TBE o Tris / Borato / EDTA , es una solución tampón que contiene una mezcla de base Tris , ácido bórico y EDTA .
En biología molecular, los tampones TBE y TAE se utilizan a menudo en procedimientos que involucran ácidos nucleicos , siendo el más común la electroforesis . Las soluciones de trisácidos son tampones eficaces para condiciones ligeramente básicas, que mantienen el ADN desprotonado y soluble en agua. El EDTA es un quelante de cationes divalentes , particularmente de magnesio (Mg 2+ ). Como estos iones son cofactores necesarios para muchas enzimas, incluidas las nucleasas contaminantes , el papel del EDTA es proteger los ácidos nucleicos contra la degradación enzimática. Pero dado que el Mg 2+ también es un cofactor para muchas enzimas modificadoras del ADN útiles, comoenzimas de restricción y ADN polimerasas , su concentración en tampones TBE o TAE generalmente se mantiene baja (típicamente alrededor de 1 mM ).
Se encuentran disponibles sustitutos descubiertos más recientemente para los tampones TBE y TAE para electroforesis. [1]
Receta (1 litro de solución madre 5X)
- 54 g de base Tris (CAS # 77-86-1, base libre)
- 27,5 g de ácido bórico (CAS # 10043-35-3)
- 20 ml de EDTA 0,5 M (CAS # 60-00-4) ( pH 8,0)
Ajuste el pH a 8,3 con HCl. [2]
TBE se puede diluir a 1X antes de su uso en electroforesis, 0.5x también es aceptable. Las concentraciones más altas darán como resultado resultados deficientes debido a la generación excesiva de calor.
Ver también
- Tampón LB , tampón de borato de litio, un tampón similar que contiene iones de litio en lugar de Tris
- Tampón TAE , un tampón similar que contiene ácido acético en lugar de ácido bórico
Referencias
- ^ Brody, JR; Kern, SE (2004). "Historia y principios de los medios conductores para electroforesis de ADN estándar" (PDF) . Anal Biochem . 333 (1): 1–13. doi : 10.1016 / j.ab.2004.05.054 . PMID 15351274 .
- ^ https://www.eeb.ucla.edu/Faculty/Barber/Web%20Protocols/Protocol7.pdf