La resazurina (7-hidroxi- 3H -fenoxazin-3-ona 10-óxido) es un tinte de fenoxazina que es débilmente fluorescente , no tóxico , permeable a las células y sensible a la oxidación. [2] [3] resazurina tiene un azul a púrpura de color (a pH > 6,5) y se utiliza en microbiológicos , celulares y enzimáticos ensayos ya que puede ser irreversible reduce a la rosa -colored y altamente fluorescente resorufina (7-hidroxi- 3 H -fenoxazin-3-ona). A pH circunneutral, la resorufina puede detectarse por observación visual de su color rosa o por fluorimetría , con un máximo de excitación a 530-570 nm y un máximo de emisión a 580-590 nm. [4]
Nombres | |
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Nombre IUPAC 7-hidroxi-10-oxidofenoxazin-10-io-3-ona | |
Otros nombres Alamar Blue, Vybrant, UptiBlue, diazorresorcinol, azoresorcina, resazoína, resazurina | |
Identificadores | |
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Modelo 3D ( JSmol ) | |
CHEMBL | |
ChemSpider | |
Tarjeta de información ECHA | 100.008.171 |
PubChem CID | |
UNII | |
Tablero CompTox ( EPA ) | |
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Propiedades | |
Fórmula química | C 12 H 7 N O 4 |
Masa molar | 229,191 g · mol −1 |
solubilidad en agua | soluble |
Peligros | |
Pictogramas GHS | |
Palabra de señal GHS | Advertencia |
Declaraciones de peligro GHS | H315 , H319 , H335 |
Consejos de prudencia del SGA | P261 , P305 + 351 + 338 |
NFPA 704 (diamante de fuego) | 2 1 0 |
Salvo que se indique lo contrario, los datos se proporcionan para materiales en su estado estándar (a 25 ° C [77 ° F], 100 kPa). | |
verificar ( ¿qué es ?) | |
Referencias de Infobox | |
Cuando una solución que contiene resorufina se somete a condiciones reductoras (E h <-110 mV), casi toda la resorufina se reduce reversiblemente a la dihidroresorufina translúcida no fluorescente ( hidrorresorufina sin.) Y la solución se vuelve translúcida (el potencial redox de la resorufina / el par de dihidrorresorufina es de -51 mV frente al electrodo de hidrógeno estándar a pH 7,0). Cuando aumenta la E h de esta misma solución, la dihidroresorufina se oxida de nuevo a resorufina, y esta reacción reversible se puede utilizar para controlar si el potencial redox de un medio de cultivo permanece en un nivel suficientemente bajo para los organismos anaeróbicos .
Resazurina ( indicador de pH ) | ||
por debajo de pH 6.5 | por encima de pH 6.5 | |
6.5 | ⇌ | 6.5 |
La solución de resazurina tiene uno de los valores más altos conocidos del índice de dicromaticidad de Kreft . [5] Esto significa que tiene un gran cambio en el tono de color percibido cuando el grosor o la concentración de la muestra observada aumenta o disminuye.
Normalmente, la resazurina está disponible comercialmente como sal de sodio .
Aplicaciones de viabilidad celular
La resazurina se reduce a resorufina mediante la respiración aeróbica de las células metabólicamente activas y puede utilizarse como indicador de la viabilidad celular. Fue utilizado por primera vez para cuantificar el contenido bacteriano en la leche por Pesch y Simmert en 1929. [6] Puede utilizarse para detectar la presencia de células viables en cultivos de células de mamíferos. [7] Se introdujo comercialmente inicialmente bajo la marca registrada Alamar Blue (Trek Diagnostic Systems, Inc), y ahora también disponible bajo otros nombres tales como ensayo de AB, Vybrant ( Molecular Sondas ) y UptiBlue ( Interchim ).
