La tinción con hematoxilina y eosina ( o tinción con hematoxilina y eosina o tinción con hematoxilina-eosina ; a menudo abreviada como tinción H&E o tinción HE ) es una de las principales tinciones tisulares utilizadas en histología . [1] [2] [3] Es la tinción más utilizada en el diagnóstico médico [1] y, a menudo, es el estándar de oro . [4] Por ejemplo, cuando un patólogo examina una biopsia de un presunto cáncer , la sección histológica es probable que se manche con H&E.
H&E es la combinación de dos tinciones histológicas: hematoxilina y eosina . La hematoxilina tiñe los núcleos celulares de un azul violáceo y la eosina tiñe la matriz extracelular y el citoplasma de rosa, y otras estructuras adquieren diferentes matices, matices y combinaciones de estos colores. [5] [6] Por lo tanto, un patólogo puede diferenciar fácilmente entre las partes nuclear y citoplasmática de una célula y, además, los patrones generales de coloración de la tinción muestran el diseño general y la distribución de las células y proporciona una descripción general de la muestra de tejido. estructura. [7] Por lo tanto, el reconocimiento de patrones, tanto por los propios humanos expertos como por el software que ayuda a esos expertos , proporciona información histológica.
Esta combinación de tintes fue introducida por primera vez en 1876 por A. Wissowzky. [8] [7]
Usos
El procedimiento de tinción H&E es la tinción principal en histología [3] [7] [2] [5] en parte porque se puede realizar rápidamente, [7] no es costoso y tiñe los tejidos de tal manera que una cantidad considerable de se revela la anatomía microscópica [9] [10] , [7] [5] [4] y se puede utilizar para diagnosticar una amplia gama de afecciones histopatológicas . [8] Los resultados de la tinción H&E no dependen demasiado de la sustancia química utilizada para fijar el tejido o de ligeras inconsistencias en el protocolo de laboratorio, [11] y estos factores contribuyen a su uso rutinario en histología. [7]
La tinción H&E no siempre proporciona suficiente contraste para diferenciar todos los tejidos, estructuras celulares o la distribución de sustancias químicas, [9] y en estos casos se utilizan tinciones y métodos más específicos. [10] [7]
Metodo de APLICACION
Hay muchas formas de preparar las soluciones de hematoxilina (formulación) utilizadas en el procedimiento H&E, [11] [12] [6] además, existen muchos protocolos de laboratorio para producir portaobjetos teñidos con H&E, [9] algunos de los cuales pueden ser específicos a cierto laboratorio. [7] Aunque no existe un procedimiento estándar, [11] [9] los resultados por convención son razonablemente consistentes en que los núcleos celulares se tiñen de azul y el citoplasma y la matriz extracelular se tiñen de rosa. [7] Los laboratorios de histología también pueden ajustar la cantidad o el tipo de tinción para un patólogo en particular. [7]
Una vez que los tejidos se han recolectado (a menudo como biopsias ) y se han fijado, generalmente se deshidratan y se incrustan en cera de parafina derretida , el bloque resultante se monta en un micrótomo y se corta en rodajas finas. [6] Las rodajas se colocan en portaobjetos de microscopio, momento en el que se retira la cera con un disolvente y las rodajas de tejido adheridas a los portaobjetos se rehidratan y están listas para teñir. [6] Alternativamente, la tinción H&E es la tinción más utilizada en la cirugía de Mohs en la que los tejidos generalmente se congelan, se cortan en un criostato (un microtomo que corta tejido congelado), se fijan en alcohol y luego se tiñen. [9]
El método de tinción H&E implica la aplicación de hematoxilina mezclada con una sal metálica o mordiente , a menudo seguida de un enjuague en una solución ácida débil para eliminar el exceso de tinción ( diferenciación ), seguido de un azulado en agua ligeramente alcalina . [13] [8] [14] Después de la aplicación de hematoxilina, el tejido se contratiñe con eosina (más comúnmente eosina Y ). [6] [8] [7]
Resultados
La hematoxilina colorea principalmente los núcleos de las células de azul o púrpura oscuro, [6] [15] [14] junto con algunos otros tejidos, como los gránulos de queratohialina y el material calcificado . La eosina tiñe el citoplasma y algunas otras estructuras, incluida la matriz extracelular , como el colágeno [5] [7] [14], en hasta cinco tonos de rosa. [8] El eosinofílica (sustancias que se tiñen por eosina) [5] estructuras se componen generalmente de intracelulares o extracelulares proteínas . Los cuerpos de Lewy y de Mallory son ejemplos de estructuras eosinofílicas. La mayor parte del citoplasma es eosinofílico y se vuelve rosado. [10] [15] Los glóbulos rojos se tiñen de rojo intenso.
