La sinapto-pHluorina es un indicador óptico codificado genéticamente de la liberación y el reciclaje de vesículas. Se utiliza en neurociencia para estudiar la liberación de transmisores. Consiste en una forma sensible al pH de proteína verde fluorescente (GFP) fusionada al lado luminal de una proteína de membrana asociada a vesículas (VAMP). En el pH ácido dentro de las vesículas transmisoras, la sinapto-pHluorina no es fluorescente (se apaga ). Cuando se liberan vesículas, la sinapto-pHluorina se expone al espacio extracelular neutro y la terminal presináptica se vuelve fluorescente. Después de la endocitosis , las vesículas se vuelven a acidificar y el ciclo puede comenzar de nuevo. Alcalinización químicade todas las vesículas se utiliza a menudo para la normalización de las señales de sinapto-pHluorina. La sinapto-pHluorina a veces consiste en una proteína fluorescente amarilla (YFP) para monitorear el citoplasma porque su pK a es más alto que GFP (7.1 versus 6.0). [1]
Historia
La sinapto-pHluorina fue inventada por Gero Miesenböck en 1998. [2] En 2006, se publicó una versión mejorada, utilizando sinaptofisina para dirigir la GFP a las vesículas. [3] En 2013, se introdujo un sensor de liberación de dos colores (ratio-sypHy) para determinar el tamaño de la piscina de reciclaje en sinapsis individuales. [4]
Aplicaciones
Los neurobiólogos utilizan principalmente sinapto-pHluorina para estudiar la liberación y el reciclaje del transmisor en las terminales presinápticas . [4] También se ha aplicado al estudio de la secreción de insulina en las células beta del páncreas . [5]
Referencias
- ^ Ashby, Michael C .; Ibaraki, Kyoko; Henley, Jeremy M. (mayo de 2004). "Es verde por fuera: seguimiento de las proteínas de la superficie celular con GFP sensible al pH" . Tendencias en neurociencias . 27 (5): 257–261. doi : 10.1016 / j.tins.2004.03.010 .
- ^ Miesenböck, Gero; De Angelis, Dino A .; Rothman, James E. (julio de 1998). "Visualización de la secreción y transmisión sináptica con proteínas fluorescentes verdes sensibles al pH" . Naturaleza . 394 (6689): 192-195. doi : 10.1038 / 28190 . ISSN 1476-4687 .
- ^ Granseth, Björn; Odermatt, Benjamin; Royle, Stephen J .; Lagnado, León (septiembre de 2006). "La endocitosis mediada por clatrina es el mecanismo dominante de recuperación de vesículas en las sinapsis del hipocampo" . Neurona . 51 (6): 773–786. doi : 10.1016 / j.neuron.2006.08.029 .
- ^ a b Rose, Tobías; Schoenenberger, Philipp; Jezek, Karel; Oertner, Thomas G. (2013). "Refinamiento del desarrollo del ciclo de vesículas en las sinapsis colaterales de Schaffer" . Neurona . 77 (6): 1109–1121. doi : 10.1016 / j.neuron.2013.01.021 . PMID 23522046 .
- ^ Tsuboi, Takashi; Rutter, Guy A. (abril de 2003). "Múltiples formas de exocitosis" Kiss-and-Run "reveladas por microscopía de ondas evanescentes" . Biología actual . 13 (7): 563–567. doi : 10.1016 / S0960-9822 (03) 00176-3 .