Una mancha , en biología molecular y genética , es un método para transferir proteínas , ADN o ARN a un portador (por ejemplo, una membrana de nitrocelulosa , fluoruro de polivinilideno o nailon ). En muchos casos, esto se hace después de una electroforesis en gel , transfiriendo las moléculas del gel a la membrana de transferencia y otras veces agregando las muestras directamente sobre la membrana. Después de la transferencia, las proteínas transferidas, el ADN o el ARN se visualizan mediante tinción con colorante (por ejemplo, tinción con plata de proteínas), autorradiográficovisualización de moléculas marcadas radiactivamente (realizada antes de la transferencia), o marcaje específico de algunas proteínas o ácidos nucleicos . Este último se realiza con anticuerpos o sondas de hibridación que se unen solo a algunas moléculas del blot y tienen una enzima unida a ellas. Después de un lavado adecuado, esta actividad enzimática (y por lo tanto, las moléculas que buscamos en la mancha) se visualiza mediante incubación con el reactivo adecuado, produciendo un depósito de color sobre la mancha o una reacción quimioluminiscente que se registra mediante película fotográfica .
Mancha sureña
Un Southern blot es un método que se utiliza habitualmente en biología molecular para la detección de una secuencia de ADN específica en muestras de ADN. La transferencia Southern combina la transferencia de fragmentos de ADN separados por electroforesis a una membrana de filtro y la posterior detección de fragmentos mediante hibridación de sonda. [1]
Western blot
Se utiliza un western blot para la detección de proteínas específicas en muestras complejas. Las proteínas se separan primero por tamaño mediante electroforesis antes de transferirlas a una matriz de transferencia adecuada (normalmente fluoruro de polivinilideno o nitrocelulosa ) y la detección posterior con anticuerpos.
Mancha del lejano oeste
Similar a una transferencia de Western , la transferencia de Western Blot utiliza interacciones proteína-proteína para detectar la presencia de una proteína específica inmovilizada en una matriz de transferencia. Luego, los anticuerpos se utilizan para detectar la presencia del complejo proteína-proteína, lo que hace que la transferencia Far-Western sea un caso específico de la transferencia Western.
Mancha suroeste
Una transferencia suroeste se basa en transferencia Southern y se utiliza para identificar y caracterizar proteínas de unión al ADN por su capacidad para unirse a sondas de oligonucleótidos específicas. [2] Las proteínas se separan mediante electroforesis en gel y posteriormente se transfieren a membranas de nitrocelulosa similares a otros tipos de transferencia.
Mancha oriental
La transferencia oriental se utiliza para la detección de modificaciones postraduccionales específicas de proteínas. Las proteínas se separan mediante electroforesis en gel antes de ser transferidas a una matriz de transferencia, después de lo cual se detectan modificaciones postraduccionales mediante sustratos específicos (toxina del cólera, concanavalina, fosfomolibdato, etc.) o anticuerpos. [3]
Mancha del lejano oriente
La transferencia del Lejano Oriente es para la detección de oligosacáridos ligados a lípidos . La cromatografía de capa fina de alto rendimiento se usa primero para separar los lípidos por características físicas y químicas, luego se transfiere a una matriz de transferencia antes de que los oligosacáridos sean detectados por una proteína de unión específica (es decir, anticuerpos o lectinas).
Mancha del norte
La transferencia Northern es para la detección de secuencias de ARN específicas en muestras complejas. La transferencia Northern primero separa las muestras por tamaño mediante electroforesis en gel antes de que se transfieran a una matriz de transferencia y se detecten con sondas de ARN marcadas.
Mancha norteña inversa
La transferencia Northern inversa difiere de la transferencia Northern y Southern en que el ADN se inmoviliza primero en una matriz de transferencia y las secuencias específicas se detectan con sondas de ARN marcadas.
Mancha de puntos
Un dot blot es un caso especial de cualquiera de los blots anteriores donde el analito se agrega directamente a la matriz de blot (y aparece como un "punto") en lugar de separar la muestra por electroforesis antes del blot.
Lista de manchas
- Southern blot para ADN
- Northern blot para ARN
- transferencia Northern inversa para ARN
- Western blot para proteínas
- transferencia de lejano oeste para interacciones proteína-proteína
- Eastern blot para modificación postraduccional
- mancha del lejano oriente para glicolípidos
- mancha de puntos
Ver también
- Inmunodetección
Referencias
- ^ Towbin, Staehelin T, Gordon J, et al. (1979). "Transferencia electroforética de proteínas desde geles de poliacrilamida a láminas de nitrocelulosa: procedimiento y algunas aplicaciones" . PNAS . 76 (9): 4350–4. Código Bibliográfico : 1979PNAS ... 76.4350T . doi : 10.1073 / pnas.76.9.4350 . PMC 411572 . PMID 388439 .
- ^ Bowen B, Steinberg J, Laemmli UK, Weintraub H (enero de 1980). "La detección de proteínas de unión al ADN mediante transferencia de proteínas" . Ácidos nucleicos Res . 8 (1): 1–20. doi : 10.1093 / nar / 8.1.1 . PMC 327239 . PMID 6243775 .
- ^ Thomas, Thirumalapura N, Crossley EC, Ismail N, Walker DH, et al. (2009). "Modificaciones de proteínas antigénicas en Ehrlichia" . Inmunología parasitaria . 31 (6): 296-303. doi : 10.1111 / j.1365-3024.2009.01099.x . PMC 2731653 . PMID 19493209 .