Una aguja de inoculación es un equipo de laboratorio utilizado en el campo de la microbiología para transferir e inocular microorganismos vivos . [1] Es una de las herramientas de laboratorio biológico más comúnmente implicadas y puede ser desechable o reutilizable. [1] Una aguja de inoculación reutilizable estándar está hecha de alambre de nicrom o platino fijado a un mango metálico. [2] [3] Una aguja de inoculación desechable suele estar hecha de resina plástica. La base de la aguja está desafilada, lo que resulta en un extremo desafilado. [2] [3]
Usos
Las agujas de inoculación se aplican principalmente en microbiología para estudiar bacterias y hongos en medios semisólidos. La biotecnología , la biología celular y la inmunología también pueden utilizar métodos de cultivo orientados con agujas. [2] [4] [5]
La aplicación de agujas de inoculación se centra en la inoculación y aislamiento de regiones muy definidas de los cultivos y los requisitos de mínima perturbación entre dos colonias microbianas muy pobladas. [5] También se puede utilizar para arponear bajo un microscopio de bajo aumento . [6]
El rayado en placas de rayas , la inoculación de la cola de pez de los cultivos inclinados y la inoculación de los cultivos de punción se pueden realizar con la aguja de inoculación. [1] [7] Los cultivos de apuñalamiento requieren específicamente la aguja de inoculación y se utilizan para estudiar la motilidad celular, los requisitos microbianos de oxígeno mediante cultivos de tioglicolato y la licuefacción de gelatina de bacterias. [2] [3] [4]
Operación
Esterilización
La aguja de inoculación se esteriliza mediante la técnica aséptica . [1] [2] [3] [7] Se usa una llama abierta de un incinerador, un mechero Bunsen o un mechero de alcohol para encender a lo largo de la punta y la longitud de la aguja que va a estar en contacto con el inóculo . [2] [3] Para facilitar la manipulación, es una práctica común sostener la aguja con la mano dominante como si estuviera manejando un lápiz. La aguja se flameará en un ángulo hacia abajo a través del cono interior de la llama hasta que esté al rojo vivo. [1] El ángulo hacia abajo minimizará la cantidad de aerosoles microbianos creados. [1] [2] [3]
Las agujas de inoculación deben esterilizarse antes y después del contacto con formas de vida microbiana para garantizar que no se contaminen el cultivo, los medios estériles y el entorno circundante. [1]
Transferir
En la inoculación, la aguja de inoculación se emplea en primer lugar para transferir formas de vida microbiana de un cultivo a la aguja para su uso en procedimientos de inoculación adicionales. Las fuentes de inóculo incluyen cultivos en caldo, cultivos inclinados y cultivos en placa. [1] [2] [3] [5]
- Cultivo de caldo
Se usa una aguja de inoculación en la transferencia de microorganismos de un caldo de cultivo empleando primero un mezclador de vórtice para asegurar una suspensión uniforme de los microorganismos dentro del caldo. [1] Luego se aplica una técnica aséptica a la aguja. Una vez que la aguja esté flameada y esterilizada, la mano de la aguja quitará la tapa del caldo de cultivo. Se flameará el extremo abierto del cultivo de caldo para reducir el riesgo de contaminación y la creación de aerosoles. [2] [3]
Mientras se mantiene una posición fija de la aguja, el caldo de cultivo se moverá hacia arriba por la aguja hasta que se sumerja la punta de la aguja. [3] Durante la extracción del cultivo del caldo, la aguja y la mano de la aguja no deben moverse para evitar una acción de salto. [3] [5] La transferencia del caldo a la aguja concluye con flamear el extremo abierto del cultivo del caldo y el cierre de la tapa mientras se mantiene la mano de la aguja inmóvil.
- Cultura inclinada
En la transferencia de cultivo inclinado, la aguja de inoculación se tratará primero con la técnica aséptica mediante llama. A continuación, se retira el tapón de cultivo inclinado y se asegura con la mano de la aguja. Llamar al extremo abierto del cultivo inclinado evitará la contaminación y la formación de aerosoles. [2] [3]
La transferencia ocurre una vez que la punta de la aguja de inoculación entra en contacto con la superficie de agar del cultivo inclinado. La aguja de inoculación no debe moverse en el proceso. El cultivo inclinado de agar se moverá hacia la aguja para evitar empujones de la aguja. [1] [3] Una vez que se complete la transferencia del cultivo inclinado a la aguja, el extremo abierto del cultivo se tratará con llama y se volverá a colocar la tapa.
