Las etiquetas de proteínas son secuencias de péptidos injertadas genéticamente en una proteína recombinante . A menudo, estas etiquetas se pueden eliminar mediante agentes químicos o por medios enzimáticos, como proteólisis o empalme de inteína . Las etiquetas se adhieren a las proteínas para diversos fines. Se pueden agregar a cualquier extremo de la proteína diana, por lo que son específicos del extremo C o del extremo N o son específicos del extremo C y del extremo N. Algunas etiquetas también se insertan en la secuencia de codificación de la proteína de interés; se conocen como etiquetas internas. [1]
Las etiquetas de afinidad se añaden a las proteínas para que puedan purificarse a partir de su fuente biológica bruta utilizando una técnica de afinidad. Estos incluyen proteína de unión a quitina (CBP), proteína de unión a maltosa (MBP), Strep-tag [2] y glutatión-S-transferasa (GST). La etiqueta de poli (His) es una etiqueta de proteína ampliamente utilizada, que se une a matrices metálicas.
Se utilizan etiquetas de solubilización, especialmente para proteínas recombinantes expresadas en especies deficientes en chaperona como E. coli , para ayudar al plegamiento adecuado de las proteínas y evitar que se precipiten. Estos incluyen tiorredoxina (TRX) y poli (NANP). Algunas etiquetas de afinidad tienen un papel doble como agente de solubilización, como MBP y GST.
Las etiquetas de cromatografía se utilizan para alterar las propiedades cromatográficas de la proteína para proporcionar una resolución diferente en una técnica de separación particular. A menudo, estos consisten en aminoácidos polianiónicos, como la etiqueta FLAG .
Las etiquetas de epítopo son secuencias de péptidos cortas que se eligen porque los anticuerpos de alta afinidad se pueden producir de forma fiable en muchas especies diferentes. Suelen derivarse de genes virales, lo que explica su alta inmunorreactividad. Epítopo etiquetas incluyen ALFA-tag, V5-tag , etiqueta Myc , HA-tag , Spot-tag , T7-tag y NE-tag . Estas etiquetas son particularmente útiles para experimentos de inmunotransferencia , inmunofluorescencia e inmunoprecipitación , aunque también encuentran uso en la purificación de anticuerpos.
Las etiquetas de fluorescencia se utilizan para dar una lectura visual de una proteína. GFP y sus variantes son las etiquetas de fluorescencia más utilizadas. Las aplicaciones más avanzadas de GFP incluyen su uso como un reportero plegable (fluorescente si está plegado, incoloro si no).
Las etiquetas de proteínas pueden permitir una modificación enzimática específica (como la biotinilación por biotina ligasa) o la modificación química (como la reacción con FlAsH-EDT2 para obtener imágenes de fluorescencia). A menudo, las etiquetas se combinan para conectar las proteínas a muchos otros componentes. Sin embargo, con la adición de cada etiqueta se corre el riesgo de que la función nativa de la proteína pueda verse anulada o comprometida por interacciones con la etiqueta. Por lo tanto, después de la purificación, las etiquetas a veces se eliminan mediante proteólisis específica (por ejemplo, mediante proteasa TEV , trombina , factor Xa o enteropeptidasa ).
Lista de etiquetas de proteínas
(Consulte Propiedades químicas del aminoácido proteinogénico # para los códigos de aminoácidos AZ)
Etiquetas de péptidos
- ALFA-tag , una etiqueta de péptido helicoidal diseñada de novo (SRLEEELRRRLTE) para aplicaciones bioquímicas y de microscopía. La etiqueta es reconocida por un repertorio de anticuerpos de dominio único [3]
- AviTag, un péptido que permite la biotinilación por la enzima BirA y, por lo tanto, la proteína puede ser aislada por estreptavidina (GLNDIFEAQKIEWHE)
- C-tag, un péptido que se une a un anticuerpo de camélido de dominio único desarrollado a través de la presentación de fagos (EPEA) [4] [5]
- Calmodulin-tag , un péptido unido por la proteína calmodulina (KRRWKKNFIAVSAANRFKKISSSGAL)
- etiqueta de poliglutamato, un péptido que se une de manera eficiente a la resina de intercambio aniónico como Mono-Q (EEEEEE)
- etiqueta de poliarginina, un péptido que se une de manera eficiente a la resina de intercambio catiónico (de 5 a 9 R consecutivos)
- E-tag, un péptido reconocido por un anticuerpo (GAPVPYPDPLEPR)
- FLAG-tag , un péptido reconocido por un anticuerpo (DYKDDDDK) [6]
- HA-tag , un péptido de la hemaglutinina reconocido por un anticuerpo (YPYDVPDYA) [7]
- His-tag , 5-10 histidinas unidas por un quelato de níquel o cobalto (HHHHHH)
- Myc-tag , un péptido derivado de c- myc reconocido por un anticuerpo (EQKLISEEDL)
- NE-tag , un péptido sintético de 18 aminoácidos (TKENPRSNQEESYDDNES) reconocido por un anticuerpo monoclonal IgG1, que es útil en un amplio espectro de aplicaciones que incluyen transferencia Western, ELISA, citometría de flujo, inmunocitoquímica, inmunoprecipitación y purificación por afinidad de proteínas recombinantes [8]
- Etiqueta Rho1D4 , se refiere a los últimos 9 aminoácidos del extremo C-terminal intracelular de la rodopsina bovina (TETSQVAPA). Es una etiqueta muy específica que se puede utilizar para la purificación de proteínas de membrana .
