La etiqueta NE es una etiqueta de péptido sintético (etiqueta NE) diseñada como una etiqueta de epítopo para la detección, cuantificación y purificación de proteínas recombinantes. Esta secuencia de péptidos patentada está compuesta por dieciocho aminoácidos hidrofílicos . Este péptido corto no adopta ninguna homología significativa con ninguna proteína existente que se encuentre en la naturaleza. Este péptido NE sintético adopta una conformación de espiral aleatoria y muestra una fuerte inmunogenicidad (predicción computacional). Esto es ventajoso para ofrecer una rigurosa especificidad a las proteínas marcadas con NE, que se pueden detectar, cuantificar y purificar fácilmente. [1]
Detección
La etiqueta NE se puede detectar específicamente usando un anticuerpo de detección anti-NE monoclonal, una inmunoglobulina de ratón purificada por afinidad, IgG1, que se une específicamente a proteínas etiquetadas con NE. Esta conjugación de péptido a anticuerpo está validada en transferencia Western , inmunoprecipitación (IP), inmunocitoquímica (IHC) y purificación por afinidad de proteínas de fusión NE (es decir, columna de afinidad). [2] [3]
Secuencias
- La secuencia de ADN de la etiqueta NE es la siguiente: 5 'ACC AAA gAA AAC CCg CgT AgC AAC Cag gAA gAA AgC TAT gAT gAT AAC gAA AgC 3'
- La secuencia de aminoácidos correspondiente es: TKENPRSNQEESYDDNES (Thr-Lys-Glu-Asn-Pro-Arg-Ser-Asn-Gln-Glu-Glu-Ser-Tyr-Asp-Asp-Asn-Glu-Ser)
Patentes
Referencias
- ^ Ho, Philip WL .; Tse, Zero HM .; Liu, HF .; Lu, S .; Ho, Jessica WM .; Kung, Michelle HW .; Ramsden, David B .; Ho, SL. (2013). "Evaluación de la actividad estrogénica celular basada en la reducción mediada por el receptor de estrógeno de la expresión de la catecol-O-metiltransferasa (COMT) de forma soluble en un sistema basado en ELISA" . PLoS ONE . 8 (9): e74065. doi : 10.1371 / journal.pone.0074065 . PMC 3765251 . PMID 24040167 .
- ^ Tse, HF .; Ho, JC .; Choi, SW .; Lee, YK .; Butler, AW .; Ng, KM .; Siu, CW .; Simpson, MA .; Lai, WH .; Chan, YC .; Au, KW .; Zhang, J .; Lay, KW .; Esteban, MA .; Nicholls, JM .; Colman, A .; Sham, PC. (2013). "Los cardiomiocitos derivados de células madre pluripotentes inducidas específicos del paciente recapitulan los fenotipos patógenos de la miocardiopatía dilatada debido a una nueva mutación DES identificada por secuenciación del exoma completo" . Genética molecular humana . 22 (7): 1395–1403. doi : 10.1093 / hmg / dds556 . PMID 23300193 .
- ^ Xu, EG .; Ho, Philip WL .; Tse, Zero HM .; Ho, SL .; Leung, KM. (2016). "Revelar los riesgos ecológicos de los productos químicos disruptores endocrinos prioritarios en cuatro áreas marinas protegidas en Hong Kong a través de un enfoque integrador". Contaminación ambiental . 215 : 103-112. doi : 10.1016 / j.envpol.2016.04.090 . PMID 27179329 .