Las helicasas son una clase de enzimas vitales para todos los organismos . Su función principal es descomprimir los genes de un organismo . Ellos son proteínas motoras que se mueven direccionalmente a lo largo de un ácido nucleico esqueleto de fosfodiéster , que separa dos recocido cadenas de ácido nucleico tales como ADN y ARN (de ahí helic- + -asa ), utilizando la energía de ATP hidrólisis. Existen muchas helicasas, que representan la gran variedad de procesos en los que se debe catalizar la separación de las hebras. Aproximadamente el 1% de los genes eucariotas codifican helicasas. [1] El genoma humano codifica 95 helicasas no redundantes: 64 helicasas de ARN y 31 helicasas de ADN. [2] Muchos procesos celulares, como la replicación del ADN , la transcripción , la traducción , la recombinación , la reparación del ADN y la biogénesis del ribosoma, implican la separación de cadenas de ácido nucleico que requiere el uso de helicasas.
Helicasa de ADN | ||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
Identificadores | ||||||||
CE no. | 3.6.4.12 | |||||||
Bases de datos | ||||||||
IntEnz | Vista IntEnz | |||||||
BRENDA | Entrada BRENDA | |||||||
FÁCIL | NiceZyme vista | |||||||
KEGG | Entrada KEGG | |||||||
MetaCyc | camino metabólico | |||||||
PRIAM | perfil | |||||||
Estructuras PDB | RCSB PDB PDBe PDBsum | |||||||
|
Helicasa de ARN | ||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
Identificadores | ||||||||
CE no. | 3.6.4.13 | |||||||
Bases de datos | ||||||||
IntEnz | Vista IntEnz | |||||||
BRENDA | Entrada BRENDA | |||||||
FÁCIL | NiceZyme vista | |||||||
KEGG | Entrada KEGG | |||||||
MetaCyc | camino metabólico | |||||||
PRIAM | perfil | |||||||
Estructuras PDB | RCSB PDB PDBe PDBsum | |||||||
|
Función
Las helicasas se utilizan a menudo para separar las hebras de una doble hélice de ADN o una molécula de ARN auto-hibridada utilizando la energía de la hidrólisis de ATP , un proceso caracterizado por la ruptura de los enlaces de hidrógeno entre bases de nucleótidos hibridadas . También funcionan para eliminar proteínas asociadas con ácidos nucleicos y catalizar la recombinación de ADN homólogo . [3] Los procesos metabólicos del ARN, como la traducción, la transcripción, la biogénesis del ribosoma , el empalme de ARN, el transporte de ARN , la edición de ARN y la degradación del ARN, son todos facilitados por helicasas. [3] Las helicasas se mueven gradualmente a lo largo de una hebra de ácido nucleico del dúplex con una direccionalidad y procesividad específicas para cada enzima en particular.
Las helicasas adoptan diferentes estructuras y estados de oligomerización . Mientras que las helicasas similares al DnaB desenrollan el ADN como hexámeros en forma de anillo , se ha demostrado que otras enzimas son activas como monómeros o dímeros . Los estudios han demostrado que las helicasas pueden actuar pasivamente, esperando que se produzca el desenrollamiento no catalizado y luego translocarse entre hebras desplazadas, [4] o pueden desempeñar un papel activo en la catalización de la separación de hebras utilizando la energía generada en la hidrólisis de ATP. [5] En el último caso, la helicasa actúa de manera comparable a un motor activo, desenrollando y traslocándose a lo largo de su sustrato como resultado directo de su actividad ATPasa. [6] Las helicasas pueden procesarse mucho más rápido in vivo que in vitro debido a la presencia de proteínas accesorias que ayudan en la desestabilización de la unión en horquilla. [6]
Barrera de activación en la actividad helicasa
La acción de la helicasa enzimática, como el desenrollado de los ácidos nucleicos, se logra mediante la reducción de la barrera de activación () de cada acción específica. [7] La barrera de activación es el resultado de varios factores y se puede definir utilizando la siguiente ecuación, donde
= número de pares de bases desenrollados (bps),
= energía libre de formación de pares de bases,
= reducción de energía libre debido a helicasa, y
= reducción de la energía libre debido a las fuerzas de apertura. [7]
Los factores que contribuyen a la altura de la barrera de activación incluyen: la secuencia de ácido nucleico específica de la molécula involucrada, el número de pares de bases involucrados, la tensión presente en la horquilla de replicación y las fuerzas de desestabilización. [7]
Helicasas activas y pasivas
El tamaño de la barrera de activación que debe superar la helicasa contribuye a su clasificación como helicasa activa o pasiva. En las helicasas pasivas, existe una barrera de activación significativa (definida como, dónde es la constante de Boltzmann yes la temperatura del sistema). [7] Debido a esta barrera de activación significativa, su progresión de desenrollado se ve afectada en gran medida por la secuencia de ácidos nucleicos dentro de la molécula que se desenrolla y la presencia de fuerzas de desestabilización que actúan sobre la horquilla de replicación. [7] Ciertas combinaciones de ácidos nucleicos disminuirán la velocidad de desenrollado (es decir, guanina y citosina ), mientras que varias fuerzas desestabilizadoras pueden aumentar la velocidad de desenrollado. [7] En sistemas pasivos, la velocidad de desenrollado () es menor que la tasa de translocación () (translocación a lo largo del ácido nucleico monocatenario, ssNA). [7] Otra forma de ver la helicasa pasiva es su dependencia del desenredo transitorio de los pares de bases en la bifurcación de replicación para determinar su velocidad de desenrollado. [7]
En helicasas activas, , donde el sistema carece de una barrera significativa, ya que la helicasa es capaz de desestabilizar los ácidos nucleicos, desenrollando la doble hélice a una velocidad constante, independientemente de la secuencia de ácidos nucleicos. [7] En helicasas activas, es aproximadamente igual a . [7] Otra forma de ver la helicasa activa es su capacidad para desestabilizar directamente la bifurcación de replicación para promover el desenrollamiento. [7]
Las helicasas activas muestran un comportamiento similar cuando actúan sobre ácidos nucleicos bicatenarios, dsNA o ssNA, en lo que respecta a las tasas de desenrollamiento y las tasas de translocación, donde en ambos sistemas y son aproximadamente iguales.
