Etiqueta SNAP
SNAP-tag® es una etiqueta de proteína auto-etiquetada disponible comercialmente en varios vectores de expresión. La etiqueta SNAP es un polipéptido de 182 residuos (19,4 kDa) que puede fusionarse con cualquier proteína de interés y además etiquetarse de forma específica y covalente con un ligando adecuado, como un tinte fluorescente . Desde su introducción, SNAP-tag ha encontrado numerosas aplicaciones en bioquímica y para la investigación de la función y localización de proteínas y enzimas en células vivas. [1] En comparación con los métodos de etiquetado estándar actuales utilizados en microscopía de fluorescencia, el uso de la etiqueta SNAP presenta ventajas significativas. SNAP-tag® es una marca registrada de New England Biolabs, Inc.
La biología celular utiliza herramientas que permiten la manipulación y visualización de proteínas en células vivas. Un ejemplo importante es el uso de proteínas fluorescentes, como la proteína verde fluorescente (GFP) o la proteína amarilla fluorescente (YFP). Los métodos de biología molecular permiten que estas proteínas fluorescentes se introduzcan y expresen en células vivas como proteínas de fusión. Sin embargo, las propiedades fotofísicas de las proteínas fluorescentes generalmente no son adecuadas para la espectroscopia de molécula única. Las proteínas fluorescentes tienen, en comparación con los colorantes disponibles comercialmente, un rendimiento cuántico de fluorescencia mucho menor y se destruyen rápidamente tras la excitación con un rayo láser enfocado (fotoblanqueo).
La proteína SNAP-tag® es una versión diseñada de la omnipresente enzima de mamíferos AGT, [2] codificada en humanos por el gen O-6-metilguanina-ADN metiltransferasa (MGMT). Se obtuvo SNAP-tag usando una estrategia de evolución dirigida, [3] que conduce a una variante hAGT que acepta O 6 -bencilguanina derivados en lugar de la reparación de derivados de guanina alquilados en el ADN dañado.
Se diseñó además una etiqueta ortogonal, denominada CLIP-tag ™, a partir de SNAP-tag para aceptar derivados de O 2 -bencilcitosina como sustratos, en lugar de O 6 -bencilguanina. [4] Por lo tanto, las proteínas fusionadas con Clip-tag y SNAP-tag se pueden marcar simultáneamente en las mismas células. Posteriormente se desarrolló una versión de etiqueta SNAP dividida adecuada para ensayos de complementación de proteínas y estudios de interacción proteína-proteína. [5]
Además de la microscopía de fluorescencia , la etiqueta SNAP y la etiqueta CLIP han demostrado ser útiles en la elucidación de numerosos procesos biológicos, incluida la identificación de complejos multiproteicos utilizando varios enfoques como FRET , [6] entrecruzamiento, [6] ensayo de ligadura de proximidad , [7] así como la purificación de gránulos secretores de insulina de distinta edad mediante experimentos de persecución del pulso. [8] Otras aplicaciones incluyen la medición de la vida media de las proteínas in vivo, [9] y las interacciones entre moléculas pequeñas y proteínas. [10]SNAP-tag® es una marca comercial registrada de New England Biolabs, Inc. CLIP-tag ™ es una marca comercial de New England Biolabs, Inc.
