La cromatografía acuosa en fase normal ( ANP ) es una técnica cromatográfica que involucra la región de la fase móvil entre la cromatografía en fase reversa (RP) y la cromatografía orgánica en fase normal (ONP).
En la cromatografía de fase normal, la fase estacionaria es polar y la fase móvil es apolar . En fase inversa tenemos todo lo contrario; la fase estacionaria es no polar y la fase móvil es polar. Las fases estacionarias típicas para la cromatografía en fase normal son sílice o restos orgánicos con grupos funcionales ciano y amino . Para la fase inversa, los hidrocarburos de alquilo son la fase estacionaria preferida; El octadecilo (C18) es la fase estacionaria más común, pero el octilo (C8) y el butilo (C4) también se utilizan en algunas aplicaciones. Las designaciones de los materiales de fase reversa se refieren a la longitud de la cadena de hidrocarburos.
En la cromatografía de fase normal, los compuestos menos polares eluyen primero y los compuestos más polares eluyen al final. La fase móvil consta de un disolvente apolar como hexano o heptano mezclado con un disolvente ligeramente más polar como isopropanol , acetato de etilo o cloroformo . La retención disminuye a medida que aumenta la cantidad de disolvente polar en la fase móvil. En la cromatografía de fase inversa, los compuestos más polares eluyen primero y los compuestos más apolares eluyen al final. La fase móvil es generalmente una mezcla binaria de agua y un disolvente orgánico polar miscible como metanol , acetonitrilo o THF .. La retención aumenta a medida que aumenta la cantidad de disolvente polar (agua) en la fase móvil. La cromatografía de fase normal, un mecanismo de adsorción , se utiliza para el análisis de solutos fácilmente solubles en disolventes orgánicos, en función de sus diferencias polares, como aminas, ácidos, complejos metálicos, etc. La cromatografía de fase inversa, un mecanismo de partición, se utiliza habitualmente. para separaciones por diferencias no polares.
La "superficie de hidruro" distingue el material de soporte de otros materiales de sílice; la mayoría de los materiales de sílice utilizados para la cromatografía tienen una superficie compuesta principalmente por silanoles (-Si-OH). En una "superficie de hidruro", los grupos terminales son principalmente -Si-H. La superficie del hidruro también se puede funcionalizar con ácidos carboxílicos [1] y grupos alquilo de cadena larga. [2] Las fases móviles para ANPC se basan en un disolvente orgánico (como metanol o acetonitrilo) con una pequeña cantidad de agua; por tanto, la fase móvil es tanto "acuosa" (hay agua) como "normal" (menos polar que la fase estacionaria). Por lo tanto, los solutos polares (como los ácidos y las aminas) se retienen con mayor fuerza, disminuyendo la retención a medida que aumenta la cantidad de agua en la fase móvil.
Normalmente, la cantidad del componente apolar en la fase móvil debe ser del 60% o más, con el punto exacto de mayor retención dependiendo del soluto y el componente orgánico de la fase móvil. Una verdadera fase estacionaria de ANP podrá funcionar tanto en el modo de fase inversa como en el de fase normal, variando solo la cantidad de agua en el eluyente. Por lo tanto, se puede utilizar un continuo de disolventes desde 100% acuosos hasta orgánicos puros. Se ha demostrado la retención de ANP para una variedad de compuestos polares en las fases estacionarias basadas en hidruros. Investigaciones recientes han demostrado que los materiales de hidruro de sílice tienen una capa de agua muy delgada (aproximadamente 0,5 monocapa) en comparación con las fases HILIC que pueden tener de 6 a 8 monocapas. [3] Además, la carga negativa sustancial en la superficie de las fases de hidruro es el resultado de la adsorción del ión hidróxido del disolvente en lugar de los silanoles. [4]