La doble inmunodifusión de Ouchterlony (también conocida como doble inmunodifusión pasiva ) es una técnica inmunológica utilizada en la detección, identificación y cuantificación de anticuerpos y antígenos , como inmunoglobulinas y antígenos nucleares extraíbles . La técnica lleva el nombre de Örjan Ouchterlony , el médico sueco que inventó la prueba en 1948.
Procedimiento
Se corta una placa de gel para formar una serie de agujeros ("pozos") en un agar o gel de agarosa . Se coloca un extracto de muestra de interés (por ejemplo, células humanas recolectadas de tejido de amígdalas) en un pocillo, y se colocan sueros o anticuerpos purificados en otro pocillo y se deja la placa durante 48 horas para que se desarrolle. Durante este tiempo, los antígenos del extracto de muestra y los anticuerpos se difunden cada uno de sus respectivos pocillos. Donde los dos frentes de difusión se encuentran, si alguno de los anticuerpos reconoce alguno de los antígenos, se unirán a los antígenos y formarán un complejo inmunológico . El complejo inmune se precipita en el gel para dar una delgada línea blanca (línea de precipitina), que es una firma visual del reconocimiento del antígeno. [ cita requerida ]
El método se puede realizar en paralelo con múltiples pocillos llenos de diferentes mezclas de antígenos y múltiples pocillos con diferentes anticuerpos o mezclas de anticuerpos, y se puede ver la reactividad antígeno-anticuerpo observando entre qué pocillos se observa el precipitado. Cuando se usa más de un pocillo, hay muchos resultados posibles basados en la reactividad del antígeno y el anticuerpo seleccionados. La zona de líneas de equivalencia puede dar una identidad completa (es decir, una línea continua), una identidad parcial (es decir, una línea continua con un espolón en un extremo) o una no identidad (es decir, las dos líneas se cruzan completamente). [ cita requerida ]
Teoría
La precipitación ocurre con la mayoría de los antígenos porque el antígeno es multivalente (es decir, tiene varios determinantes antigénicos por molécula a los que pueden unirse los anticuerpos). Los anticuerpos tienen al menos dos sitios de unión al antígeno (y en el caso de la inmunoglobulina M hay un complejo multimérico con hasta 10 sitios de unión al antígeno), por lo que se forman grandes agregados o redes de antígeno y anticuerpo en forma de gel. Experimentalmente, se agrega una cantidad creciente de antígeno a una cantidad constante de anticuerpo en solución. Inicialmente, a baja concentración de antígeno, todo el anticuerpo está contenido en el precipitado. Esto se denomina zona de exceso de anticuerpos (es decir, fenómeno de prozona ). A medida que se agrega más antígeno, la cantidad de proteína precipitada aumenta hasta que las moléculas de antígeno / anticuerpo están en una proporción óptima. Esto se conoce como zona de equivalencia o punto de equivalencia. Cuando la cantidad de antígeno en solución excede la cantidad de anticuerpo, la cantidad de precipitación disminuirá. Esto se conoce como zona de exceso de antígeno.
Referencias
- Bailey, Graham S. (1996). "135: Inmunodifusión doble de Ouchterlony". En Walker, John M. (ed.). El manual de protocolos de proteínas . Manuales de protocolos de Springer. VII: Técnicas inmunoquímicas. Totowa, Nueva Jersey : Humana Press . págs. 749–752. doi : 10.1007 / 978-1-60327-259-9_135 . ISBN 978-0-89603-338-2.
- Ouchterlony, Örjan (1948). "Método in vitro para probar la capacidad productora de toxinas de las bacterias diftéricas". APMIS . 25 (1-2): 186-191. doi : 10.1111 / j.1699-0463.1948.tb00655.x . PMID 18887479 .
- Ouchterlony, Örjan (1949). "Reacciones antígeno-anticuerpo en geles". APMIS . 26 (4): 507–515. doi : 10.1111 / j.1699-0463.1949.tb00751.x . PMID 18143039 .
- Ouchterlony, O. (1958). "Métodos de difusión en gel para análisis inmunológico". Progreso en alergia . 5 : 1-78. PMID 13578996 .
- Ouchterlony, O. (1962). "Métodos de difusión en gel para análisis inmunológico. II". Progreso en alergia . 6 : 30-154. doi : 10.1159 / 000313795 . PMID 14482809 .
- Ouchterlony, O .; Nilsson, LA (1986). Weir, Daniel Mackay (ed.). Manual de inmunología experimental . 1. Inmunoquímica (4ª ed.). Oxford , Inglaterra : Blackwell Scientific . págs. 32,1–32,50. ISBN 9780632014996. Consultado el 23 de noviembre de 2012 . en Google Books
- "Análisis de Ouchterlony" (PDF) . Inmunología médica 544 . Universidad de California, Irvine College of Medicine . Otoño de 2011. Archivado desde el original (PDF) el 23 de noviembre de 2012 . Consultado el 23 de noviembre de 2012 .
- "Doble difusión de Ouchterlony - Patrones: teoría" . Valor @ Amrita . India: Universidad Amrita Vishwa Vidyapeetham . 2012. Archivado desde el original el 23 de noviembre de 2012 . Consultado el 24 de diciembre de 2012 .
- "Doble difusión de Ouchterlony - patrones: procedimiento" . Valor @ Amrita] . India: Universidad Amrita Vishwa Vidyapeetham . 2012. Archivado desde el original el 24 de diciembre de 2012 . Consultado el 24 de diciembre de 2012 .
- "Doble difusión de Ouchterlony - Titulación: teoría" . Valor @ Amrita . India: Universidad Amrita Vishwa Vidyapeetham . 2012. Archivado desde el original el 23 de noviembre de 2012 . Consultado el 23 de noviembre de 2012 .
- "Doble difusión de Ouchterlony - Titulación: Procedimiento" . Valor @ Amrita . India: Universidad Amrita Vishwa Vidyapeetham . 2012. Archivado desde el original el 24 de diciembre de 2012 . Consultado el 24 de diciembre de 2012 .
- "BSCI423: Lab 5. Precipitación" . Facultad de Ciencias de la Computación, Matemáticas y Naturales, Universidad de Maryland, College Park . Archivado desde el original el 23 de noviembre de 2012 . Consultado el 23 de noviembre de 2012 .
enlaces externos
- Simulador en la Universidad de California, Irvine
- "Doble inmunodifusión de Ouchterlony" (fotografía) . Consultado el 15 de mayo de 2017 .[ enlace muerto permanente ] Fotografía de la placa de inmunodifusión doble de Ouchterlony con líneas de precipitina sin teñir de identidad completa y no identidad.
- "Patrones de difusión" . Principios y aplicación de la inmunodifusión . Archivado desde el original el 11 de diciembre de 2019 . Consultado el 19 de mayo de 2017 . Fotografías de patrones de inmunodifusión de Ouchterlony que muestran líneas de precipitina teñidas de identidad completa, identidad parcial y no identidad.