La transferencia de lejano oeste , o transferencia de lejano oeste , es un método de biología molecular basado en la técnica de transferencia de western para detectar la interacción proteína-proteína in vitro . [1] [2] Mientras que el western blot usa una sonda de anticuerpo para detectar una proteína de interés, el western blot usa una sonda sin anticuerpos que puede unirse a la proteína de interés. Por tanto, mientras que la transferencia Western se utiliza para la detección de determinadas proteínas, la transferencia Western Blot se utiliza para detectar interacciones proteína / proteína.
Método
En la transferencia Western convencional, la electroforesis en gel se usa para separar proteínas de una muestra; estas proteínas luego se transfieren a una membrana en un paso de "transferencia". En una transferencia de Western, se identifican proteínas específicas usando una sonda de anticuerpo .
La transferencia de lejano oeste emplea proteínas que no son de anticuerpos para sondear la (s) proteína (s) de interés en la transferencia. De esta forma, se pueden identificar los compañeros de unión de la proteína sonda (o la proteína transferida). La proteína sonda se produce a menudo en E. coli usando un vector de clonación de expresión .
A continuación, la proteína sonda puede visualizarse mediante los métodos habituales: puede marcarse radiactivamente; puede llevar una etiqueta de afinidad específica como His o FLAG para la que existen anticuerpos; o puede haber un anticuerpo específico de proteína (para la proteína sonda).
Debido a que los extractos de células se desnaturalizan habitualmente por completo hirviéndolos en detergente antes de la electroforesis en gel , este enfoque es más útil para detectar interacciones que no requieren la estructura plegada nativa de la proteína de interés.
Referencias
- ↑ Hall, Randy A. (2004). "Estudio de las interacciones proteína-proteína a través de Blot Overlay o Far Western Blot". Interacciones proteína-proteína . Métodos en Biología Molecular . 261 . págs. 167-174. CiteSeerX 10.1.1.380.553 . doi : 10.1385 / 1-59259-762-9: 167 . ISBN 978-1-59259-762-8. PMID 15064457 .
- ^ Machida, Kazuya; Mayer, Bruce J. (2009). "Detección de interacciones proteína-proteína por transferencia de lejano oeste". Transferencia y detección de proteínas . Métodos en Biología Molecular. 536 . págs. 313–329. doi : 10.1007 / 978-1-59745-542-8_34 . ISBN 978-1-934115-73-2. ISSN 1064-3745 . PMID 19378071 .
enlaces externos
- Far-western + Blotting en los encabezados de temas médicos (MeSH) de la Biblioteca Nacional de Medicina de EE. UU .
- Descripción general en piercenet.com
- Resumen en utoronto.ca