- Cultivo en placa
Se utiliza una aguja de inoculación en la transferencia de organismos microbianos del cultivo en placa a la aguja esterilizando primero la aguja para evitar contaminantes. A continuación, se retira la tapa del cultivo en placa de agar para permitir que la aguja acceda a los microorganismos cultivados en la placa de agar. La tapa se mantiene suspendida sobre la placa de cultivo para evitar la contaminación del entorno circundante. [1]
La aguja de inoculación después de la incineración se enfría en una región sin inocular del cultivo en placa de agar. [1] Demasiado calor matará el inóculo durante el contacto directo de una aguja de inoculación flameada. [1] La aguja de inoculación se retira del cultivo de agar después de obtener una pequeña colonia y luego se vuelve a colocar la tapa de la placa de agar.
Inoculación
La inoculación de los microorganismos se realizará directamente después de la transferencia del cultivo a la aguja de inoculación. El inóculo se suele inocular en cultivos de caldo, cultivos inclinados, cultivos en placa y cultivos por punción. [1] [2] [3] [4] [5] [7]
- Cultivo de caldo
Se utiliza una aguja de inoculación para inocular un caldo de cultivo estéril. Llamar el extremo abierto del caldo lo mantendrá estéril. El caldo se moverá hacia la aguja para que la punta de la aguja quede sumergida mientras se mantiene la posición original de la aguja. [1] El giro cuidadoso de la aguja puede ayudar a la inoculación del microorganismo desde la aguja hasta el caldo estéril. [1]
A continuación, se extrae de la aguja el caldo de cultivo inoculado. Se aplica una técnica aséptica al extremo abierto del caldo de cultivo para evitar contaminantes y la aguja se quema para esterilizarla.
- Cultura inclinada
Se utiliza una aguja de inoculación para inocular un cultivo inclinado en una técnica de inoculación de cola de pez. [1] Después de que los microorganismos se transfieren del cultivo microbiano original a la aguja de inoculación, se destapa el cultivo inclinado estéril. A continuación, se quema el extremo abierto del cultivo inclinado descubierto. La inclinación se colocará para subir la aguja hasta que la punta de la aguja de inoculación entre en contacto levemente con la superficie de la base del medio estéril. [1] [2] [4] La aguja de inoculación inocula el agar estéril mediante la manipulación del medio de modo que la punta de la aguja roce la superficie del agar en un patrón de zigzag. [1] Luego se aplica una técnica aséptica a la aguja de inoculación retirada.
- Cultivo en placa
La inoculación de un cultivo en placa se realiza mediante la técnica de rayado para hacer una placa de rayado . [1] [2] [4] Después de levantar la tapa de modo que quede suspendida sobre la placa de agar estéril, la aguja de inoculación pasará por la placa en direcciones controladas. [1] Se pueden crear aerosoles microbianos al golpear la punta de inoculación contra los lados de la placa de agar. [1] [2] [4] A continuación, se retira la aguja de inoculación del cultivo en placa de agar inoculado y se quema.
- Cultura de puñaladas
Una aguja de inoculación es una herramienta esencial para inocular un cultivo por punción. [4] [7] Se quita un tapón de cultivo de punción estéril y se quema el extremo abierto. Luego, la punta de la aguja y su longitud se empujan hacia el medio de corte y se detiene una vez que la punta de la aguja llega a 0,5 pulgadas de la parte inferior del medio de corte. [7] La aguja de inoculación se retira del medio en la misma dirección y trayectoria en la que se empujó hacia el medio de apuñalamiento para evitar el efecto de oscilación que puede perturbar el cultivo. [4] [7] La aguja se esteriliza mediante llama.
Ver también
- Bucle de inoculación
- Rayado (microbiología)
- Cultivo microbiológico
Galería
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Referencias
- ^ a b c d e f g h i j k l m n o p q r s t u v MÉTODOS DE INOCULACIÓN Y TRANSFERENCIAS ASÉPTICAS COMUNES . págs. 4–8.
- ^ a b c d e f g h yo j k l m n Dubey, RC (2014). Práctico para la Clase XI (2 ed.). Publicaciones de S. Chand. ISBN 978-81-219-2417-7.
- ^ a b c d e f g h yo j k l m Maheshwari, DK (2002). Laboratorio de microbiología: reglas y requisitos básicos (2 ed.). Publicaciones de S. Chand. pag. 6.
- ^ a b c d e f g h Parija, Subhash Chandra (2012). Libro de texto de microbiología e inmunología (2 ed.). Elsevier. pag. 38. ISBN 978-81-312-2810-4.
- ^ a b c d e "Muestreo e Inoculación" . Manual de laboratorio de biología celular . Manual y guía de seguridad del laboratorio de biología celular de Hendrix College . Consultado el 28 de octubre de 2016 .
- ^ Ørskov, J. (17 de enero de 1992). "Método para el aislamiento de bacterias en cultivo puro a partir de células individuales y procedimiento para el rastreo directo del crecimiento bacteriano en un medio sólido". Revista de bacteriología . 7 (6): 547–548.
- ^ a b c d e f Introducción a la microbiología . Colección American Type Culture. 2015. págs. 10-11, 26, 28, 30-31.