Estas dos categorías de helicasas también pueden modelarse como mecanismos. En tales modelos, las helicasas pasivas se conceptualizan como trinquetes brownianos, impulsados por fluctuaciones térmicas y posteriores gradientes anisotrópicos a través de la red de ADN. Las helicasas activas, por el contrario, se conceptualizan como motores paso a paso, también conocidos como motores de carrera, que utilizan un "gusano de pulgada" conformacional o un mecanismo de "caminar" de mano sobre mano para progresar. [8] Dependiendo del organismo, tal progreso que atraviesa la hélice puede ocurrir a velocidades de rotación en el rango de 5,000 [9] a 10,000 [10] RPM
Historia de las helicasas de ADN
Las helicasas de ADN se descubrieron en E. coli en 1976. Esta helicasa se describió como una "enzima desenrolladora de ADN" que "desnaturaliza los dúplex de ADN en una reacción dependiente de ATP, sin degradarse de manera detectable". [11] La primera helicasa de ADN eucariota descubierta fue en 1978 en la planta de lirio. [12] Desde entonces, se descubrieron y aislaron ADN helicasas en otras bacterias, virus, levaduras, moscas y eucariotas superiores. [13] Hasta la fecha, se han aislado al menos 14 helicasas diferentes de organismos unicelulares, 6 helicasas de bacteriófagos, 12 de virus, 15 de levaduras, 8 de plantas, 11 de timo de ternera y aproximadamente 25 helicasas de células humanas. [14] A continuación se muestra una historia del descubrimiento de helicasa:
- 1976 - Descubrimiento y aislamiento de la helicasa de ADN basada en E. coli [11]
- 1978 - Descubrimiento de las primeras helicasas de ADN eucariotas, aisladas de la planta de lirio [12]
- 1982 - La "proteína T4 del gen 41" es el primer bacteriófago ADN helicasa informado [13]
- 1985 - Primeras helicasas de ADN de mamíferos aisladas de timo de ternera [15]
- 1986 - Se informa del antígeno de tumores grandes de SV40 como helicasa viral (primera proteína viral informada que se determinó que sirve como helicasa de ADN) [16]
- 1986 - ATPaseIII, una proteína de levadura, determinada como una helicasa de ADN [17]
- 1988 - Descubrimiento de siete dominios de aminoácidos conservados determinados como motivos de helicasa
- 1989 - Designación de ADN helicasa Superfamilia I y Superfamilia II [18]
- 1989 - Identificación de la familia helicasa caja MUERTA [19]
- 1990 - Aislamiento de una helicasa de ADN humana [20]
- 1992 - Aislamiento de la primera helicasa de ADN mitocondrial reportada (de cerebro bovino) [21]
- 1996 - Informe del descubrimiento de la primera helicasa de ADN de cloroplasto purificada a partir del guisante [22]
- 2002 - Aislamiento y caracterización de la primera helicasa de ADN del parásito de la malaria bioquímicamente activa - Plasmodium cynomolgi . [23]
Características estructurales
La función común de las helicasas explica el hecho de que presentan un cierto grado de homología de secuencia de aminoácidos ; todos poseen motivos de secuencia ubicados en el interior de su estructura primaria , involucrados en la unión de ATP, hidrólisis de ATP y translocación a lo largo del sustrato de ácido nucleico . La porción variable de la secuencia de aminoácidos está relacionada con las características específicas de cada helicasa.
La presencia de estos motivos helicasa permite atribuir la actividad helicasa putativa a una proteína determinada, pero no la confirma necesariamente como una helicasa activa. Sin embargo, los motivos conservados apoyan una homología evolutiva entre enzimas. Basándose en estos motivos de helicasa, se han distinguido varias superfamilias de helicasa.
Superfamilias
Las helicasas se clasifican en 6 grupos (superfamilias) según sus motivos de secuencia compartidos. [24] Las helicasas que no forman una estructura de anillo se encuentran en las superfamilias 1 y 2, y las helicasas que forman el anillo forman parte de las superfamilias 3 a 6. [25] Las helicasas también se clasifican como α o β dependiendo de si funcionan con una o dos hebra de ADN ; Las α helicasas funcionan con ADN monocatenario y las β helicasas funcionan con ADN bicatenario . También se clasifican por polaridad de translocación. Si la translocación ocurre 3'-5 ', la helicasa es de tipo A; si la translocación ocurre 5'-3 ', es de tipo B. [24]
- Superfamilia 1 (SF1) : esta superfamilia se puede subdividir en helicasas SF1A y SF1B. [24] En este grupo, las helicasas pueden tener polaridad de translocación 3'-5 '(subfamilia SF1A) o 5'-3' (subfamilia SF1B). [24] [26] Las helicasas SF1A más conocidas son Rep y UvrD en bacterias gramnegativas y PcrA helicasa de bacterias grampositivas . [24] Las Helicasas más conocidas del grupo SF1B son las helicasas RecD y Dda. [24] Tienen un núcleo de pliegue similar a RecA. [25]
- Superfamilia 2 (SF2) : este es el grupo más grande de helicasas que participan en diversos procesos celulares. [24] [27] Se caracterizan por la presencia de nueve motivos conservados: Q, I, Ia, Ib y II a VI. [27] Este grupo está compuesto principalmente por helicasas de ARN de caja DEAD. [25] Algunas otras helicasas incluidas en SF2 son la familia similar a RecQ y las enzimas similares a Snf2. [24] La mayoría de las helicasas SF2 son de tipo A con algunas excepciones, como la familia XPD. [24] Tienen un núcleo de pliegue similar a RecA. [25]
- Superfamilia 3 (SF3) : La superfamilia 3 consta de helicasas AAA + codificadas principalmente por virus de ADN pequeños y algunos virus de ADN nucleocitoplasmáticos grandes. [28] [29] Tienen una direccionalidad de translocación de 3'-5 ', lo que significa que todas son helicasas de tipo A. [24] La helicasa SF3 más conocida es la helicasa E1 del virus del papiloma. [24]
- Superfamilia 4 (SF4) : todas las helicasas de la familia SF4 tienen una polaridad de tipo B (5'-3 '). Tienen un pliegue RecA. [24] La helicasa SF4 más estudiada es la gp4 del bacteriófago T7. [24]
- Superfamilia 5 (SF5) : las proteínas Rho forman el grupo SF5. Tienen un pliegue RecA. [24]
- Superfamilia 6 (SF6) : Contienen el núcleo AAA + que no está incluido en la clasificación SF3. [24] Algunas proteínas del grupo SF6 son: mantenimiento de minicromosomas MCM , RuvB, RuvA y RuvC. [24]
Todas las helicasas son miembros de una familia que contiene un bucle P o motivo de Walker .
