El reactivo de Ellman (ácido 5,5′-ditiobis- (2-nitrobenzoico) o DTNB ) es una sustancia química que se utiliza para cuantificar el número o la concentración de grupos tiol en una muestra. [2] Fue desarrollado por George L. Ellman.
Nombres | |
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Nombre IUPAC preferido 5,5′-disulfanodiilbis (ácido 2-nitrobenzoico) | |
Otros nombres Ácido 3,3′-disulfanodiilbis (6-nitrobenzoico) 5- (3-carboxi-4-nitrofenil) disulfanil-2-nitrobenzoico Ácido ditionitrobenzoico Ácido 5,5′-ditiobis (2-nitrobenzoico) | |
Identificadores | |
Modelo 3D ( JSmol ) | |
Abreviaturas | DTNB |
CHEBI | |
CHEMBL | |
ChemSpider | |
Tarjeta de información ECHA | 100.000.650 |
PubChem CID | |
UNII | |
Tablero CompTox ( EPA ) | |
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Propiedades | |
C 14 H 8 N 2 O 8 S 2 | |
Masa molar | 396,34 g · mol −1 |
Punto de fusion | 240 a 245 ° C (464 a 473 ° F; 513 a 518 K) (se descompone) |
Peligros | |
Frases R (desactualizadas) | R36 / 37/38 |
Frases S (desactualizadas) | S26 S36 |
Salvo que se indique lo contrario, los datos se proporcionan para materiales en su estado estándar (a 25 ° C [77 ° F], 100 kPa). | |
verificar ( ¿qué es ?) | |
Referencias de Infobox | |
Preparación
En el artículo original de Ellman, [2] preparó este reactivo oxidando 2-nitro-5-clorobenzaldehído al ácido carboxílico, introduciendo el tiol a través del sulfuro de sodio y acoplando el monómero por oxidación con yodo . Hoy en día, este reactivo está disponible comercialmente.
Prueba de Ellman
Los tioles reaccionan con este compuesto, escindiendo el enlace disulfuro para dar 2-nitro-5-tiobenzoato (TNB - ), que se ioniza al dianión TNB 2− en agua a pH neutro y alcalino. Este ion TNB 2− tiene un color amarillo.
Esta reacción es rápida y estequiométrica, con la adición de un mol de tiol liberando un mol de TNB. El TNB 2− se cuantifica en un espectrofotómetro midiendo la absorbancia de la luz visible a 412 nm, utilizando un coeficiente de extinción de 14.150 M −1 cm −1 para soluciones tampón diluidas, [3] [4] y un coeficiente de 13.700 M - 1 cm −1 para altas concentraciones de sal, como clorhidrato de guanidinio 6 M o urea 8 M. [4] Desafortunadamente, el coeficiente de extinción para soluciones diluidas fue subestimado en la publicación original de 1959, como 13,600 M −1 cm −1 , y como se señaló en un artículo reciente, este error ha persistido en la literatura. [5] El DTNB comercial puede no ser completamente puro, por lo que puede requerir recristalización para obtener resultados completamente precisos y reproducibles. [4]
El reactivo de Ellman se puede utilizar para medir tioles de baja masa molecular, como el glutatión, tanto en soluciones puras como en muestras biológicas, como sangre. [6] También puede medir la cantidad de grupos tiol en las proteínas. [6]
Referencias
- ^ 5,5′-Dithiobis (ácido 2-nitrobenzoico) en Sigma-Aldrich
- ↑ a b Ellman GL (1959). "Grupos de sulfhidrilo tisular". Arco. Biochem. Biophys . 82 (1): 70–7. doi : 10.1016 / 0003-9861 (59) 90090-6 . PMID 13650640 .
- ^ Collier HB (1973). "Carta: una nota sobre la absortividad molar del reactivo de Ellman reducido, 3-carboxilato-4-nitrotiofenolato". Anal. Biochem . 56 (1): 310–1. doi : 10.1016 / 0003-2697 (73) 90196-6 . PMID 4764694 .
- ^ a b c Acertijos PW, Blakeley RL, Zerner B (1983). "[8] Reevaluación del reactivo de Ellman". Reevaluación del reactivo de Ellman . Meth. Enzymol . Métodos en enzimología. 91 . págs. 49–60. doi : 10.1016 / S0076-6879 (83) 91010-8 . ISBN 978-0-12-181991-0. PMID 6855597 .
- ^ Riener CK, Kada G, Gruber HJ (2002). "Medición rápida de sulfhidrilos proteicos con reactivo de Ellman y con 4,4'-ditiodipiridina". Anal Bioanal Chem . 373 (4–5): 266–76. doi : 10.1007 / s00216-002-1347-2 . PMID 12110978 . S2CID 30366479 .
- ^ a b Riener, Christian K .; Kada, Gerald; Gruber, Hermann J. (1 de julio de 2002). "Medición rápida de sulfhidrilos proteicos con reactivo de Ellman y con 4,4′-ditiodipiridina". Química analítica y bioanalítica . 373 (4–5): 266–276. doi : 10.1007 / s00216-002-1347-2 . ISSN 1618-2642 . PMID 12110978 . S2CID 30366479 .
enlaces externos
- Cuantificación de sulfhidrilos DTNB, reactivo de Ellman (utiliza coeficiente de absorbancia incorrecto)