Reacción en cadena de la polimerasa anidada
La reacción en cadena de la polimerasa anidada ( PCR anidada ) es una modificación de la reacción en cadena de la polimerasa destinada a reducir la unión no específica en productos debido a la amplificación de sitios de unión de cebadores inesperados. [1]
Reacción en cadena de la polimerasa
La reacción en cadena de la polimerasa en sí es el proceso utilizado para amplificar muestras de ADN , a través de una ADN polimerasa mediada por temperatura . Los productos se pueden usar para secuenciación o análisis, y este proceso es una parte clave de muchos laboratorios de investigación genética , junto con los usos en la toma de huellas dactilares de ADN para análisis forense y otros casos de genética humana. La PCR convencional requiere cebadorescomplementario a los extremos del ADN diana. La cantidad de producto de la PCR aumenta con el número de ciclos de temperatura a los que se somete la reacción. Un problema que ocurre comúnmente son los cebadores que se unen a regiones incorrectas del ADN, dando productos inesperados. Este problema se vuelve más probable con un mayor número de ciclos de PCR.
Imprimaciones
La reacción en cadena de la polimerasa anidada implica dos conjuntos de cebadores, usados en dos ciclos sucesivos de la reacción en cadena de la polimerasa, el segundo conjunto destinado a amplificar un objetivo secundario dentro del producto del primer ciclo. Esto permite la amplificación para un número reducido de ejecuciones en la primera ronda, lo que limita los productos no específicos. El segundo conjunto de cebadores anidados solo debe amplificar el producto previsto de la primera ronda de amplificación y no el producto no específico. Esto permite ejecutar más ciclos totales mientras se minimizan los productos no específicos. Esto es útil para plantillas raras o PCR con alto nivel de fondo.
Procesos
El ADN diana se somete a la primera ejecución de la reacción en cadena de la polimerasa con el primer conjunto de cebadores, que se muestra en verde. La selección de sitios de unión de cebadores alternativos y similares proporciona una selección de productos, y solo uno contiene la secuencia deseada.
El producto de la primera reacción se somete a una segunda ejecución con el segundo conjunto de cebadores, que se muestra en rojo. Es muy poco probable que alguno de los productos de PCR no deseados contenga sitios de unión para ambos cebadores nuevos, lo que garantiza que el producto de la segunda PCR tenga poca contaminación por productos no deseados de dímeros de cebadores, horquillas y secuencias diana de cebadores alternativas.
Referencias
- ^ Elizabeth van Pelt-Verkuil; Alex van Belkum; John P. Hays (14 de marzo de 2008). Principios y aspectos técnicos de la amplificación por PCR . Springer Science & Business Media. págs. 190–. ISBN 978-1-4020-6241-4.
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