Trastornos y enfermedades de la helicasa
Mutaciones de helicasa ATRX
El gen ATRX codifica la helicasa dependiente de ATP, ATRX (también conocida como XH2 y XNP) de la familia del subgrupo SNF2, que se cree que es responsable de funciones como la remodelación de la cromatina, la regulación génica y la metilación del ADN. [30] [31] [32] [33] Estas funciones ayudan en la prevención de la apoptosis, lo que resulta en la regulación del tamaño cortical, así como una contribución a la supervivencia del hipocampo y las estructuras corticales, lo que afecta la memoria y el aprendizaje. [30] Esta helicasa se encuentra en el cromosoma X (Xq13.1-q21.1), en la heterocromatina pericentromérica y se une a la proteína 1 de la heterocromatina . [30] [32] Los estudios han demostrado que ATRX juega un papel en la metilación del rDNA y es esencial para el desarrollo embrionario. [34] Se han encontrado mutaciones en toda la proteína ATRX , y más del 90% de ellas se encuentran en los dominios de dedos de zinc y helicasa. [35] Las mutaciones de ATRX pueden resultar en retraso mental alfa-talasemia ligado al cromosoma X (síndrome de ATR-X ). [30]
Se ha encontrado que varios tipos de mutaciones encontradas en ATRX se asocian con ATR-X, incluidas las mutaciones de sentido erróneo de base única más comúnmente, así como mutaciones sin sentido, desplazamiento de marco y mutaciones por deleción. [33] Las características de ATR-X incluyen: microcefalia, anomalías esqueléticas y faciales, retraso mental, anomalías genitales, convulsiones, uso y capacidad limitados del lenguaje y alfa-talasemia. [30] [36] [37] El fenotipo observado en ATR-X sugiere que la mutación del gen ATRX causa la regulación a la baja de la expresión génica, como los genes de la alfa-globina. [37] Aún se desconoce qué causa la expresión de las diversas características de ATR-X en diferentes pacientes. [36]
Mutaciones puntuales de la helicasa XPD
XPD (factor D de Xeroderma pigmentosum, también conocido como proteína ERCC2) es una helicasa dependiente de ATP de la superfamilia II 5'-3 'que contiene dominios de racimo de hierro-azufre. [38] [39] mutaciones puntuales heredadas en XPD helicasa se ha demostrado que se asocia con trastornos de envejecimiento acelerado, tales como el síndrome de Cockayne (CS) y tricotiodistrofia (TTD). [40] El síndrome de Cockayne y la tricotiodistrofia son trastornos del desarrollo que involucran sensibilidad a la luz ultravioleta y envejecimiento prematuro, y el síndrome de Cockayne exhibe un retraso mental severo desde el momento del nacimiento. [40] La mutación de la helicasa XPD también se ha relacionado con el xeroderma pigmentoso (XP), un trastorno que se caracteriza por la sensibilidad a la luz ultravioleta y que produce un aumento de varias mil veces en el desarrollo de cáncer de piel. [40]
XPD es un componente esencial del complejo TFIIH , un factor de transcripción y reparación en la célula. [40] [41] [42] [43] [44] Como parte de este complejo, facilita la reparación por escisión de nucleótidos al desenrollar el ADN. [40] TFIIH ayuda a reparar el ADN dañado, como el daño solar. [40] [41] [42] [43] [44] Una mutación en la helicasa XPD que ayuda a formar este complejo y contribuye a su función provoca la sensibilidad a la luz solar que se observa en las tres enfermedades, así como un mayor riesgo de cáncer visto en XP y envejecimiento prematuro visto en tricotiodistrofia y síndrome de Cockayne. [40]
Las mutaciones de la helicasa de XPD que conducen a la tricotiodistrofia se encuentran en toda la proteína en varios lugares involucrados en las interacciones proteína-proteína. [40] Esta mutación da como resultado una proteína inestable debido a su incapacidad para formar interacciones estabilizadoras con otras proteínas en los puntos de las mutaciones. [40] Esto, a su vez, desestabiliza todo el complejo TFIIH, lo que conduce a defectos en los mecanismos de transcripción y reparación de la célula. [40]
Se ha sugerido que las mutaciones de helicasa de XPD que conducen al síndrome de Cockayne podrían ser el resultado de mutaciones dentro de XPD, lo que causa rigidez de la proteína y la consiguiente incapacidad para cambiar de funciones de reparación a funciones de transcripción debido a un "bloqueo" en el modo de reparación. [40] Esto podría hacer que la helicasa corte segmentos de ADN destinados a la transcripción. [40] Aunque la evidencia actual apunta a un defecto en la helicasa XPD que resulta en una pérdida de flexibilidad en la proteína en los casos del síndrome de Cockayne, aún no está claro cómo esta estructura de la proteína conduce a los síntomas descritos en el síndrome de Cockayne. [40]
En la xeroderma pigmentosa, la mutación de la helicasa XPD existe en el sitio de unión de ATP o ADN. [40] Esto da como resultado una helicasa estructuralmente funcional capaz de facilitar la transcripción, sin embargo, inhibe su función para desenrollar el ADN y repararlo. [40] La falta de la capacidad de una célula para reparar mutaciones, como las causadas por el daño solar, es la causa de la alta tasa de cáncer en los pacientes con xeroderma pigmentosa.
