preparación de rebanadas
La preparación de cortes o corte de cerebro es una técnica de laboratorio en electrofisiología que permite el estudio de una sinapsis o circuito neuronal de forma aislada del resto del cerebro, en condiciones fisiológicas controladas. El tejido cerebral se corta inicialmente a través de una cortadora de tejidos y luego se sumerge en líquido cefalorraquídeo artificial (aCSF) para estimulación y/o registro. La técnica permite un mayor control experimental , mediante la eliminación de los efectos del resto del cerebro sobre el circuito de interés, control cuidadoso de las condiciones fisiológicas mediante la perfusión de sustratos a través dellíquido de incubación , hasta la manipulación precisa de la actividad de los neurotransmisores a través de la perfusión de agonistas y antagonistas . Sin embargo, el aumento en el control viene con una disminución en la facilidad con la que los resultados se pueden aplicar a todo el sistema neuronal.
Al investigar la actividad del SNC de mamíferos, la preparación de cortes tiene varias ventajas y desventajas en comparación con el estudio in vivo. La preparación de cortes es más rápida y económica que la preparación in vivo y no requiere anestesia más allá del sacrificio inicial. La eliminación del tejido cerebral del cuerpo elimina los efectos mecánicos de los latidos del corazón y la respiración , lo que permite un registro intracelular prolongado . Las condiciones fisiológicas de la muestra, como los niveles de oxígeno y dióxido de carbono, o el pH del líquido extracelular .se puede ajustar y mantener cuidadosamente. El trabajo de corte bajo un microscopio también permite una colocación cuidadosa del electrodo de registro, lo que no sería posible en el sistema in vivo cerrado. La extirpación del tejido cerebral significa que no existe una barrera hematoencefálica , lo que permite la perfusión de fármacos, neurotransmisores o sus moduladores , o iones por todo el tejido neural. Finalmente, mientras que el circuito aislado en un corte de cerebro representa un modelo simplificado del circuito in situ , mantiene conexiones estructurales que se pierden en cultivos celulares o tejido homogeneizado .
Sin embargo, la preparación de rebanadas también tiene algunos inconvenientes. Lo más obvio es que una porción aislada carece de las conexiones habituales de entrada y salida presentes en todo el cerebro. Además, el propio proceso de corte puede comprometer el tejido. Para minimizar las complicaciones en el proceso de corte, se puede usar un cortador de tejido más sofisticado, como Compresstome, un tipo de micrótomo vibratorio que se usa para maximizar la cantidad de células de tejido viables. [1] Además, el corte del cerebro puede dañar la parte superior e inferior de la sección, pero más allá de eso, el proceso de decapitacióny la extracción del cerebro antes de colocar el corte en solución puede tener efectos sobre el tejido que aún no se comprenden. Durante el registro, el tejido también "envejece", degradándose a un ritmo más rápido que en el animal intacto. Finalmente, la composición artificial de la solución de baño hace que la presencia y las concentraciones relativas de los compuestos necesarios puedan no estar presentes.
