Los anticuerpos primarios y secundarios son dos grupos de anticuerpos que se clasifican en función de si se unen a antígenos o proteínas directamente o se dirigen a otro anticuerpo (primario) que, a su vez, se une a un antígeno o proteína .
Primario
Un anticuerpo primario puede ser muy útil para la detección de biomarcadores de enfermedades como cáncer, diabetes, Parkinson y Alzheimer y se utilizan para el estudio de la absorción, distribución, metabolismo y excreción (ADME) y multirresistencia (MDR). ) de agentes terapéuticos.
Secundario
Los anticuerpos secundarios proporcionan detección y amplificación de señales, además de extender la utilidad de un anticuerpo a través de la conjugación con proteínas. [1] Los anticuerpos secundarios son especialmente eficaces en el inmunomarcaje . Los anticuerpos secundarios se unen a los anticuerpos primarios, que se unen directamente a los antígenos diana. En el inmunomarcado, el dominio Fab del anticuerpo primario se une a un antígeno y expone su dominio Fc al anticuerpo secundario. Luego, el dominio Fab del anticuerpo secundario se une al dominio Fc del anticuerpo primario. Dado que el dominio Fc es constante dentro de la misma clase de animales, solo se requiere un tipo de anticuerpo secundario para unirse a muchos tipos de anticuerpos primarios. Esto reduce el costo al marcar solo un tipo de anticuerpo secundario, en lugar de marcar varios tipos de anticuerpos primarios. Los anticuerpos secundarios ayudan a aumentar la sensibilidad y la amplificación de la señal debido a la unión de múltiples anticuerpos secundarios a un anticuerpo primario. [2]
Los anticuerpos secundarios de la molécula de inmunoglobulina completa son el formato más comúnmente utilizado, pero estos pueden procesarse enzimáticamente para permitir el refinamiento del ensayo. Los fragmentos F (ab ') 2 se generan mediante digestión con pepsina para eliminar la mayor parte del fragmento Fc, lo que evita el reconocimiento de los receptores Fc en las células vivas o de la proteína A o la proteína G. [3] La digestión con papaína genera fragmentos Fab, que eliminan fragmento Fc completo que incluye la región bisagra, produciendo dos restos Fab monovalentes. Pueden usarse para bloquear inmunoglobulinas endógenas en células, tejidos u otras superficies, y para bloquear las inmunoglobulinas expuestas en múltiples experimentos de marcado usando anticuerpos primarios de la misma especie. [4]
Aplicaciones
Los anticuerpos secundarios se pueden conjugar con enzimas tales como peroxidasa de rábano picante (HRP) o fosfatasa alcalina (AP); o tintes fluorescentes tales como isotiocianato de fluoresceína (FITC), derivados de rodamina , tintes Alexa Fluor ; u otras moléculas para su uso en diversas aplicaciones. Los anticuerpos secundarios se utilizan en muchos ensayos bioquímicos [5] que incluyen:
- ELISA , incluidas muchas pruebas de VIH
- Western blot
- Inmunotinción
- Inmunohistoquímica
- Inmunocitoquímica
Referencias
- ^ https://ptglab.com/news/blog/secondary-antibody-selection/ Guía de selección de anticuerpos secundarios
- ^ "Anticuerpos secundarios como sondas" . www.thermofisher.com . Consultado el 31 de mayo de 2017 .
- ^ "Anticuerpos secundarios del fragmento F (ab ') ₂ - Jackson ImmunoResearch" . www.jacksonimmuno.com . Consultado el 29 de enero de 2021 .
- ^ "Anticuerpos secundarios de fragmentos fab - Jackson ImmunoResearch" . www.jacksonimmuno.com . Consultado el 29 de enero de 2021 .
- ^ "Revisión de anticuerpos secundarios basada en publicaciones formales" . secundario-anticuerpo.com . Archivado desde el original el 17 de abril de 2008 . Consultado el 16 de abril de 2008 .