Mutaciones de la familia RecQ
Las helicasas RecQ (3'-5 ') pertenecen al grupo de helicasas de la Superfamilia II, que ayudan a mantener la estabilidad del genoma y suprimen la recombinación inapropiada. [45] [46] Las deficiencias y / o mutaciones en las helicasas de la familia RecQ muestran una recombinación genética aberrante y / o replicación del ADN, lo que conduce a inestabilidad cromosómica y una disminución general de la capacidad de proliferación. [45] Se ha demostrado que las mutaciones en las helicasas BLM, RECQL4 y WRN de la familia RecQ , que desempeñan un papel en la regulación de la recombinación homóloga, provocan las enfermedades autosómicas recesivas síndrome de Bloom (BS), síndrome de Rothmund-Thomson (RTS) y Werner síndrome (WS), respectivamente. [46] [47]
El síndrome de Bloom se caracteriza por una predisposición al cáncer de aparición precoz, con una edad media de aparición de 24 años. [46] [48] Los pacientes con síndrome de las células de Bloom muestran una alta frecuencia de intercambio recíproco entre cromátidas hermanas (SCE) y daño cromosómico excesivo. [49] Existe evidencia que sugiere que BLM desempeña un papel en el rescate de la replicación del ADN interrumpida en las horquillas de replicación. [49]
El síndrome de Werner es un trastorno del envejecimiento prematuro, con síntomas que incluyen la aparición temprana de aterosclerosis y osteoporosis y otras enfermedades relacionadas con la edad, una alta incidencia de sarcoma y la muerte que a menudo ocurre por infarto de miocardio o cáncer en la cuarta a sexta década de la vida. [46] [50] Las células de los pacientes con síndrome de Werner exhiben una esperanza de vida reproductiva reducida con roturas y translocaciones cromosómicas, así como grandes deleciones de componentes cromosómicos, lo que causa inestabilidad genómica. [50]
El síndrome de Rothmund-Thomson, también conocido como poiquilodermia congénita , se caracteriza por envejecimiento prematuro, anomalías cutáneas y esqueléticas, erupción cutánea, poiquilodermia , cataratas juveniles y predisposición a cánceres como los osteosarcomas. [46] [51] Los reordenamientos cromosómicos que causan inestabilidad genómica se encuentran en las células de los pacientes con síndrome de Rothmund-Thomson. [51]
Recombinación meiótica
Durante la meiosis, las roturas de la doble hebra del ADN y otros daños del ADN en una cromátida se reparan mediante recombinación homóloga utilizando la cromátida hermana o una cromátida no hermana homóloga como molde. Esta reparación puede resultar en un cruzamiento (CO) o, más frecuentemente, un recombinante no cruzado (NCO). En la levadura Schizosaccharomyces pombe, la helicasa de ADN de la familia FANCM FmI1 dirige la formación de recombinación de NCO durante la meiosis. [52] La helicasa Rqh1 de tipo RecQ también dirige la recombinación meiótica NCO. [53] Estas helicasas, a través de su capacidad para desenrollar intermedios de bucle D , promueven la recombinación de NCO mediante el proceso de hibridación de cadenas dependiente de síntesis .
En la planta Arabidopsis thaliana , FANCM helicasa promueve NCO y antagoniza la formación de CO recombinantes. [54] Otra helicasa, RECQ4A / B, también reduce de forma independiente los CO. Se sugirió que los CO están restringidos debido a los costos a largo plazo de la recombinación de CO, es decir, la ruptura de combinaciones genéticas favorables de alelos acumulados por selección natural pasada . [54]
Helicasas de ARN
Las helicasas de ARN son esenciales para la mayoría de los procesos del metabolismo del ARN, como la biogénesis del ribosoma , el corte y empalme del ARNm previo y el inicio de la traducción . También juegan un papel importante en la detección de ARN virales. [55] Las helicasas de ARN están involucradas en la mediación de la respuesta inmune antiviral porque pueden identificar ARN extraños en vertebrados. Aproximadamente el 80% de todos los virus son virus de ARN y contienen sus propias helicasas de ARN. [56] Las helicasas de ARN defectuosas se han relacionado con cánceres, enfermedades infecciosas y trastornos neurodegenerativos. [55] Algunos trastornos neurológicos asociados con helicasas de ARN defectuosas son: esclerosis lateral amiotrófica , atrofia muscular espinal , ataxia espinocerebelosa tipo 2 , enfermedad de Alzheimer y síndrome de contractura congénita letal . [56]
Las helicasas de ARN y las helicasas de ADN se pueden encontrar juntas en todas las superfamilias de helicasa excepto en SF6. [57] [58] Todas las helicasas de ARN eucariotas que se han identificado hasta la fecha no forman anillo y son parte de SF1 y SF2. Por otro lado, se han encontrado helicasas de ARN formadoras de anillos en bacterias y virus. [55] Sin embargo, no todas las helicasas de ARN exhiben actividad helicasa definida por la función enzimática, es decir, proteínas de la familia Swi / Snf. Aunque estas proteínas llevan los motivos de helicasa típicos, hidrolizan ATP de una manera dependiente de ácido nucleico y se construyen alrededor de un núcleo de helicasa, en general, no se observa actividad de desenrollamiento. [59]
Las helicasas de ARN que exhiben actividad de desenrollado se han caracterizado por al menos dos mecanismos diferentes: desenrollamiento dúplex canónico y separación de hebra local. El desenrollado dúplex canónico es la separación direccional escalonada de una hebra dúplex, como se describió anteriormente, para el desenrollado del ADN. Sin embargo, la separación de la cadena local se produce mediante un proceso en el que la enzima helicasa se carga en cualquier lugar a lo largo del dúplex. Esto suele ser ayudado por una región monocatenaria del ARN, y la carga de la enzima se acompaña de la unión de ATP. [60] Una vez que se unen la helicasa y el ATP, se produce la separación de la cadena local, lo que requiere la unión de ATP pero no el proceso real de hidrólisis de ATP. [61] Presentado con menos pares de bases, el dúplex se disocia sin más ayuda de la enzima. Este modo de desenrollado es utilizado por las helicasas de caja DEAD / DEAH . [62]
Actualmente se encuentra disponible en línea una base de datos de ARN helicasa [63] que contiene una lista completa de ARN helicasa con información como secuencia, estructura y funciones bioquímicas y celulares. [55]
Herramientas de diagnóstico para la medición de helicasa
Medición y seguimiento de la actividad de la helicasa.
Se utilizan varios métodos para medir la actividad helicasa in vitro . Estos métodos van desde ensayos cualitativos (ensayos que generalmente implican resultados que no involucran valores o mediciones) hasta cuantitativos (ensayos con resultados numéricos que se pueden utilizar en análisis estadístico y numérico). En 1982-1983, se desarrolló el primer ensayo bioquímico directo para medir la actividad de la helicasa. [13] [64] Este método se denominó "ensayo de desplazamiento de hebra".
- El ensayo de desplazamiento de cadena implica el radiomarcaje de dúplex de ADN. Después del tratamiento con helicasa, el ADN monocatenario se detecta visualmente como separado del ADN bicatenario mediante electroforesis PAGE no desnaturalizante . Tras la detección del ADN monocatenario, se cuantifica la cantidad de etiqueta radiactiva que se encuentra en el ADN monocatenario para dar un valor numérico de la cantidad de ADN bicatenario que se desenrolla.
- El ensayo de desplazamiento de hebra es aceptable para el análisis cualitativo, su incapacidad para mostrar resultados durante más de un único punto de tiempo, su consumo de tiempo y su dependencia de compuestos radiactivos para el etiquetado justificaron la necesidad de desarrollar diagnósticos que puedan monitorear la actividad helicasa en tiempo real. .
