El tampón TAE es una solución tampón que contiene una mezcla de base Tris , ácido acético y EDTA .
En la biología molecular se utiliza en agarosa de electroforesis típicamente para la separación de ácidos nucleicos tales como ADN y ARN . [1] Se compone de tampón de acetato de Tris , generalmente a pH 8,3, y EDTA , que secuestra cationes divalentes. TAE tiene una capacidad tampón más baja que TBE y puede agotarse fácilmente, pero el ADN lineal de doble hebra se ejecuta más rápido en TAE.
Anteriormente, Brody & Kern simplificaron los tampones electroforéticos sustituyendo los tampones TBE y TAE por un medio conductor más eficiente y económico en sistemas de gel. [2]
Usos
El tampón TAE (Tris-acetato-EDTA) se utiliza como tampón de ejecución y en geles de agarosa. [3] También se ha descrito su uso en métodos de electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante para análisis de mutaciones de amplio rango. [4] El TAE se ha utilizado en diversas concentraciones para estudiar la movilidad del ADN en solución con y sin cloruro de sodio . [5] Sin embargo, las altas concentraciones de cloruro de sodio (y muchas otras sales) en una muestra de ADN retardan su movilidad. Esto puede dar lugar a interpretaciones incorrectas del patrón de bandas de ADN resultante.
Preparación
El tampón TAE se prepara comúnmente como una solución madre 50x para uso en laboratorio. Se puede preparar una solución madre 50x disolviendo 242 g de base Tris en agua, agregando 57,1 ml de ácido acético glacial y 100 ml de solución de EDTA 500 mM (pH 8,0) y llevando el volumen final hasta 1 litro. Esta solución madre se puede diluir 49: 1 con agua para hacer una solución de trabajo 1x. Esta solución 1x contendrá Tris 40 mM, ácido acético 20 mM y EDTA 1 mM.
No. | Nombre | Por 1 mol | Solución principal | 50 × | 1 × solución | 1X |
---|---|---|---|---|---|---|
1 | Base de tris | 121,1 g / L | 2 M | 242,2 g / L | 40 mM | 4.844 g / L |
2 | ácido acético | 57,1 ml / L | 1 M | 57,1 ml / L | 20 mM | 1,21 ml / L |
3 | Sal disódica de EDTA dihidrato | 372,24 g / L | 50 mM | 18,612 g / L | 1 mM | 0,372 g / L |
2 M = 2000 mM entonces 2000 mM / 50 = 40 mM para 1 ×.
1M = 1000 mM entonces 1000 mM / 50 = 20 mM para 1 ×.
50 mM / 50 = 1 mM para 1 ×.
En primer lugar, estos ingredientes deben disolverse en 500 ml y luego completarse hasta 1000 ml.
Nota: El EDTA tardará más en disolverse, por lo que mientras disuelve el EDTA use un agitador magnético (pocas cantidades de EDTA en 3 o 4 veces).
Una receta paso a paso del método de preparación para 50 × tampón TAE está disponible en protocolos.io. [6]
Ver también
Referencias
- ^ Ogden, RC y Adams, DA, (1987) Electroforesis en geles de agarosa y acrilamida. Methods Enzymol ., 152 :, 61-87.
- ^ Brody, JR, Kern, SE (2004) Historia y principios de los medios conductores para electroforesis de ADN estándar. Anal Biochem. 333 (1): 1-13. doi : 10.1016 / j.ab.2004.05.054 PMID 15351274 PDF
- ^ Sambrook, Fritsch y Maniatis (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual , 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, Nueva York, volumen 3, apéndices B.11 y B.23 ISBN 0-87969-309-6
- ^ Hayes, VM et al., (1999) Mejoras en la composición del gel y las condiciones electroforéticas para el análisis de mutaciones de amplio rango mediante electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante. Res . De ácidos nucleicos , 27 (20): e29. PMID 10497279
- ^ Stellwagen, E. y Stellwagen, NC (2002) La movilidad de la solución libre de ADN en tampones Tris-acetato-EDTA de diferentes concentraciones, con y sin NaCl añadido. Electroforesis , 23 (12): 1935-1941. PMID 12116139
- ^ Behle, Anna; Pawlowski, Alice. "Receta para tampón TAE 50x" . doi : 10.17504 / Protocols.io.gtvbwn6 . Cite journal requiere
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