La espectroscopia optimizada de relajación transversal (TROSY) es un experimento en espectroscopia de RMN de proteínas que permite estudios de grandes moléculas o complejos.
La aplicación de RMN a moléculas grandes normalmente está limitada por el hecho de que los anchos de línea generalmente aumentan con la masa molecular . Las moléculas más grandes tienen tiempos de correlación rotacional más largos y, en consecuencia, tiempos de relajación transversal más cortos (T 2 ). En otras palabras, la señal de RMN de moléculas más grandes decae más rápidamente, lo que provoca un ensanchamiento de líneas en el espectro de RMN y una resolución deficiente .
En una HSQC espectro en el que la disociación no se ha aplicado, los picos aparecen como multipletes debido a J-acoplamiento . Fundamentalmente, los diferentes componentes del multiplete tienen diferentes anchos. Esto se debe a la interacción constructiva o destructiva entre diferentes mecanismos de relajación . Por lo general, para proteínas grandes con altas intensidades de campo magnético , la relajación transversal (T 2 ) está dominada por el mecanismo dipolo-dipolo (DD) y el cambio químicomecanismo de anisotropía (CSA). Como los mecanismos de relajación están generalmente correlacionados pero contribuyen a la tasa de relajación general de un componente dado con diferentes signos, los componentes del multiplete se relajan con tasas generales muy diferentes. El experimento TROSY [1] está diseñado para seleccionar el componente para el cual los diferentes mecanismos de relajación casi se han cancelado, lo que lleva a un pico único y agudo en el espectro. Esto aumenta significativamente tanto la resolución espectral como la sensibilidad, las cuales son muy importantes cuando se estudian biomoléculas grandes y complejas.
Este enfoque amplía significativamente el rango de masa molecular que puede ser estudiado por RMN, pero generalmente requiere campos magnéticos altos para lograr el equilibrio necesario entre los mecanismos de relajación CSA y DD; Los CSA escalan con la intensidad de campo, mientras que los acoplamientos dipolo-dipolo son independientes del campo.
Referencias
- ^ K. Pervushin, R. Riek, G. Wider y K. Wüthrich (1997). La relajación de T 2 atenuada por la cancelación mutua del acoplamiento dipolo-dipolo y la anisotropía de desplazamiento químico indica una vía hacia estructuras de RMN de macromoléculas biológicas muy grandes en solución. Proc. Natl. Acad. Sci. EE. UU. 94 12366-71 doi : 10.1073 / pnas.94.23.12366 PMID 9356455