Más tarde se desarrollaron otros métodos que incorporaron algunos, si no todos los siguientes: mecánica de alto rendimiento, el uso de etiquetado de nucleótidos no radiactivos, tiempo de reacción más rápido / menor consumo de tiempo, monitoreo en tiempo real de la actividad helicasa (usando medición cinética en su lugar del análisis de punto final / punto único). Estas metodologías incluyen: "un método de flujo de apagado rápido, ensayos basados en fluorescencia, ensayos de filtración, un ensayo de centelleo de proximidad , un ensayo de transferencia de energía de resonancia de fluorescencia con resolución temporal , un ensayo basado en tecnología flashplate, ensayos de extinción de fluorescencia homogénea con resolución temporal y electroquimioluminiscencia -análisis de helicasa basados en ". [14] Con el uso de ecuaciones matemáticas especializadas, algunos de estos ensayos se pueden utilizar para determinar cuántos nucleótidos de pares de bases puede romper una helicasa por hidrólisis de 1 molécula de ATP. [sesenta y cinco]
También se encuentran disponibles kits de diagnóstico disponibles comercialmente. Uno de estos equipos es el ensayo de diagnóstico "Trupoint" de PerkinElmer , Inc. Este ensayo es un ensayo de extinción de la fluorescencia resuelto en el tiempo que utiliza la tecnología PerkinEmer "SignalClimb" que se basa en dos etiquetas que se unen muy próximas entre sí pero en direcciones opuestas. Hebras de ADN. Una etiqueta es un quelato de lantánido fluorescente, que sirve como etiqueta que se controla a través de un lector de placa de 96/384 pocillos adecuado. La otra etiqueta es una molécula extintora orgánica. La base de este ensayo es la "extinción" o la represión de la señal del quelato de lantánido por la molécula extintora orgánica cuando los dos están muy próximos, como lo sería cuando el dúplex de ADN está en su estado nativo. Tras la actividad helicasa en el dúplex, los marcadores de extintor y lantánidos se separan a medida que se desenrolla el ADN. Esta pérdida de proximidad niega la capacidad de los inhibidores de reprimir la señal de lantánido, provocando un aumento detectable de la fluorescencia que es representativo de la cantidad de ADN desenrollado y puede usarse como una medida cuantificable de la actividad helicasa. La ejecución y el uso de técnicas de imágenes de fluorescencia de molécula única, centrándose en métodos que incluyen atrapamiento óptico junto con imágenes epifluorescentes, y también inmovilización de superficie junto con visualización de fluorescencia de reflexión interna total. Combinado con células de flujo de microcanales y control de microfluidos, permite obtener imágenes y rastrear moléculas de ADN y proteínas marcadas con fluorescencia individuales, lo que permite medir el desenrollado y la translocación del ADN con una resolución de una sola molécula. [66]
Determinación de la polaridad de la helicasa
La polaridad de la helicasa, que también se considera "direccionalidad", se define como la dirección (caracterizada como 5 '→ 3' o 3 '→ 5') del movimiento de la helicasa en la cadena simple de ADN / ARN a lo largo de la cual se mueve. Esta determinación de polaridad es vital en f.ex. determinar si la helicasa probada se adhiere a la cadena principal de ADN o la cadena retrasada de ADN. Para caracterizar esta característica de helicasa, se utiliza un ADN parcialmente dúplex como sustrato que tiene una región central de ADN monocatenario con diferentes longitudes de regiones dúplex de ADN (una región corta que corre 5 '→ 3' y una región más larga que corre 3 '→ 5') en ambos lados de esta región. [67] Una vez que se agrega la helicasa a esa región central de una sola hebra, la polaridad se determina mediante la caracterización del ADN de una sola hebra recién formado.
Ver también
- Cromodominio de helicasa de ADN proteína de unión: CHD1 , CHD1L , CHD2 , CHD3 , CHD4 , CHD5 , CHD6 , CHD7 , CHD8 , CHD9
- Caja DEAD / DEAD / DEAH cuadro de helicasa : DDX3X , ddx5 , DDX6 , DDX10 , DDX11 , DDX12 , DDX58 , DHX8 , DHX9 , DHX37 , DHX40 , DHX58
- ASCC3 , BLM , BRIP1 , DNA2 , FBXO18 , FBXO30 , HELB , HELLS , HELQ , HELZ , HFM1 , HLTF , IFIH1 , NAV2 , PIF1 , RECQL , RTEL1 , SHPRH , SMARCA4 , SMARCAL1 , WRN , WRNIP1
Referencias
- ^ Wu Y (2012). "Desbobinado y rebobinado: ¿caras dobles de helicasa?" . J Nucleic Acids . 2012 : 1–14. doi : 10.1155 / 2012/140601 . PMC 3409536 . PMID 22888405 .
- ^ Umate P, Tuteja N, Tuteja R (enero de 2011). "Análisis integral de todo el genoma de helicasas humanas" . Commun Integr Biol . 4 (1): 118–37. doi : 10.4161 / cib.13844 . PMC 3073292 . PMID 21509200 .
- ^ a b Patel, SS; Donmez, yo (2006). "Mecanismos de Helicases" . Revista de Química Biológica . 281 (27): 18265–18268. doi : 10.1074 / jbc.R600008200 . ISSN 0021-9258 . PMID 16670085 .
- ^ Lionnet T, Spiering MM, Benkovic SJ, Bensimon D, Croquette V (2007). "La observación en tiempo real de la helicasa del bacteriófago T4 gp41 revela un mecanismo de desenrollado" . PNAS . 104 (50): 19790–19795. Código Bibliográfico : 2007PNAS..10419790L . doi : 10.1073 / pnas.0709793104 . PMC 2148377 . PMID 18077411 .
- ^ Johnson DS, Bai L, Smith BY, Patel SS, Wang MD (2007). "Los estudios de una sola molécula revelan la dinámica del ADN desenrollado por la helicasa t7 en forma de anillo" . Celular . 129 (7): 1299–309. doi : 10.1016 / j.cell.2007.04.038 . PMC 2699903 . PMID 17604719 .
- ^ a b "Los investigadores resuelven el misterio de cómo se separan las hebras de ADN" . 2007-07-03 . Consultado el 5 de julio de 2007 .
- ^ a b c d e f g h yo j k Manosas M, Xi XG, Bensimon D, Croquette V (septiembre de 2010). "Mecanismos activos y pasivos de las helicasas" . Ácidos nucleicos Res . 38 (16): 5518–26. doi : 10.1093 / nar / gkq273 . PMC 2938219 . PMID 20423906 .
- ^ Wu, CG y Spies, M .: Resumen: ¿Qué son las Helicasas? En: Spies, M. (Ed.): [1] . Springer Science + Business Media, Nueva York, 2013
- ^ "Bioquímica de Kevin Ahern (BB 451/551) en la Universidad Estatal de Oregon" . oregonstate.edu .
