La familia de tintes fluorescentes Alexa Fluor es una serie de tintes inventados por Molecular Probes , ahora parte de Thermo Fisher Scientific , y vendidos bajo la marca Invitrogen. Los tintes Alexa Fluor se utilizan con frecuencia como marcadores de células y tejidos en microscopía de fluorescencia y biología celular . [1] Los tintes Alexa Fluor se pueden conjugar directamente con anticuerpos primarios o secundarios para amplificar la señal y la sensibilidad [2] u otras biomoléculas. [ cita requerida ]
Los espectros de excitación y emisión de la serie Alexa Fluor cubren el espectro visible y se extienden al infrarrojo . [3] Los miembros individuales de la familia se numeran aproximadamente de acuerdo con sus máximos de excitación en nanómetros .
Historia
Richard y Rosaria Haugland , los fundadores de Molecular Probes , son bien conocidos en biología y química por su investigación sobre tintes fluorescentes útiles en aplicaciones de investigación biológica. [ según quién? ] En el momento en que se fundó Molecular Probes, [ ¿cuándo? ] estos productos no estaban disponibles comercialmente en gran medida. [ cita requerida ] Una serie de tintes fluorescentes que ahora se utilizan ampliamente fueron descubiertos y desarrollados en los laboratorios de Molecular Probes. [ cita requerida ] - tintes como Texas Red , Cascade Blue, Oregon Green, Marina Blue y la familia Alexa Fluor. [ cita requerida ] El más famoso de estos, la familia de tintes Alexa Fluor, [¿ según quién? ] fueron diseñados para mejorar las propiedades de familias de tintes fluorescentes biológicos previamente desarrolladas y resolver algunos de los problemas que tenían. [ cita requerida ] Los tintes Alexa Fluor fueron nombrados en honor a Alex Haugland, hijo de Richard y Rosaria Haugland. [ cita requerida ]
Molecular Probes fue adquirido en 2003 por Invitrogen , [4] quien trabajó para expandir aún más la familia Alexa Fluor mediante la adición de nuevos tintes para llenar los huecos no cubiertos en el espectro de emisión. [ cita requerida ] En 2008, Invitrogen y la línea de productos Alexa Fluor se convirtieron en parte de Life Technologies , después de la fusión de Invitrogen con Applied Biosystems . [ cita requerida ] En 2014, Life Technologies fue adquirida por Thermo Fisher Scientific , quien revitalizó el nombre y la marca Invitrogen , trayendo nuevamente la línea de productos Alexa Fluor. [ cita requerida ]
Tintes y química
Los tintes Alexa Fluor se sintetizaron químicamente mediante sulfonación y modificaciones químicas adicionales realizadas en las conocidas familias de tintes cumarina , rodamina y cianina , y en la familia de los xantenos (de la que forma parte la fluoresceína , un estándar de la industria ). [ cita requerida ] La sulfonación hizo que los tintes Alexa Fluor del producto estuvieran cargados negativamente y, por lo tanto, más hidrófilos y solubles que sus tintes originales; [ cita requerida ] las modificaciones adicionales tenían como objetivo mejorar el rendimiento del tinte en otras áreas. [ cita requerida ] Por ejemplo, Alexa Fluor 488, una forma de fluoresceína sulfonada y químicamente modificada [ clarificación necesaria ] , fue diseñada para resolver los problemas bien conocidos del fotoblanqueo rápido y la característica de intensidad fluorescente dependiente del pH del tinte isotiocianato de fluoresceína . [ cita requerida ]
