Fluorómetro

Un fluorómetro o fluorímetro es un dispositivo que se utiliza para medir parámetros de fluorescencia del espectro visible : su intensidad y distribución de longitud de onda del espectro de emisión después de la excitación por un determinado espectro de luz. ^[1] Estos parámetros se utilizan para identificar la presencia y la cantidad de moléculas específicas en un medio. Los fluorómetros modernos son capaces de detectar concentraciones de moléculas fluorescentes tan bajas como 1 parte por billón.

El análisis de fluorescencia puede ser mucho más sensible que otras técnicas. Las aplicaciones incluyen química / bioquímica , medicina , monitoreo ambiental . Por ejemplo, se utilizan para medir la fluorescencia de la clorofila para investigar la fisiología de las plantas .

Normalmente, los fluorómetros utilizan un haz doble. Estos dos haces trabajan en tándem para disminuir el ruido creado por las fluctuaciones de energía radiante. El haz superior pasa a través de un filtro o monocromador y pasa a través de la muestra. El haz inferior pasa a través de un atenuador y se ajusta para tratar de igualar la potencia fluorescente emitida por la muestra. La luz de la fluorescencia de la muestra y el haz atenuado inferior son detectados por transductores separados y convertidos en una señal eléctrica que es interpretada por un sistema informático.

Dentro de la máquina, el transductor que detecta la fluorescencia creada por el haz superior está ubicado a una distancia de la muestra y en un ángulo de 90 grados con respecto al haz superior incidente. La máquina está construida así para disminuir la luz parásita del haz superior que puede incidir en el detector. El ángulo óptimo es de 90 grados. Hay dos enfoques diferentes para manejar la selección de la luz incidente que da paso a diferentes tipos de fluorómetros. Si se usan filtros para seleccionar longitudes de onda de luz, la máquina se llama fluorómetro. Mientras que un espectrofluorómetronormalmente usará dos monocromadores, algunos espectrofluorómetros pueden usar un filtro y un monocromador. Donde, en este caso, el filtro de banda ancha actúa para reducir la luz parásita, incluso de órdenes de difracción no deseados de la rejilla de difracción en el monocromador.

Las fuentes de luz para los fluorómetros a menudo dependen del tipo de muestra que se analiza. Entre las fuentes de luz más comunes para los fluorómetros se encuentra la lámpara de mercurio de baja presión . Esto proporciona muchas longitudes de onda de excitación, lo que lo convierte en el más versátil. Sin embargo, esta lámpara no es una fuente continua de radiación. La lámpara de arco de xenón se utiliza cuando se necesita una fuente continua de radiación. Ambas fuentes proporcionan un espectro adecuado de luz ultravioleta que induce la quimioluminiscencia . Estas son solo dos de las muchas fuentes de luz posibles. ^{[ cita requerida ]}

Las cubetas de vidrio y sílice suelen ser los recipientes en los que se coloca la muestra. Se debe tener cuidado de no dejar huellas dactilares o cualquier otro tipo de marca en el exterior de la cubeta, ya que esto puede producir una fluorescencia no deseada. A veces se utilizan disolventes de "grado espectro" como el metanol para limpiar las superficies de los recipientes y minimizar estos problemas.

Fluorómetro diseñado para medir la fluorescencia de clorofila en plantas

Un diseño simplista de los componentes de un fluorómetro.

Fitoplancton fotosintético del Océano Pacífico observado mediante microscopía de epifluorescencia (luz excitante azul).

Filtre después de filtrar una muestra de agua para aislar el fitoplancton en el filtro antes de la fluorometría de clorofila de sobremesa.