- ^ Biblioteca de animación 3-D; Replicación: [2] (avanzado)
- ^ a b Abdel-Monem M, Dürwald H, Hoffmann-Berling H (junio de 1976). "Desenrollamiento enzimático del ADN. 2. Separación de la cadena por una enzima desenrolladora de ADN dependiente de ATP" . EUR. J. Biochem . 65 (2): 441–9. doi : 10.1111 / j.1432-1033.1976.tb10359.x . PMID 133023 .
- ^ a b Hotta Y, Stern H (mayo de 1978). "ADN desenrollando la proteína de las células meióticas de Lilium". Bioquímica . 17 (10): 1872–80. doi : 10.1021 / bi00603a011 . PMID 207302 .
- ^ a b c Venkatesan M, Silver LL, Nossal NG (octubre de 1982). "La proteína del gen 41 del bacteriófago T4, necesaria para la síntesis de cebadores de ARN, también es una helicasa de ADN". J. Biol. Chem . 257 (20): 12426–34. PMID 6288720 .
- ^ a b Tuteja N, Tuteja R (mayo de 2004). "Helicasas de ADN procariotas y eucariotas. Proteínas motoras moleculares esenciales para la maquinaria celular" . EUR. J. Biochem . 271 (10): 1835–48. doi : 10.1111 / j.1432-1033.2004.04093.x . PMC 7164108 . PMID 15128294 .
- ^ Hubscher U, Stalder HP (1985). "Helicasa de ADN de mamíferos" . Ácidos nucleicos Res . 13 (15): 5471–5483. doi : 10.1093 / nar / 13.15.5471 . PMC 321884 . PMID 3162158 .
- ^ Stahl H, Dröge P, Knippers R (agosto de 1986). "Actividad de ADN helicasa del antígeno de tumor grande SV40" . EMBO J . 5 (8): 1939–44. doi : 10.1002 / j.1460-2075.1986.tb04447.x . PMC 1167061 . PMID 3019672 .
- ^ Sugino A, Ryu BH, Sugino T, Naumovski L, Friedberg EC (septiembre de 1986). "Una nueva ATPasa dependiente de ADN que estimula la ADN polimerasa I de levadura y tiene actividad de desenrollado del ADN". J. Biol. Chem . 261 (25): 11744–50. PMID 3017945 .
- ^ Gorbalenya AE, Koonin EV, Donchenko AP, Blinov VM (junio de 1989). "Dos superfamilias relacionadas de helicasas putativas implicadas en la replicación, recombinación, reparación y expresión de genomas de ADN y ARN" . Ácidos nucleicos Res . 17 (12): 4713-30. doi : 10.1093 / nar / 17.12.4713 . PMC 318027 . PMID 2546125 .
- ^ Linder, P., Lasko, PF, Ashburner, M., Leroy, P., Nielson, PJ, Nishi, K., Schneir, J., Slonimski, PP (1989) Nacimiento de la caja MUERTA. Nature (Londres) 337, 121-122.
- ^ Tuteja N, Tuteja R, Rahman K, Kang LY, Falaschi A (diciembre de 1990). "Una helicasa de ADN de células humanas" . Ácidos nucleicos Res . 18 (23): 6785–92. doi : 10.1093 / nar / 18.23.6785 . PMC 332732 . PMID 1702201 .
- ^ Hehman GL, Hauswirth WW (septiembre de 1992). "ADN helicasa de mitocondrias de mamíferos" . Proc. Natl. Acad. Sci. USA . 89 (18): 8562–6. Código bibliográfico : 1992PNAS ... 89.8562H . doi : 10.1073 / pnas.89.18.8562 . PMC 49960 . PMID 1326759 .
- ^ Tuteja N, Phan TN, Tewari KK (mayo de 1996). "Purificación y caracterización de una helicasa de ADN de cloroplasto de guisante que se transloca en la dirección 3'-a-5 '" . EUR. J. Biochem . 238 (1): 54–63. doi : 10.1111 / j.1432-1033.1996.0054q.x . PMID 8665952 .
- ^ Tuteja R, Malhotra P, Song P, Tuteja N, Chauhan VS (2002). "Aislamiento y caracterización de un homólogo de eIF-4A de Plasmodium cynomolgi". Mol. Biochem. Parasitol . 124 (1–2): 79–83. doi : 10.1016 / S0166-6851 (02) 00205-0 . PMID 12387853 .
- ^ a b c d e f g h i j k l m n o p Martin Singleton; Mark S. Dillingham; Dale B. Wigley (2007). "Estructura y mecanismo de las helicasas y translocasas de ácidos nucleicos". Revisión anual de bioquímica . 76 : 23–50. doi : 10.1146 / annurev.biochem.76.052305.115300 . PMID 17506634 .
- ^ a b c d Margaret E. Fairman-Williams; Ulf-Peter Guenther; Echard Jankowsky (2010). "Helicasas SF1 y SF2: asuntos familiares" . Opinión actual en biología estructural . 20 (3): 313–324. doi : 10.1016 / j.sbi.2010.03.011 . PMC 2916977 . PMID 20456941 .
- ^ Stelter M, Acajjaoui S, McSweeney S, Timmins J (2013). "Conocimiento estructural y mecanicista en el desenrollado del ADN por Deinococcus radiodurans UvrD" . PLOS One . 8 (10): e77364. Código Bibliográfico : 2013PLoSO ... 877364S . doi : 10.1371 / journal.pone.0077364 . PMC 3797037 . PMID 24143224 .
- ^ a b Pavan Umate; Narendra Tuteja; Renu Tuteja (2011). "Análisis completo del genoma de helicasas humanas" . Biología comunicativa e integrativa . 4 (1): 118-137. doi : 10.4161 / cib.13844 . PMC 3073292 . PMID 21509200 .
- ^ Koonin EV, Aravind L, Iyer LM (2001). "Origen común de cuatro familias diversas de virus de ADN eucariotas grandes" . J. Virol . 75 (23): 11720–34. doi : 10.1128 / JVI.75.23.11720-11734.2001 . PMC 114758 . PMID 11689653 .
- ^ Koonin EV, Aravind L, Leipe DD, Iyer LM (2004). "Historia evolutiva y clasificación de orden superior de AAA + ATPasas". J. Struct. Biol . 146 (1–2): 11–31. doi : 10.1016 / j.jsb.2003.10.010 . PMID 15037234 .
- ^ a b c d e Ropers HH, Hamel BC (enero de 2005). "Retraso mental ligado al cromosoma X". Nat. Rev. Genet . 6 (1): 46–57. doi : 10.1038 / nrg1501 . PMID 15630421 .