Color † [5] | Absorber (nm) [6] | Emitir (nm) [6] | MM (g / mol) [ cita requerida ] | ε (cm −1 M −1 ) [6] | Rendimiento cuántico [7] | |
---|---|---|---|---|---|---|
Alexa Fluor 350 | Azul | 346 | 442 | 410 | 19.000 | - |
- 405 | Azul | 401 | 421 | 1028 | 35.000 | - |
- 430 | Verde | 434 | 541 | 702 | 15.000 | - |
- 488 | Verde | 495 | 519 | 643 | 73.000 | 0,92 |
- 500 | Verde | 502 | 525 | 700 | 71.000 | - |
- 514 | Verde | 517 | 542 | 714 | 80.000 | - |
- 532 | Amarillo | 532 | 554 | 721 | 81.000 | 0,61 |
- 546 | Amarillo | 556 | 573 | 1079 | 112.000 | 0,79 |
- 555 | naranja | 555 | 565 | ~ 1250 | 155.000 | 0,1 |
- 568 | naranja | 578 | 603 | 792 | 88.000 | 0,69 |
- 594 | rojo | 590 | 617 | 820 | 92.000 | 0,66 |
- 610 | rojo | 612 | 628 | 1172 | 144.000 | - |
- 633 | Rojo lejano | 632 | 647 | ~ 1200 [8] | 159.000 | - |
- 635 | Rojo lejano | 633 | 647 | - | 140.000 | - |
- 647 | Rojo lejano | 650 | 665 | 1155.06 [9] | 270.000 | 0,33 |
- 660 | IR cercano | 663 | 690 | ~ 1100 | 132 000 | 0,37 |
- 680 | IR cercano | 679 | 702 | ~ 1150 | 183.000 | 0,36 |
- 700 | IR cercano | 702 | 723 | ~ 1400 | 205.000 | 0,25 |
- 750 | IR cercano | 749 | 775 | ~ 1300 | 290.000 | 0,12 |
- 790 | IR cercano | 782 | 805 | ~ 1750 | 260.000 | - |
† = color aproximado del espectro de emisión ε = coeficiente de extinción |
Comparación con otros tintes
Los tintes de la serie Alexa Fluor son menos sensibles al pH y más fotoestables que los tintes originales ( fluoresceína , rodamina , etc.) a partir de los cuales se sintetizaron. [ cita requerida ] Si bien se conocen los coeficientes de extinción de cada miembro de esta línea de tintes (ver tabla), los rendimientos cuánticos [ aclaración necesaria ] y los tiempos de vida [ aclaración necesaria ] no lo son. [ cita requerida ] Las comparaciones de brillo también son generalmente favorables. [ aclaración necesaria ] [ cita necesaria ]
Otras líneas de productos comerciales ofrecen alternativas a los miembros individuales de la línea de tintes Alexa Fluor. [ cita requerida ] Las comparaciones con otros tintes son menos consistentes, [ aclaración necesaria ] y también más "delicadas", [ aclaración necesaria ] dependiendo de las condiciones y técnicas utilizadas. [ editorializando ] [ cita requerida ] Tales comparaciones deben ser consideradas, dependiendo de las condiciones y técnicas utilizadas, y el rendimiento del tinte (señal, fondo, estabilidad) necesario. [ editorializando ] [ cita requerida ]
Estudios comparativos específicos
- Tinte Alexa Fluor 647 comparado con el tinte Cy5, [ aclaración necesaria ] } en una aplicación que implica conjugación con ADN. [10]
Otras lecturas
- Personal del NCBI (2013). "Base de datos de agentes de contraste e imagen molecular (MICAD), 2004-2013" . NCBI.NLM.NIH.gov . Bethesda, MD: Centro Nacional de Información Biotecnológica (NCBI) . Consultado el 1 de marzo de 2020 . Entradas de la base de datos escritas por expertos independientes, en los productos Alexa Fluor números 488, 647, 680, 700 y 750, así como en otras formas conjugadas.
- Hullin-Matsuda F .; Murate M .; Kobayashi T. (25 de septiembre de 2018). "Sondas de proteínas para visualizar esfingomielina y ceramida fosfoetanolamina". Chem. Phys. Lípidos . 216 : 132-141. doi : 10.1016 / j.chemphyslip.2018.09.002 . PMID 30194925 . Revisión de una aplicación de visualización de lípidos de Alexa Fluors.
