El fraccionamiento celular es el proceso que se usa para separar los componentes celulares mientras se preservan las funciones individuales de cada componente. [1] Este es un método que se utilizó originalmente para demostrar la ubicación celular de varios procesos bioquímicos. Otros usos del fraccionamiento subcelular es proporcionar una fuente enriquecida de una proteína para una mayor purificación y facilitar el diagnóstico de diversos estados patológicos. [2]
Homogeneización
El tejido se homogeneiza típicamente en una solución tampón que es isotónica para detener el daño osmótico. Los mecanismos de homogeneización incluyen moler, picar, picar, cambios de presión, choque osmótico , congelación-descongelación y ultrasonidos . Luego, las muestras se mantienen frías para evitar daños enzimáticos. Es la formación de masa homogénea de células (homogeneizado celular o suspensión celular ). Implica la trituración de células en un medio adecuado en presencia de ciertas enzimas con pH, composición iónica y temperatura correctos. Por ejemplo, pectinasa que digiere laminillas medias entre las células vegetales.
Filtración
Es posible que este paso no sea necesario según el origen de las células . Sin embargo, es probable que el tejido animal produzca tejido conectivo que debe eliminarse. Por lo general, la filtración se logra vertiendo a través de una gasa o con un filtro de succión y el filtro cerámico de grado correspondiente.
Purificación
La purificación se logra mediante centrifugación diferencial : el aumento secuencial de la fuerza gravitacional da como resultado la separación secuencial de los orgánulos según su densidad .
Ver también
Medios para la separación celular por densidad:
Referencias
- ^ Alberts, B; Johnson, A. "Fraccionamiento de células" . Biología molecular de la célula. 4ª edición.
- ^ Ninfa, Alexander J. (2010). Enfoques fundamentales de laboratorio para bioquímica y biotecnología . Estados Unidos de América: John Wiley & Sons, INC. P. 209. ISBN 978-0-470-08766-4.