SPINE significa experimento de interacción estreptococo-proteína . SPINE es una herramienta poderosa para detectar interacciones proteína-proteína in vivo. La proteína cebo debe expresarse con una etiqueta Strep en las condiciones en las que los posibles socios de interacción están presuntamente presentes en las células. La adición de formaldehídovincula la proteína del cebo con sus posibles socios de interacción. La proteína cebo junto con sus posibles socios de interacción se pueden aislar usando una columna de estreptactina sefarosa. Los enlaces cruzados entre la proteína de cebo y el socio de interacción potencial se pueden escindir calentando las muestras en tampón de Laemmli. Finalmente, el compañero de interacción co-purificado puede separarse mediante SDS PAGE e identificarse mediante espectrometría de masas.
Referencias
- Herzberg C, Weidinger LA, Dörrbecker B, Hübner S, Stülke J y Commichau FM (2007). COLUMNA: Un método para la detección rápida y el análisis de interacciones proteína-proteína in vivo . Proteómica 7 (22): 4032-4035
- Müller VS, Jungblut PR, Meyer TF, Hunke S (2011). Membrane-SPINE: un método mejorado para identificar los socios de interacción proteína-proteína de las proteínas de la membrana in vivo . Proteómica 11 (10): 2124-2128
- Müller VS, Tschauner K, Hunke S (2013). Membrane-SPINE: una herramienta bioquímica para identificar interacciones proteína-proteína de proteínas de membrana in vivo . J Vis Exp 7 (81): e50810