Un portaobjetos de nitrocelulosa (o portaobjetos de película de nitrocelulosa ) es un portaobjetos de microscopio de vidrio recubierto con nitrocelulosa que se utiliza para unir material biológico, a menudo proteínas , para ensayos colorimétricos y de detección de fluorescencia. Para este propósito, un portaobjetos de nitrocelulosa generalmente se considera superior al vidrio, porque se une a muchas más proteínas y protege la estructura terciaria de la proteína (y otro material biológico, es decir, las células). Por lo general, los portaobjetos de nitrocelulosa tienen una película delgada y opaca de nitrocelulosa en un portaobjetos de microscopio de vidrio estándar de 25 mm × 75 mm. La película es extremadamente sensible al contacto y a materiales extraños; el contacto provoca deformaciones y depósitos de material, especialmente líquidos. [ cita requerida ]
Un portaobjetos de nitrocelulosa es diferente de una membrana de nitrocelulosa, que generalmente filtra la proteína de la solución (es decir, pruebas de embarazo en el consultorio del médico ), pero tiene un objetivo similar: detectar la presencia y / o el nivel de concentración de cierto material biológico.
Microarrays
Los portaobjetos de nitrocelulosa se utilizan principalmente en proteómica para realizar microarrays de proteínas con sistemas automatizados que imprimen los portaobjetos y registran los resultados. También son posibles con el portaobjetos micromatrices de analitos celulares, matrices de lisado celular , micromatrices de anticuerpos , impresión de tejidos, [1] [2] inmunoarrays, etc.
Fluorescencia de nitrocelulosa
Debido a su alta rugosidad superficial, las películas de nitrocelulosa blancas convencionales se dispersan y reflejan grandes cantidades de luz de excitación y emisión durante la detección de fluorescencia en el escáner de microarrays. Además, la nitrocelulosa exhibe una autofluorescencia natural en las longitudes de onda de detección comúnmente utilizadas. [3] Ambos factores conducen a una alta señal fluorescente de fondo de estos portaobjetos de membrana. Para superar este problema, se ha desarrollado un nuevo proceso para generar membranas negras que absorben la luz dispersa, reduciendo significativamente la autofluorescencia de fondo y ofreciendo así una autofluorescencia muy baja y homogénea para lograr un rango dinámico significativamente mejorado. [4] Estos portaobjetos están disponibles comercialmente a través de Schott AG . [5] No obstante, las películas de nitrocelulosa blancas convencionales continúan siendo la superficie dominante para muchas aplicaciones de micromatrices de proteínas porque las afirmaciones anteriores no han demostrado ser relevantes para los requisitos del usuario final. Independientemente, los fabricantes de portaobjetos de nitrocelulosa como Grace Bio-Labs continúan desarrollando nuevas superficies de nitrocelulosa para optimizar aún más su uso en microarrays de proteínas.
Un método para la cuantificación de proteínas en portaobjetos de vidrio recubiertos de nitrocelulosa utiliza detección fluorescente de infrarrojo cercano con puntos cuánticos . La señal de nitrocelulosa porosa tradicional al ruido está limitada por la autofluorescencia de la nitrocelulosa en las respectivas longitudes de onda requeridas de excitación y emisión para sondas de detección de fluorescencia orgánica estándar. Las sondas de detección de infrarrojos cercanos se excitan y leen en longitudes de onda de emisión fuera del rango de fluorescencia de nitrocelulosa. [6]
Referencias
- ^ McGrath CM, Grudzien JL, Decker DA, Robbins TO (septiembre de 1991). "Transferencia citométricamente coherente de proteínas receptoras en membranas microporosas". BioTechniques . 11 (3): 352–4, 356, 358–61. PMID 1718329 .
- ^ McGrath CM, Grudzien JL, Levine AJ (1995). "Análisis de células de alta definición in situ utilizando películas microporosas". Visión celular . 11 (3): 499–509. ISSN 1073-1180 .
- ^ Sauer, Úrsula (2011). "Impacto de los sustratos para la inmovilización de la sonda". Microarrays de proteínas . Métodos en Biología Molecular. 785 . págs. 363–378. doi : 10.1007 / 978-1-61779-286-1_24 . ISBN 978-1-61779-285-4. ISSN 1064-3745 .
- ^ Hollas, M; Jallerat, E; Pflanz, K; Praulich, yo; Walter, J; Stahl, F; Scheper, T (2006). "Nuevo sustrato negro 3D para microarrays de proteínas con rango dinámico mejorado". Desalación . 199 (1-3): 230. doi : 10.1016 / j.desal.2006.03.055 .
- ^ "SCHOTT se asocia con Sartorius Stedim Biotech para desarrollar una nueva gama de portaobjetos recubiertos de nitrocelulosa para micromatrices de proteínas" (PDF) . El boletín de Nexterion . 3 : 4-5. Septiembre de 2007.[ fuente autoeditada? ]
- ^ Marie ‐ Laure Schneider, Adriana Marquez‐ Lagraulet, Richard Pasquesi, Michael Shultz - (2014), "La detección infrarroja disminuye la autofluorescencia de nitrocelulosa y mejora la relación señal-ruido de los ensayos RPPA sobre la detección de longitud de onda visible", Innopsys Inc. Chicago, Illinois , [ fuente autoeditada? ]