- ^ Gibbons RJ, Picketts DJ, Villard L, Higgs DR (marzo de 1995). "Las mutaciones en un regulador transcripcional global putativo causan retraso mental ligado al cromosoma X con síndrome de alfa-talasemia ATR-X". Celular . 80 (6): 837–45. doi : 10.1016 / 0092-8674 (95) 90287-2 . PMID 7697714 .Mantenimiento de CS1: utiliza el parámetro de autores ( enlace )
- ^ a b Base de datos de proteínas en línea Nextprot. "ATRX-Regulador transcripcional ATRX". , Consultado el 12 de noviembre de 2012.
- ^ a b Picketts DJ, Higgs DR, Bachoo S, Blake DJ, Quarrell OW, Gibbons RJ (diciembre de 1996). "ATRX codifica un nuevo miembro de la familia de proteínas SNF2: las mutaciones apuntan a un mecanismo común subyacente al síndrome ATR-X" . Tararear. Mol. Genet . 5 (12): 1899–907. doi : 10.1093 / hmg / 5.12.1899 . PMID 8968741 .Mantenimiento de CS1: utiliza el parámetro de autores ( enlace )
- ^ Gibbons R (2006). "Retraso mental alfa talasemia, ligado al X" . Orphanet J Rare Dis . 1 : 15. doi : 10.1186 / 1750-1172-1-15 . PMC 1464382 . PMID 16722615 .
- ^ Pagon RA, Bird TD, Dolan CR, Stephens K, Adam MP, Stevenson RE (1993). "Síndrome de discapacidad intelectual ligado a alfa-talasemia X". PMID 20301622 . Cite journal requiere
|journal=
( ayuda ) - ^ a b Gibbons R (2006). "Retraso mental alfa talasemia, ligado al X" . Orphanet J Rare Dis . 1 : 15. doi : 10.1186 / 1750-1172-1-15 . PMC 1464382 . PMID 16722615 .
- ^ a b Gibbons RJ, Picketts DJ, Villard L, Higgs DR (marzo de 1995). "Las mutaciones en un regulador transcripcional global putativo causan retraso mental ligado al cromosoma X con alfa-talasemia (síndrome ATR-X)". Celular . 80 (6): 837–45. doi : 10.1016 / 0092-8674 (95) 90287-2 . PMID 7697714 .
- ^ Singleton MR, Dillingham MS, Wigley DB (2007). "Estructura y mecanismo de helicasas y translocasas de ácidos nucleicos". Annu. Rev. Biochem . 76 : 23–50. doi : 10.1146 / annurev.biochem.76.052305.115300 . PMID 17506634 .
- ^ Rudolf J, Rouillon C, Schwarz-Linek U, White MF (enero de 2010). "La helicasa XPD desenrolla las estructuras de las burbujas y no se detiene por las lesiones del ADN eliminadas por la vía de reparación de la escisión de nucleótidos" . Ácidos nucleicos Res . 38 (3): 931–41. doi : 10.1093 / nar / gkp1058 . PMC 2817471 . PMID 19933257 .
- ^ a b c d e f g h i j k l m n o Fan L, Fuss JO, Cheng QJ, Arvai AS, Hammel M, Roberts VA, Cooper PK, Tainer JA (mayo de 2008). "Estructuras y actividades de la helicasa de XPD: conocimientos sobre el cáncer y los fenotipos de envejecimiento de las mutaciones de XPD" . Celular . 133 (5): 789–800. doi : 10.1016 / j.cell.2008.04.030 . PMC 3055247 . PMID 18510924 .
- ^ a b Lainé JP, Mocquet V, Egly JM (2006). Actividades enzimáticas de TFIIH en la reparación por escisión de nucleótidos y transcripción . Meth. Enzymol . Métodos en enzimología. 408 . págs. 246–63. doi : 10.1016 / S0076-6879 (06) 08015-3 . ISBN 9780121828134. PMID 16793373 .
- ^ a b Tirode F, Busso D, Coin F, Egly JM (enero de 1999). "Reconstitución del factor de transcripción TFIIH: asignación de funciones para las tres subunidades enzimáticas, XPB, XPD y cdk7". Mol. Celular . 3 (1): 87–95. doi : 10.1016 / S1097-2765 (00) 80177-X . PMID 10024882 .Mantenimiento de CS1: utiliza el parámetro de autores ( enlace )
- ^ a b Sung P, Bailly V, Weber C, Thompson LH, Prakash L, Prakash S (octubre de 1993). "Gen del grupo D del xeroderma pigmentoso humano codifica una helicasa de ADN". Naturaleza . 365 (6449): 852–5. Código Bibliográfico : 1993Natur.365..852S . doi : 10.1038 / 365852a0 . PMID 8413672 .
- ^ a b Schaeffer L, Roy R, Humbert S, Moncollin V, Vermeulen W, Hoeijmakers JH, Chambon P, Egly JM (abril de 1993). "Helicasa de reparación de ADN: un componente del factor de transcripción básico BTF2 (TFIIH)". Ciencia . 260 (5104): 58–63. Código Bibliográfico : 1993Sci ... 260 ... 58S . doi : 10.1126 / science.8465201 . PMID 8465201 .
- ^ a b Hanada K, Hickson ID (septiembre de 2007). "Genética molecular de los trastornos de la helicasa RecQ". Célula. Mol. Life Sci . 64 (17): 2306-22. doi : 10.1007 / s00018-007-7121-z . PMID 17571213 .
- ^ a b c d e Opresko PL, Cheng WH, Bohr VA (abril de 2004). "Unión de la bioquímica de la helicasa RecQ y la enfermedad humana" . J. Biol. Chem . 279 (18): 18099–102. doi : 10.1074 / jbc.R300034200 . PMID 15023996 .
- ^ Ouyang KJ, Woo LL, Ellis NA (2008). "Recombinación homóloga y mantenimiento de la integridad del genoma: cáncer y envejecimiento a través del prisma de helicasas RecQ humanas". Mech. Envejecimiento Dev . 129 (7-8): 425-40. doi : 10.1016 / j.mad.2008.03.003 . PMID 18430459 .
- ^ Ellis NA, Groden J, Ye TZ, Straughen J, Lennon DJ, Ciocci S, Proytcheva M, German J (noviembre de 1995). "El producto del gen del síndrome de Bloom es homólogo a las helicasas RecQ". Celular . 83 (4): 655–66. doi : 10.1016 / 0092-8674 (95) 90105-1 . PMID 7585968 .
