Un fragmento de restricción es un fragmento de ADN resultante del corte de una hebra de ADN por una enzima de restricción (endonucleasas de restricción), un proceso llamado restricción. [1] Cada enzima de restricción es altamente específica, reconoce una secuencia de ADN corta particular, o sitio de restricción, y corta ambas cadenas de ADN en puntos específicos dentro de este sitio. La mayoría de los sitios de restricción son palindrómicos (la secuencia de nucleótidos es la misma en ambas cadenas cuando se lee en la dirección 5 'a 3' de cada cadena) y son de cuatro a ocho nucleótidoslargo. Una enzima de restricción realiza muchos cortes debido a la repetición aleatoria de estas secuencias en una molécula de ADN larga, lo que produce un conjunto de fragmentos de restricción. Una molécula de ADN en particular siempre producirá el mismo conjunto de fragmentos de restricción cuando se exponga a la misma enzima de restricción. Los fragmentos de restricción se pueden analizar usando técnicas tales como electroforesis en gel o usarse en tecnología de ADN recombinante . [2]
Aplicaciones
En la tecnología de ADN recombinante, se utilizan endonucleasas de restricción específicas que aislarán un gen en particular y escindirán las cadenas principales de fosfato de azúcar en diferentes puntos (conservando la simetría), de modo que los fragmentos de restricción bicatenarios tengan extremos monocatenarios. Estas extensiones cortas, llamadas extremos pegajosos , pueden formar pares de bases con enlaces de hidrógeno con extremos pegajosos complementarios en cualquier otro ADN cortado con la misma enzima (como un plásmido bacteriano).
En la electroforesis en gel de agarosa , los fragmentos de restricción producen un patrón de bandas característico de la molécula de ADN original y la enzima de restricción utilizada, por ejemplo, las moléculas de ADN relativamente pequeñas de virus y plásmidos pueden identificarse simplemente por sus patrones de fragmentos de restricción. Si las diferencias de nucleótidos de dos alelos diferentes ocurren dentro del sitio de restricción de una enzima de restricción particular, la digestión de segmentos de ADN de individuos con alelos diferentes para ese gen en particular con esa enzima produciría fragmentos diferentes y cada uno produciría patrones de bandas diferentes en el gel. electroforesis.
Referencias
- ^ Roberts, RJ (2005). "Cómo las enzimas de restricción se convirtieron en los caballos de batalla de la biología molecular" . Actas de la Academia Nacional de Ciencias . 102 (17): 5905–5908. doi : 10.1073 / pnas.0500923102 . PMC 1087929 . PMID 15840723 .
- ^ Campbell, Neil A .; Jane B. Reece (2005). Biología (Séptima ed.). Benjamin Cummins. ISBN 0-8053-7171-0.