Modo de acción
Aunque la hemateína , una forma oxidada de hematoxilina, [5] [16] [14] es el colorante activo (cuando se combina con un mordiente), la mancha todavía se conoce como hematoxilina . [8] [13] La hematoxilina, cuando se combina con un mordiente (más comúnmente alumbre de aluminio ) a menudo se considera que "se asemeja" [10] a una tinción básica, cargada positivamente o catiónica . [5] La eosina es una tinción aniónica (con carga negativa) y ácida. [5] [10] La tinción de núcleos por hemalum (una combinación de iones de aluminio y hemateína) [14] se debe normalmente a la unión del complejo colorante-metal al ADN, pero la tinción nuclear se puede obtener después de la extracción de ADN [14 ] de secciones de tejido. El mecanismo es diferente al de la tinción nuclear con tintes básicos (catiónicos) como tionina o azul de toluidina . [10] La tinción con tintes básicos se produce solo a partir de soluciones que son menos ácidas que el hemalum, y se previene mediante la extracción química o enzimática previa de ácidos nucleicos. Existe evidencia que indica que los enlaces coordinados, similares a los que mantienen juntos el aluminio y la hemateína, unen el complejo hemalum al ADN y a los grupos carboxi de proteínas en la cromatina nuclear .
Las estructuras no tienen que ser ácidas o básicas para ser llamadas basófilas y eosinofílicas; la terminología se basa en la afinidad de los componentes celulares por los colorantes. Otros colores, por ejemplo, amarillo y marrón, pueden estar presentes en la muestra; son causadas por pigmentos intrínsecos como la melanina . Las láminas basales deben teñirse con tinción PAS o algunas tinciones plateadas , si deben ser bien visibles. Las fibras reticulares también requieren tinción plateada. Las estructuras hidrofóbicas también tienden a permanecer claras; estos suelen ser ricos en grasas, por ejemplo, adipocitos , mielina alrededor de los axones de las neuronas y membranas del aparato de Golgi .
Ejemplos de tejidos teñidos con H&E
Cartílago , núcleos celulares (azul-violeta), material extracelular (rosa).
Carcinoma ductal in situ (DCIS) en tejido mamario, núcleos celulares (azul-violeta), material extracelular (rosa).
Tejido pulmonar extraído de un paciente con enfisema . Núcleos celulares (azul-violeta), glóbulos rojos (rojo brillante), otros cuerpos celulares y material extracelular (rosa) y espacios de aire (blanco).
Tejido muscular , núcleos celulares (azul-violeta), material extracelular (rosa).
Carcinoma basocelular de piel , núcleos celulares (azul-violeta), material extracelular (rosa).
Referencias
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Otras lecturas
- Kiernan JA (2008) Métodos histológicos e histoquímicos: teoría y práctica. 4ª ed. Bloxham, Reino Unido: Scion.
- Lillie RD, Pizzolato P, Donaldson PT (1976) Tinciones nucleares con tintes de laca solubles con metacromo mordiente. El efecto de las reacciones químicas de bloqueo de grupos terminales y la introducción artificial de grupos ácidos en los tejidos. Histoquímica 49: 23–35.
- Llewellyn BD (2009) Tinción nuclear con alumbre-hematoxilina. Biotecnología. Histochem. 84: 159-177.
- Puchtler H, Meloan SN, Waldrop FS (1986) Aplicación de los conceptos químicos actuales a las tinciones de metal-hemateína y -brazileína. Histochemistry 85: 353–364.
enlaces externos
- Primer informativo SIGMA-ALDRICH H&E
Protocolo
- Tinción de rutina con hematoxilina y eosina de Mayer (H&E)
- Protocolo de tinción con hematoxilina y eosina (H&E)
- Rosen Lab, Departamento de Biología Molecular y Celular, Baylor College of Medicine) Protocolo paso a paso