- ^ a b Selak N, Bachrati CZ, Shevelev I, Dietschy T, van Loon B, Jacob A, Hübscher U, Hoheisel JD, Hickson ID, Stagljar I (septiembre de 2008). "El síndrome de Bloom helicasa (BLM) interactúa física y funcionalmente con p12, la subunidad más pequeña de la ADN polimerasa delta humana" . Ácidos nucleicos Res . 36 (16): 5166–79. doi : 10.1093 / nar / gkn498 . PMC 2532730 . PMID 18682526 .
- ^ a b Gray MD, Shen JC, Kamath-Loeb AS, Blank A, Sopher BL, Martin GM, Oshima J, Loeb LA (septiembre de 1997). "La proteína del síndrome de Werner es una helicasa de ADN". Nat. Genet . 17 (1): 100–3. doi : 10.1038 / ng0997-100 . PMID 9288107 .
- ^ a b Kitao S, Shimamoto A, Goto M, Miller RW, Smithson WA, Lindor NM, Furuichi Y (mayo de 1999). "Las mutaciones en RECQL4 causan un subconjunto de casos de síndrome de Rothmund-Thomson". Nat. Genet . 22 (1): 82–4. doi : 10.1038 / 8788 . PMID 10319867 .
- ^ Lorenz A, Osman F, Sun W, Nandi S, Steinacher R, Whitby MC (junio de 2012). "El ortólogo FANCM de levadura de fisión dirige la recombinación no cruzada durante la meiosis" . Ciencia . 336 (6088): 1585–8. Código Bibliográfico : 2012Sci ... 336.1585L . doi : 10.1126 / science.1220111 . PMC 3399777 . PMID 22723423 .
- ^ Lorenz A, Mehats A, Osman F, Whitby MC (diciembre de 2014). "Paralogs Rad51 / Dmc1 y mediadores se oponen a las helicasas de ADN para limitar la formación de ADN híbrido y promover cruces durante la recombinación meiótica" . Ácidos nucleicos Res . 42 (22): 13723–35. doi : 10.1093 / nar / gku1219 . PMC 4267644 . PMID 25414342 .
- ^ a b Séguéla-Arnaud M, Crismani W, Larchevêque C, Mazel J, Froger N, Choinard S, Lemhemdi A, Macaisne N, Van Leene J, Gevaert K, De Jaeger G, Chelysheva L, Mercier R (abril de 2015). "Múltiples mecanismos limitan los cruces meióticos: TOP3α y dos homólogos de BLM antagonizan los cruces en paralelo a FANCM" . Proc. Natl. Acad. Sci. USA . 112 (15): 4713–8. Código Bibliográfico : 2015PNAS..112.4713S . doi : 10.1073 / pnas.1423107112 . PMC 4403193 . PMID 25825745 .
- ^ a b c d Jankowsky, A .; Guenther, U. -P .; Jankowsky, E. (2010). "La base de datos de ARN helicasa" . Investigación de ácidos nucleicos . 39 (Problema de la base de datos): D338 – D341. doi : 10.1093 / nar / gkq1002 . PMC 3013637 . PMID 21112871 .
- ^ Jankowsky E, Fairman-Williams ME (2010). "Una introducción a las helicasas de ARN: superfamilias, familias y temas principales". En Jankowsky E (ed.). ARN Helicasas (RSC Biomolecular Sciences) . Cambridge, Inglaterra: Royal Society of Chemistry. pag. 5. ISBN 978-1-84755-914-2.
- ^ Ranji, A .; Boris-Lawrie, K. (2010). "ARN helicasas: roles emergentes en la replicación viral y la respuesta innata del anfitrión" . Biología del ARN . 7 (6): 775–787. doi : 10.4161 / rna.7.6.14249 . PMC 3073335 . PMID 21173576 .
- ^ Jankowsky E (enero de 2011). "ARN helicasas en el trabajo: unión y reordenamiento" . Trends Biochem. Sci . 36 (1): 19-29. doi : 10.1016 / j.tibs.2010.07.008 . PMC 3017212 . PMID 20813532 .
- ^ Yang Q, Del Campo M, Lambowitz AM, Jankowsky E (octubre de 2007). "Las proteínas DEAD-box desenrollan los dúplex mediante la separación de la cadena local". Mol. Celular . 28 (2): 253–63. doi : 10.1016 / j.molcel.2007.08.016 . PMID 17964264 .
- ^ Liu F, Putnam A, Jankowsky E (diciembre de 2008). "La hidrólisis de ATP es necesaria para el reciclaje de proteínas de la caja DEAD, pero no para el desenrollado dúplex" . Proc. Natl. Acad. Sci. USA . 105 (51): 20209–14. Código bibliográfico : 2008PNAS..10520209L . doi : 10.1073 / pnas.0811115106 . PMC 2629341 . PMID 19088201 .
- ^ Jarmoskaite I, Russell R (2011). "Proteínas de caja MUERTA como helicasas y chaperonas de ARN" . Wiley Interdiscip Rev RNA . 2 (1): 135–52. doi : 10.1002 / wrna.50 . PMC 3032546 . PMID 21297876 .
- ^ "Índice de /" . www.rnahelicase.org . Archivado desde el original el 18 de diciembre de 2014 . Consultado el 7 de diciembre de 2012 .
- ^ Matson SW, Tabor S, Richardson CC (noviembre de 1983). "La proteína del gen 4 del bacteriófago T7. Caracterización de la actividad helicasa". J. Biol. Chem . 258 (22): 14017–24. PMID 6315716 .
- ^ Sarlós K, Gyimesi M, Kovács M (junio de 2012). "RecQ helicasa transloca a lo largo de ADN monocatenario con una procesividad moderada y acoplamiento mecanoquímico estrecho" . Proc. Natl. Acad. Sci. USA . 109 (25): 9804–9. Código bibliográfico : 2012PNAS..109.9804S . doi : 10.1073 / pnas.1114468109 . PMC 3382518 . PMID 22665805 .
- ^ Pavankumar, TL; Exell, JC; Kowalczykowski, SC (1 de enero de 2016). Capítulo uno - Imágenes fluorescentes directas de la translocación y el desenrollado por ADN helicoidales individuales . Métodos en enzimología . 581 . págs. 1–32. doi : 10.1016 / bs.mie.2016.09.010 . ISBN 9780128092675. PMC 5854184 . PMID 27793277 .
- ^ Borowiec, J. (1996) Replicación del ADN en células eucariotas. Prensa de laboratorio Cold Spring Harbor, Cold Spring Harbor, Nueva York. 545–574
enlaces externos
- DNA + Helicases en los encabezados de temas médicos (MeSH) de la Biblioteca Nacional de Medicina de EE. UU .
- ARN + Helicasas en los encabezados de temas médicos (MeSH) de la Biblioteca Nacional de Medicina de EE. UU .