La solución salina tamponada con fosfato (abreviado PBS ) es una solución tampón comúnmente utilizada en la investigación biológica . Es una solución salina a base de agua que contiene hidrogenofosfato disódico , cloruro de sodio y, en algunas formulaciones, cloruro de potasio y dihidrogenofosfato de potasio . El tampón ayuda a mantener un pH constante. La osmolaridad y las concentraciones de iones de las soluciones coinciden con las del cuerpo humano ( isotónicas ).
Aplicaciones
El PBS tiene muchos usos porque es isotónico y no tóxico para la mayoría de las células. Estos usos incluyen dilución de sustancias y enjuague de contenedores de células. PBS con EDTA también se usa para desconectar las células adheridas y agrupadas. Sin embargo, no se pueden agregar metales divalentes como el zinc , ya que esto provocaría precipitación. Para este tipo de aplicaciones, se recomiendan los tampones de Good . Se ha demostrado que el PBS es una alternativa aceptable al medio de transporte viral con respecto al transporte y almacenamiento de virus de ARN, como el SARS-CoV-2 [1]
Preparación
Hay muchas formas diferentes de preparar soluciones de PBS (una de ellas es la solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (DPBS), que tiene una composición diferente a la del PBS estándar [2] ). Algunas formulaciones no contienen potasio y magnesio, mientras que otras contienen calcio y / o magnesio (dependiendo de si el tampón se usa o no en tejido vivo o fijo: este último no requiere KCl o MgCl 2 ).
Sal | Concentración (mmol / L) | Concentración (g / L) |
---|---|---|
NaCl | 137 | 8.0 |
KCl | 2,7 | 0,2 |
Na 2 HPO 4 | 10 | 1,42 |
KH 2 PO 4 | 1.8 | 0,24 |
Comience con 800 ml de agua destilada para disolver todas las sales. Agregue agua destilada hasta un volumen total de 1 litro. El 1 × PBS resultante tendrá una concentración final de 157 mM de Na + , 140 mM de Cl - , 4,45 mM de K + , 10,1 mM de HPO 4 2− , 1,76 mM de H 2 PO 4 - y un pH de 7,96. Agregue 2,84 mM de HCl para cambiar el tampón a 7,3 mM HPO 4 2− y 4,6 mM H 2 PO 4 - para un pH final de 7,4 y una concentración de Cl - de 142 mM.
reactivo | MW | masa (g) 10 × | [M] 10 × | masa (g) 5 × | [M] 5 × | masa (g) 1 × | [M] 1 × |
---|---|---|---|---|---|---|---|
Na 2 HPO 4 | 141.95897 | 14.1960 | 0,1000 | 7.0980 | 0.0500 | 1.41960 | 0.0100 |
KH 2 PO 4 | 136.08569 | 2.4496 | 0.0180 | 1.2248 | 0,0090 | 0.24496 | 0,0018 |
NaCl | 58.44300 | 80.0669 | 1.3700 | 40.0335 | 0,6850 | 8.00669 | 0.1370 |
KCl | 74.55150 | 2.0129 | 0.0270 | 1.0064 | 0.0135 | 0.20129 | 0,0027 |
pH = 7,4 |
El pH de PBS es ~ 7,4. Al preparar soluciones tampón, es una buena práctica medir siempre el pH directamente con un medidor de pH. Si es necesario, el pH se puede ajustar con ácido clorhídrico o hidróxido de sodio.
El PBS también se puede preparar usando tabletas o bolsas tampón de PBS fabricadas comercialmente. [4]
Si se usa en cultivo celular, la solución se puede dispensar en alícuotas y esterilizar mediante autoclave o filtración . La esterilización puede no ser necesaria dependiendo de su uso. El PBS se puede almacenar a temperatura ambiente o en el refrigerador. Sin embargo, las soluciones madre concentradas pueden precipitar cuando se enfrían y deben mantenerse a temperatura ambiente hasta que el precipitado se haya disuelto completamente antes de su uso.
Ver también
Referencias
- ^ Perchetti, GA; et al. (2020). "Estabilidad del ARN del SARS-CoV-2 en solución salina tamponada con fosfato" . Revista de microbiología clínica . 58 (8): e01094-20. doi : 10.1128 / JCM.01094-20 . PMC 7383534 . PMID 32414839 .
- ^ Dulbecco, R .; et al. (1954). "Formación de placa y aislamiento de líneas puras con virus de poliomielitis" . J. Exp. Med . 99 (2): 167–182. doi : 10.1084 / jem.99.2.167 . PMC 2180341 . PMID 13130792 .
- ^ Protocolo CSH: receta de solución salina tamponada con fosfato (PBS)
- ^ Medicago AB, (2010) Hoja de especificaciones de solución salina tamponada con fosfato