Ensayos basados resazurina muestran una excelente correlación con los ensayos de viabilidad de referencia tal como formazán ensayos basados en ( MTT / XTT) y técnicas basadas timidina tritiada. [8] La baja toxicidad lo hace adecuado para estudios más largos, y se ha aplicado a células animales, bacterias y hongos [8] para ensayos de cultivo celular como el recuento celular, la supervivencia celular y la proliferación celular . [9]
Para reemplazar un ensayo estándar vivo / muerto, la resazurina también puede multiplexarse con ensayos quimioluminiscentes, tales como ensayos de citocinas, ensayos de caspasa para medir la apoptosis o ensayos informadores para medir la expresión de un gen o una proteína. [8]
La reacción irreversible de la resazurina a la resorufina es proporcional a la respiración aeróbica. [10]
Resazurina como ensayo colorimétrico para la viabilidad celular
Resazurina utilizada como ensayo fluorescente para la viabilidad celular: la resazurina no emite fluorescencia cuando se expone a la luz verde
Resazurina como ensayo fluorescente para la viabilidad celular: la resorufina emite fluorescencia cuando se expone a la luz verde
Otras aplicaciones
La resazurina se reduce eficazmente en las mitocondrias , lo que la hace útil también para evaluar la actividad metabólica mitocondrial .
Por lo general, en presencia de NADPH deshidrogenasa o NADH deshidrogenasa como enzima, NADPH o NADH es el reductor que convierte la resazurina en resorufina. Por lo tanto, el sistema resazurina / diaforasa / NADPH puede usarse para detectar NADH, NADPH o nivel de diaforasa, y cualquier actividad bioquímica o enzimática que esté involucrada en una reacción bioquímica que genere NADH o NADPH. [11] [12] [13] [14] [15]
La resazurina se puede utilizar para analizar el L-glutamato , logrando una sensibilidad de 2,0 pmol por pocillo en una placa de 96 pocillos. [dieciséis]
La resazurina también se puede utilizar para medir la biodegradación aeróbica de la materia orgánica que se encuentra en los efluentes. [17]
La resazurina se usa para medir la cantidad de respiración aeróbica en los arroyos [18] Dado que la mayor parte de la respiración aeróbica ocurre en el lecho del arroyo, la conversión de resazurina en resorufina también es una medida de la cantidad de intercambio entre la columna de agua y el lecho del arroyo.
Síntesis
La resazurina se prepara mediante condensación catalizada por ácido entre resorcinol y 4-nitrosoresorcinol seguida de oxidación del intermedio con óxido de manganeso (IV) :
El tratamiento del producto de reacción crudo con un exceso de carbonato de sodio produce la sal de sodio de resazurina, que es típicamente la forma comercial del tinte. Es posible ejecutar la etapa de condensación en alcoholes pero da como resultado rendimientos más bajos del producto; en agua pura o ácido acético, la reacción no prosigue satisfactoriamente. [19]
Tintes relacionados
La 10-acetil-3,7-dihidroxifenoxazina (también conocida como Amplex Red), estructuralmente relacionada con la resazurina, reacciona con H 2 O 2 en una estequiometría 1: 1 para producir el mismo subproducto resorufina (utilizado en muchos ensayos que combinan, por ejemplo, peroxidasa de rábano picante (HRP), o NADH, NADPH usando enzimas). [20] [21]
7-etoxiresorufina , un compuesto utilizado como sustrato en la medición de la inducción del citocromo P450 ( CYP1A1 ) utilizando el sistema de ensayo de etoxiresorufina-O-deetilasa (EROD) en cultivos celulares y muestras ambientales, producido en respuesta a la exposición a hidrocarburos arílicos . El compuesto es catalizado por la enzima para producir el mismo producto fluorescente, resorufina. [22] [23]
1,3-dicloro-7-hidroxi-9,9-dimetilacridin-2 (9 H ) -ona (colorante DDAO), un colorante fluorescente utilizado para el marcaje de oligonucleótidos. [24]
Referencias
- ^ "Resazurina | C12H7NO4 | ChemSpider" .
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