como morteros "sueltos" o "A" y "ajustados" o "B") tienen un diámetro exterior cuidadosamente especificado, en relación con el diámetro interior del cilindro. El mortero "A" (suelto) tiene un espacio libre de la pared del cilindro de (~0,0025 - 0,0055 pulgadas) mientras que el mortero "B" (apretado) tiene un espacio libre de (~0,0005 - 0,0025 pulgadas). [3] Esto permite que el tejido y las células sean lisados por esfuerzo cortante con un grado mínimo (si lo hay) de calentamiento, dejando así los orgánulos extraídos o los complejos enzimáticos sensibles al calor en gran medida intactos.
Por lo general, un tejido blando (por ejemplo, el hígado de un mamífero) se corta o se rompe en pedazos más pequeños y se coloca en el cilindro de vidrio, junto con un volumen adecuado de un tampón de lisis apropiado . La homogeneización se realiza mediante un número definido de "pasos" de los morteros, primero con el mortero suelto, luego con el mortero apretado, arriba y abajo del cilindro. [4] Son típicas de cinco a diez pasadas. Los homogeneizadores Dounce generalmente se fabrican con vidrio de borosilicato, pero aún son frágiles y deben usarse con cuidado. Los tejidos especialmente duros o tenaces deben prehomogeneizarse antes de usarlos en un homogeneizador de rebote.
Las células eucariotas con paredes celulares resistentes, como Saccharomyces cerevisiae , no se pueden lisar directamente con un homogeneizador Dounce, a menos que primero se rompa la pared celular (p. ej., con liticasa o zimoliasa en el caso de S. cerevisiae ).
