La mutagénesis con etiquetas de firma ( STM ) es una técnica genética que se utiliza para estudiar la función de los genes . Los recientes avances en la secuenciación del genoma nos han permitido catalogar una gran variedad de genomas de organismos, pero la función de los genes que contienen aún se desconoce en gran medida. Usando STM, la función del producto de un gen en particular se puede inferir desactivándolo y observando el efecto en el organismo. El uso original y más común de STM es descubrir qué genes en un patógeno están involucrados en la virulencia en su huésped , para ayudar al desarrollo de nuevas terapias médicas / medicamentos.
Premisa basica
El gen en cuestión se inactiva por mutación de inserción ; Se utiliza un transposón que se inserta en la secuencia del gen. Cuando ese gen se transcribe y se traduce en una proteína, la inserción del transposón afecta la estructura de la proteína y (en teoría) impide que funcione. En STM, los mutantes se crean mediante la inserción aleatoria de transposones y cada transposón contiene una secuencia de "etiqueta" diferente que lo identifica de forma única. Si una bacteria mutante de inserción muestra un fenotipo de interés, como la susceptibilidad a un antibiótico al que anteriormente era resistente , su genoma se puede secuenciar y buscar (usando una computadora) para cualquiera de las etiquetas utilizadas en el experimento. Cuando se localiza una etiqueta, también se localiza el gen que interrumpe (residirá en algún lugar entre un codón de inicio y un codón de parada que marcan los límites del gen).
STM se puede utilizar para descubrir qué genes son críticos para la virulencia de un patógeno inyectando un "grupo" de diferentes mutantes aleatorios en un modelo animal (por ejemplo, un modelo de infección de ratón) y observando cuáles de los mutantes sobreviven y proliferan en el huésped. Los patógenos mutantes que no sobreviven en el huésped deben tener un gen inactivado, necesario para la virulencia. Por lo tanto, este es un ejemplo de un método de selección negativa.
Referencias
- Saenz HL, Dehio C (octubre de 2005). "Mutagénesis con etiquetas de firma: avances técnicos en un método de selección negativa para la identificación del gen de virulencia". Curr. Opin. Microbiol . 8 (5): 612–9. doi : 10.1016 / j.mib.2005.08.013 . PMID 16126452 .