- Kozma, E .; Jayasekara, PS; Squarcialupi, L .; Paoletta, S .; Moro, S .; Federico, S .; Spalluto, G .; Jacobson, KA (1 de enero de 2013). "Ligandos fluorescentes para receptores de adenosina" . Bioorg. Medicina. Chem. Lett . 23 (1): 26–36. doi : 10.1016 / j.bmcl.2012.10.112 . PMC 3557833 . PMID 23200243 .Revisión de un conjunto de flúores basados en Alexa Fluor (AF) 488, para estudios de unión a receptores. El artículo presenta las estructuras de AF488 y AF532, así como un gran conjunto de otros fluoróforos estándar Cy5 , Texas Red , EVOBlue, FITC , NBD, Dansyl , 1- Pyrene y varios complejos Bodipy.
Referencias
- ^ Personal de Invitrogen (6 de junio de 2007). "Tintes de Alexa Fluor que abarcan el espectro visible e infrarrojo" . Probes.Invitrogen.com . Archivado desde el original el 11 de agosto de 2007 . Consultado el 13 de agosto de 2007 .
- ^ Personal de ThermoFisher (26 de mayo de 2017). "Anticuerpos secundarios de Alexa Fluor" . ThermoFisher.com . Consultado el 26 de mayo de 2017 .
- ^ Personal de Invitrogen (6 de abril de 2006). "La serie Alexa Fluor Dye" . Probes.Invitrogen.com . Archivado desde el original el 15 de agosto de 2007 . Consultado el 13 de agosto de 2007 .
- ^ Editor Gerente Asociado (4 de noviembre de 2009). "Precios de Invitrogen por valor de $ 325 millones en billetes, mantiene el poder adquisitivo [reproducción no acreditada del artículo de BioWOrld del 30 de julio de 2003 ]" . AllBusiness.com . Archivado desde el original el 24 de agosto de 2010 . Consultado el 1 de marzo de 2020 . Ver también Huggett, Brady (30 de julio de 2003). "Invitrogen precios $ 325 millones en billetes, mantiene el poder adquisitivo" . BioWorld.com . Consultado el 1 de marzo de 2020 .
- ^ Personal de ThermoFisher (26 de febrero de 2020). "Selección de fluoróforos" . Thermofisher.com . Consultado el 1 de marzo de 2020 .
- ^ a b c Personal de LifeTechnologies (26 de febrero de 2020). "La serie Alexa Fluor Dye: nota 1.1" . LifeTechnologies.com . Consultado el 1 de marzo de 2020 .
- ^ Personal de Invitrogen (26 de abril de 2011). "Rendimientos cuánticos de fluorescencia (QY) y tiempos de vida (τ) para tintes Alexa Fluor [Tabla 1.5]" . Invitrogen.com . Consultado el 26 de abril de 2011 .
- ^ Personal de ThermoFisher (8 de enero de 2018). "Alexa Fluor 633 NHS Ester (succinimidyl Ester)" . ThermoFisher.com . Consultado el 8 de enero de 2018 .
- ^ Esteban, A .; Popp, MW; Vyas, VK; Strijbis, K .; Ploegh, HL; Fink, GR (23 de agosto de 2011). "El reconocimiento de hongos está mediado por la asociación de Dectin-1 y Galectin-3 en macrófagos" . Proc. Natl. Acad. Sci. USA . 108 (34): 14270-14275. doi : 10.1073 / pnas.1111415108 . PMC 3161568 . PMID 21825168 .
- ^ Ballard JL; Peeva VK; deSilva CJ; Lynch JL; Swanson NR (julio de 2007). "Comparación de Alexa Fluor y CyDye para el uso práctico de microarrays de ADN" . Biotecnología molecular . 36 (3): 175–83. doi : 10.1007 / s12033-007-0006-4 . PMID 17873405 . Consultado el 23 de octubre de 2010 .
enlaces externos
- Tabla de datos adicional con estructuras moleculares