- S-tag , un péptido derivado de la ribonucleasa A (KETAAAKFERQHMDS)
- SBP-tag , un péptido que se une a la estreptavidina (MDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGQREP) [9] [10]
- Softag 1 , para expresión en mamíferos (SLAELLNAGLGGS)
- Softag 3 , para expresión procariota (TQDPSRVG)
- Spot-tag , un péptido reconocido por un nanocuerpo (PDRVRAVSHWSS) para inmunoprecipitación, purificación por afinidad, inmunofluorescencia y microscopía de superresolución
- Strep-tag , un péptido que se une a la estreptavidina o la estreptavidina modificada llamada estreptactina (Strep-tag II: WSHPQFEK) [2]
- Etiqueta T7 , una etiqueta epítopo derivada de la proteína de la cápside principal T7 del gen T7 (MASMTGGQQMG). Se utiliza en diferentes inmunoensayos, así como en la purificación por afinidad Se utiliza principalmente [11]
- Etiqueta TC , una etiqueta de tetracisteína que es reconocida por compuestos biarsenicales FlAsH y ReAsH (CCPGCC)
- Etiqueta Ty (EVHTNQDPLD)
- Etiqueta V5 , un péptido reconocido por un anticuerpo (GKPIPNPLLGLDST) [12]
- Etiqueta VSV, un péptido reconocido por un anticuerpo (YTDIEMNRLGK)
- Etiqueta Xpress (DLYDDDDK)
Etiquetas de péptidos covalentes
- Isopeptag , un péptido que se une covalentemente a la proteína pilina-C (TDKDMTITFTNKKDAE) [13]
- SpyTag , un péptido que se une covalentemente a la proteína SpyCatcher (AHIVMVDAYKPTK) [14]
- SnoopTag , un péptido que se une covalentemente a la proteína SnoopCatcher (KLGDIEFIKVNK). [15] También se desarrolló una segunda generación, SnoopTagJr, para unirse a SnoopCatcher o DogTag (mediada por SnoopLigase) (KLGSIEFIKVNK) [16]
- DogTag, un péptido que se une covalentemente a SnoopTagJr, mediado por SnoopLigase (DIPATYEFTDGKHYITNEPIPPK) [17]
- SdyTag, un péptido que se une covalentemente a la proteína SdyCatcher (DPIVMIDNDKPIT). [18] SdyTag / SdyCatcher tiene una reactividad cruzada dependiente de la cinética con SpyTag / SpyCatcher.
Etiquetas de proteína
- BCCP (Biotin Carboxyl Carrier Protein), un dominio de proteína biotinilado por BirA que permite el reconocimiento por estreptavidina
- Glutatión-S-transferasa -tag, una proteína que se une al glutatión inmovilizado
- Etiqueta de proteína fluorescente verde , una proteína que es espontáneamente fluorescente y puede unirse a nanocuerpos
- HaloTag , una haloalcano deshalogenasa bacteriana mutada que se une covalentemente a sustratos de haloalcano
- SNAP-tag , una metiltransferasa de ADN eucariota mutada que se une covalentemente a derivados de bencilguanina
- CLIP-tag , una metiltransferasa de ADN eucariota mutada que se une covalentemente a derivados de bencilcitosina
- HUH-tag , una proteína de unión a ADN monocatenario específica de secuencia que se une covalentemente a su secuencia objetivo
- Proteína de unión a maltosa -etiqueta, una proteína que se une a la amilosa agarosa [19]
- Nus-tag
- Etiqueta de tiorredoxina
- La etiqueta Fc , derivada del dominio Fc de la inmunoglobulina, permite la dimerización y solubilización. Se puede utilizar para la purificación de Protein-A Sepharose
- Etiquetas diseñadas intrínsecamente desordenadas que contienen aminoácidos que promueven el desorden (P, E, S, T, A, Q, G, ..) [20]
- Dominio de reconocimiento de carbohidratos o etiqueta CRDSAT, una proteína que se une a la lactosa agarosa o sefarosa [21]
Otros
Aplicaciones
- Purificación por afinidad
- Matriz de proteínas
- Etiquetado de proteínas TimeSTAMP
- Western blot
Referencias
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